肿瘤液化的方法和组合物的制作方法
【专利说明】肿瘤液化的方法和组合物
[0001]相关申请
[0002]本申请是申请日为2010年12月15日、申请号为201080057506.6、发明名称为“肿瘤液化的方法和组合物”的分案申请。
技术领域
[0003]本发明涉及治疗疾病的免疫治疗方法。更具体地，本发明涉及用于导致肿瘤液态化的治疗疾病的药物和方法。
【背景技术】
[0004]所知的最精确、最强大和最安全的疾病预防和治疗机制，是在没有医疗介入的情况下，结合先天免疫元素和适应性免疫元素的与生倶来的“灭菌式(sterilizing)”免疫应答以清除身体内种类繁多的外源性病原体。免疫系统被设计为“记忆”清除过的外源性抗原以便对再次感染快速发动免疫应答。即使癌症患者的免疫系统，也可以识别外源性抗原(例如在病毒和细菌中发现的外源性抗原)并对其发动应答，足以从身体中彻底破坏和消除这些外源性抗原。这种灭菌式免疫应答的猛烈性和特异性可以被以下方式证明，未充分抑制的免疫系统可以在保留自身组织的同时完全破坏大的移植器官如肾、肝或心脏。这种针对外源性抗原的免疫力的破坏效果将有益于癌症治疗，如果这种效果可以被再定向到肿瘤。
[0005]免疫疗法致力于发展针对疾病特别是癌症利用、引导和控制免疫应答的方法。治疗癌症的疫苗是一种旨在用现有癌症训练患者的免疫系统，将其肿瘤细胞识别为外源性抗原的免疫疗法。如果肿瘤被免疫系统识别为外源性病原体，则理论上免疫应答可以被引发，该免疫应答可能导致免疫细胞破坏大的肿瘤、找出并破坏转移性肿瘤细胞，无论它们位于体内何处。成功的免疫治疗后，免疫系统的“记忆”清除过的外源性细胞的能力，使免疫系统在没有任何额外治疗下可以消除任何复发的癌细胞，很像免疫系统防止机会性感染。
[0006]治疗癌症的免疫治疗方法是目前癌症治疗策略的非常理想的替代疗法。与免疫介导的抗肿瘤机制不同，目前手术、放疗和化疗的方式在单细胞水平上不具有抗肿瘤特异性。因此，对于这些现有方式，清除所有肿瘤细胞在技术上是不可行的。如果没有清除所有肿瘤细胞，则治疗后癌症复发是一种普遍的结果。此外，目前的方式会导致对治疗的肿瘤抗性而不是肿瘤消除的“记忆”。
[0007]许多癌症疫苗领域的研究按照传统疫苗开发策略，重点研究寻找独特的肿瘤抗原(正常细胞没有)，称为肿瘤特异性抗原(tsa)，或寻找癌细胞上过度表达的肿瘤相关抗原(taa) 3aa是自身性抗原，因此不能将肿瘤识别为外源性的，而是实现了肿瘤细胞和正常细胞的免疫性区别。含有taa的癌症疫苗也会采用增强这些抗原的能力以刺激抗肿瘤免疫反应的方法。
[0008]癌症疫苗的发展已经沿着一条途径寻求方法以增强这些taa的免疫原性，从而它们可以被用于刺激治疗性免疫力。例如，与免疫性佐剂混合(如1?59，不完全?代皿(1’8佐剂，qs-21皂甙，和芽孢杆菌卡介苗[卡介苗])、更具免疫原性衍生物的合成、与免疫源性蛋白缀合和对树突细胞直接脉冲等方法均已被研究开发，但没有显著的成功。免疫疗法的成功率在临床仍然低得可怜。
[0009]尽管目前的免疫治疗方法几乎完全没有引起临床上显著的抗肿瘤应答，许多使用这些方法的临床试验目前仍然正在被工业界和学术界的赞助商进行。这些免疫疗法在临床上持续发展的原因之一，可能是因为对目前提供给晚期癌症患者高发病率治疗的替代疗法的需求。尽管免疫疗法尚未显示具有令人印象深刻的临床疗效，但是它已经被证实是一种低毒性的方法。另一方面，尽管在过去20年对高毒性化学疗法的应答率一直在升高，但对总体5年存活率的影响几乎没有。化学疗法显示出的对存活率的轻微增长在生活质量方面付出了严重代价。
【发明内容】
[0010]一种治疗组合物包括至少一种外源性抗原，至少一种i型炎症细胞因子和至少一种能够引致树突细胞成熟化的效应分子。
[0011]还公开了一种将肿瘤转化为液体状态的方法。该方法包括利用包含外源性抗原的治疗组合物进行预致敏(priming)，以便建立针对外源性抗原的thl免疫力，消融选定的肿瘤或复数个肿瘤，其中所述消融导致所述肿瘤的至少一部分死亡。
[0012]还公开了一种方法，该方法包括在邻近所述死亡肿瘤病变处建立炎症微环境，并激活适应性和先天免疫细胞。
[0013]公开了一种刺激和维持患者中thl应答的方法，该方法包括，利用治疗组合物对患者进行预致敏，以及对患者周期性给药该治疗组合物，其中，治疗组合物包含至少一种外源性抗原，至少一种能够引致树突细胞成熟化的效应分子和至少一种thl细胞因子。
[0014]还描述了另外一种方法用于液化患者肿瘤，该方法包括，利用治疗组合物对患者进行预致敏，使用导致肿瘤坏死的方法消融肿瘤，瘤内给药所述治疗组合物，以及输注该治疗组合物以激活适应性和先天免疫细胞，其中所述治疗组合物包含至少一种外源性抗原、至少一种能够引致树突细胞成熟化的效应分子和至少一种thl细胞因子。
[0015]另一种液化患者肿瘤的方法包括，在患者中建立从头thl应答，同时抑制th2应答；提供由癌细胞坏死性死亡所产生的肿瘤抗原的来源;提供与thl应答相一致的炎症环境，用于响应所述肿瘤抗原的树突细胞的成熟化；以及通过维持thl应答使肿瘤免疫逃逸机制无效。
【附图说明】
[0016]图1包含了几个ct扫描的图像；
[0017]图2是一个说明活检结果的图像。
【具体实施方式】
[0018]本发明描述了用于治疗癌症患者的治疗组合物和方法。本发明描述了适当对癌症患者给药，其可以实现系统性液化肿瘤的治疗药剂。该组合物一般包括以下主要成分:(1)外源性抗原，(2)1型细胞因子，和(3)能够引致树突细胞(dc)成熟化的效应分子，优选cd40l。
[0019]本发明还描述了液化肿瘤的方法，其通过刺激肿瘤患者有效thl免疫应答，用原位疫苗的方法产生抗肿瘤免疫力，进而激活患者先天和适应性免疫力同时使肿瘤免疫逃逸机制无效。该方法还包括抑制th2应答，通常可以由刺激thl免疫应答来完成。该方法进一步包括通过treg细胞实现免疫抑制机制的反向调节。
[0020]肿瘤的“液化(liquidat1n)”是指肿瘤减小或完全缺乏血液供给，同时ct扫描显示病灶为密度低或黑暗，相比于治疗前基线和活检样品显示凝固性坏死的证据。
[0021]此处描述涉及“治疗组合物”、“药剂”和“药物”。这些术语可以互换使用，并且是指可以对患者给药的组合物。
[0022]该治疗组合物一般包括外源性抗原。该外源性抗原可以是任何非自身性抗原，例如同种异体抗原。该外源性抗原必须以这样的方式提供，通过该方式该抗原可被专职抗原提呈细胞吞噬并被提呈给免疫系统从而被处理和提呈给t细胞。该抗原可以是活细胞的天然部分，也可以是利用分子生物学技术改变的或生物工程改造的。该抗原可以是可溶性的或者被固定表面上，活的有机体或细胞的完整部分，或减毒(attenuated)生物体的一部分。
[0023]多种细胞因子也可以被包含在治疗组合物中。术语细胞因子被用作不同群体可溶性蛋白和多肽的通用名称，这些蛋白和多肽通常以纳摩到皮摩浓度在正常或病理条件下作为调节因子调控单个细胞和组织的功能活动。这些蛋白也直接介导细胞间相互作用并调节发生在细胞外微环境中的进程。i型细胞因子参与炎症应答，ii型细胞因子参与体液免疫应答。i 型细胞因子包括，例如，i l-2、il-12、il-15、ifn- γ、tnf-α、tnf-β、gm-csf和c-c趋化因子。细胞因子成分可以是天然的或重组的细胞因子，或者可以是设计为与细胞因子的受体相互作用的生物工程分子(b1engineered molecular)。该细胞因子可以直接包含在治疗组合物中。可选地，该治疗组合物可以包含活细胞或其他可以产生和分泌细胞因子的成分。在一些示例性的实施例中，该治疗组合物包括产生和分泌细胞因子、处于激活状态的t细胞，从而作为该治疗组合物中细胞因子的来源。
[0024]该治疗组合物还包括引起非成熟树突细胞成熟化的因子。树突细胞免疫调节能力依赖于树突细胞的成熟化。抗原摄取和加工树突细胞后多种因子可诱导成熟化，包括:整个细菌或细菌产生的抗原(如脂多糖，lps);炎症细胞因子，如ifn-γ、tnf-a、il-l、gm-csf、选择性细胞表面受体(如cd40)的配体(ligat1n)和病毒性产物(如双链rna)。在他们从非成熟细胞转变为成熟细胞的过程中，树突细胞经历了一系列表型和功能的变化。树突细胞的成熟化过程大体上涉及主要组织相容性复合体(mhc)分子从细胞胞内腔室到树突细胞表面的重新分布，下调抗原的内在化，在表面共刺激分子表达的增加，形态变化(如树突的形成)，细胞骨架的重构，趋化因子、细胞因子和蛋白酶的分泌，以及粘附分子和趋化因子受体的表面表达。在一些优选的实施例中，cd40l是被包括在作为表示树突细胞成熟的一个因子。
[0025]在另一些实施例中，引致树突细胞成熟化的物质通过toll样受体(tlrs)提供信号。toll样受体表达在主要参与先天免疫的巨噬细胞和树突细胞上。目前，已经鉴定了