一种亚硝胺标志物检测的前处理装置及应用
【技术领域】
[0001]本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种专用于尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置及应用。
【背景技术】
[0002]亚硝胺是亚硝基-no的氮原子与氨基中的氮原子连接的化合物，是四大食品污染物之一。食物、化妆品、啤酒中都含有亚硝胺。在熏腊食品中，含有大量的亚硝胺类物质，某些消化系统肿瘤，如食管癌的发病率与膳食中摄入的亚硝胺数量相关。当熏腊食品与酒共同摄入时，亚硝胺对人体健康的危害就会成倍增加。
[0003]对于生物标志物的研究有利于说明人类暴露于此类物质时健康风险的性质及程度。由于亚硝胺生物标志物含量较低，检测时干扰较大，对样品前处理的要求较高，因此，开发一种专用于尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置及使用方法尤为重要。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置及应用，用于尿液中亚硝胺的检测，具有快速、准确等优点。
[0005]本发明所采用的技术方案是:一种尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置由储液管、调节阀、净化柱、固定架、接液瓶和底座构成；储液管连接净化柱，在储液管和净化柱间设置调节阀，净化柱连接固定架，净化柱下部设置接液瓶，接液瓶由底座固定，储液管上有一细支管，在细支管上有橡皮塞。
[0006]所述的储液管主管上部有玻璃活塞，尺寸与储液管管径相匹配。
[0007]所述的调节阀上有小孔，可调节洗脱液流速。
[0008]所述的净化柱填料为亚硝胺分子印迹材料。
[0009]所述的接液瓶瓶身为圆形，瓶底为尖底，瓶口为磨口，可与旋转蒸发仪连接。
[0010]所述的底座为泡沫，用于固定接液瓶，座内形状与接液瓶相匹配。
[0011]尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置的应用如下:
取3ml酶解后的尿液至储液管中，加入50μ?的内标溶液，内标溶液为nnn_d4 (氘代n’ -亚硝基降烟碱)、nab-d4 (氘代n-亚硝基假木贼碱)、nat-d4 (氘代n-亚硝基新烟碱)和nnal-d3[氘代4-(n-甲基-n-亚硝氨基)-4-(3-吡啶基)-丁醇]混合，配制浓度为
0.1-0.2ng/ml，溶剂为乙腈，4种内标物质的质量比为1: 1: 1: 2，转动调节阀4，样品上到净化柱后，控制流速约为0.5-0.8ml/min ;静置5_8分钟，加iml 1mm乙酸铵溶液经储液管流入净化柱；随后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的水分推干；打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取l_2ml正庚烷至储液管中，转动调节阀，淋洗净化柱；然后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的正庚烷完全推干；最后打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取l_2ml甲醇:二氯甲烷1:9?1:8 (体积比)的溶液经储液管流入净化柱进行洗脱，重复2次，用接液瓶收集洗脱液，取下接液瓶蒸干后，用10kl乙腈复溶，进lc-ms/ms (液相色谱一串联质谱联用仪)分析。
[0012]本发明提供了一种尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置及应用，优势在于:
(i)步骤简单，该方法只需洗脱、浓缩后即可进样分析，处理步骤简单；同时该发明提供了一站式的前处理装置，无需复杂的净化柱抽干设备，易于推广；(2)净化效果好，该方法选用的净化柱和洗脱方式能够很好的出去杂质，大大降低了仪器分析时杂质对目标物色谱峰的干扰；(3)准确性高，该方法选用4种同位素内标，内标物贯穿样品洗脱、浓缩和进样分析过程的始终，增加了分析过程的准确性；(4)成本较低，该装置涉及的储液瓶、调节阀、固定架、净化柱、接液瓶和底座等，为实验室易得的材料制备而成，成本较低；(5)灵敏度高，该方法处理的样品经浓缩步骤后，目标物在待测溶液中的浓度得到了增加，样品分析灵敏度得到了提高；(6)环境友好，该装置设有玻璃塞和调节阀等，试剂不容易挥发，装置密封性好，该发明在提高分析准确性的同时，减少了前处理过程对环境的污染。
【附图说明】
[0013]图1为本发明尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置结构示意图。
[0014]图中:1-玻璃活塞，2-储液管，3-橡皮塞，4-调节阀，5-净化柱，6-固定架，7-接液瓶，8-底座。
【具体实施方式】
[0015]下面结合附图对本发明作进一步说明。
[0016]实施例1:
如图1所示，本发明的尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置由玻璃活塞1、储液管2、橡皮塞3，调节阀4、净化柱5、固定架6、接液瓶7和底座8构成；储液管连接净化柱，在储液管和净化柱间设置调节阀，净化柱连接固定架，净化柱下部设置接液瓶，接液瓶由底座固定，储液管上有一细支管，在细支管上有橡皮塞。
[0017]玻璃活塞i可取下，尺寸与储液管管径2相匹配，储液管2材质为玻璃，可储洗脱液1ml ;橡皮塞3，材质为橡胶，与储液管2下部向上的细管配合，用于推干净化柱5中的溶液后，打开玻璃活塞i时防止净化柱5中的材料由于负压受到损坏；调节阀4材质为玻璃，阀上有小孔，可调节洗脱液流速，尺寸与储液管2相匹配，密封性好；净化柱5，填料为亚硝胺分子印迹材料，规格为50mg ;固定架6，主要作用为固定净化柱5 ;接液瓶7，材质为玻璃，瓶身为圆形，瓶底为尖底，瓶口为磨口，可与旋转蒸发仪连接，规格为1ml ;底座8，材质为泡沫，主要作用为固定接液瓶7，尺寸与接液瓶7相匹配。
[0018]应用实施例1:
尿液中亚硝胺标志物检测的前处理装置的应用如下:
打开玻璃活塞，取3ml酶解后的尿液至储液管中，加入50μ?的内标溶液，内标溶液为nnn-d4、nab-d4、nat-d4和nnal_d3混合，配制浓度为0.1-0.2ng/ml，溶剂为乙腈，4种内标物质的质量比为1:1:1:2，转动调节阀，样品上到净化柱后控制流速约为0.5 ml/min ;静置5分钟，加iml 1mm乙酸铵溶液经储液管流入净化柱；随后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的水分推干；打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取iml正庚烷至储液管中，转动调节阀，淋洗净化柱；然后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的正庚烷完全推干；最后打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取iml甲醇:二氯甲烷1:9 (体积比)的溶液经储液管流入净化柱进行洗脱，重复2次，用底座上的接液瓶收集洗脱液，取下接液瓶，蒸干后用150μ?乙腈复溶，进lc-ms/ms分析。本发明用于尿液中亚硝胺标志物的检测，具有快速、准确等优点。
[0019] 应用实施例2:
打开玻璃活塞，取3ml酶解后的尿液至储液管中，加入50μ?的内标溶液，内标溶液为nnn-d4、nab-d4、nat-d4和nnal_d3混合，配制浓度为0.1-0.2ng/ml，溶剂为乙腈，4种内标物质的质量比为1:1:1:2，转动调节阀，样品上到净化柱后控制流速约为1.0 ml/min ;静置8分钟，加iml 1mm乙酸铵溶液经储液管流入净化柱；随后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的水分推干；打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取2ml正庚烷至储液管中，转动调节阀，淋洗净化柱；然后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的正庚烷完全推干；最后打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取2ml甲醇:二氯甲烷1:8 (体积比)的溶液经储液管流入净化柱进行洗脱，重复2次，用底座上的接液瓶收集洗脱液，取下接液瓶，蒸干后用150μ?乙腈复溶，进lc-ms/ms分析。本发明用于尿液中亚硝胺标志物的检测，具有快速、准确等优点。
【主权项】
1.一种亚硝胺标志物检测的前处理装置，其特征在于由储液管、调节阀、净化柱、固定架、接液瓶和底座构成；储液管连接净化柱，在储液管和净化柱间设置调节阀，净化柱连接固定架，净化柱下部设置接液瓶，接液瓶由底座固定，储液管上有一细支管，在细支管上有橡皮塞。2.根据权利要求1所述的亚硝胺标志物检测的前处理装置，其特征在于所述的储液管主管上部有玻璃活塞，尺寸与储液管管径相匹配。3.根据权利要求1所述的亚硝胺标志物检测的前处理装置，其特征在于所述的调节阀上有小孔，用于调节洗脱液流速。4.根据权利要求1所述的亚硝胺标志物检测的前处理装置，其特征在于所述的净化柱填料为亚硝胺分子印迹材料。5.根据权利要求1所述的亚硝胺标志物检测的前处理装置，其特征在于所述的接液瓶瓶身为圆形，瓶底为尖底，瓶口为磨口，与旋转蒸发仪连接。6.根据权利要求1所述的亚硝胺标志物检测的前处理装置，其特征在于所述的底座为泡沫，用于固定接液瓶，座内形状与接液瓶相匹配。7.权利要求1所述的亚硝胺标志物检测的前处理装置的应用，其特征在于: 取3ml酶解后的尿液至储液管中，加入50μ?的内标溶液，内标溶液为nnn_d4、nab_d4、nat-d4和nnal-d3混合，配制浓度为0.1-0.2ng/ml，溶剂为乙腈，4种内标物质的质量比为1:1:1: 2，转动调节阀，样品上到净化柱后，控制流速约为0.5-0.8ml/min ;静置5_8分钟，加iml 1mm乙酸铵溶液经储液管流入净化柱；随后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的水分推干；打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取l_2ml正庚烷至储液管中，转动调节阀，淋洗净化柱；然后完全打开调节阀，盖紧橡皮塞，盖上玻璃活塞并缓慢向下推，将净化柱上的正庚烷完全推干；最后打开橡皮塞，打开玻璃活塞，取l_2ml甲醇:二氯甲烷1:9?1:8，体积比，的溶液经储液管流入净化柱进行洗脱，重复2次，用接液瓶收集洗脱液，取下接液瓶蒸干后，用150μ?乙腈复溶，进lc-ms/ms分析。
【专利摘要】本发明是一种亚硝胺标志物检测的前处理装置及应用。该装置由储液管、玻璃活塞、橡皮塞、调节阀、净化柱、固定架、接液瓶和底座等构成。应用：取酶解后的尿液至储液管中，加入一定量的内标溶液，样品上到净化柱后，静置10分钟，加乙酸铵溶液经储液管流入净化柱；缓慢向下推，将净化柱上的水分推干；取正庚烷至储液管中淋洗净化柱；并缓慢向下推，将净化柱上的正庚烷完全推干；取甲醇：二氯甲烷溶液流入净化柱洗脱，重复2次，用接液瓶收集洗脱液，蒸干接液瓶后，用乙腈复溶，进lc-ms/ms分析。本发明用于尿液中亚硝胺的检测，具有快速、准确等优点。
【ipc分类】g01n30/06, g01n30/14
【公开号】cn105044252
【申请号】cn201510506636
【发明人】张凤梅, 刘志华, 司晓喜, 朱瑞芝, 申钦鹏, 刘春波, 何沛, 杨光宇, 王昆淼, 王晋, 苏钟璧
【申请人】云南中烟工业有限责任公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年8月18日