1.本发明是涉及寡核苷酸的制备方法的发明。
背景技术：
2.作为寡核苷酸的制备方法，广泛使用亚磷酰胺法和h-膦酸酯法。在进行氧化的亚磷酰胺法中，例如，如下述式所示，将亚磷酰胺(化合物(1))和核苷(化合物(2))缩合，合成具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体(化合物(3))，然后通过氧化该寡核苷酸前体，而得到寡核苷酸(化合物(4))。需要说明的是，本说明书中，有时将“式(1)所表示的化合物”简称为“化合物(1)”。其它式所表示的化合物、其它式所表示的基团等有时也可同样简称。
3.[化学式1]
[0004][0005]
[式中，dmtr表示4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基，i-pr表示异丙基，ce表示2-氰基乙基，base和base’表示可被保护的核酸碱基，以及r表示保护基或固相载体。]
[0006]
需要说明的是，亚磷酰胺法中，也可代替核苷而使核苷酸或寡核苷酸(例如，具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸)缩合。另外，亚磷酰胺法中，也可代替寡核苷酸前体的氧化，而进行寡核苷酸前体的硫化。
[0007]
进行氧化的h-膦酸酯法中，例如，如下述式所示，使h-膦酸酯(化合物(5))与新戊酰氯(pivcl)反应，合成活化的h-膦酸酯(化合物(6))，将其与核苷(化合物(7))缩合，合成具有膦酸酯键的寡核苷酸前体(化合物(8))，然后通过氧化该寡核苷酸前体，而得到寡核苷酸(化合物(9))。
[0008]
[化学式2]
[0009][0010]
[式中，dmtr表示4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基，n(et)3表示三乙胺，base和base’表示可被保护的核酸碱基，piv表示新戊酰基，以及r表示保护基或固相载体。]
[0011]
需要说明的是，h-膦酸酯法中，也可代替核苷而使核苷酸或寡核苷酸(例如，具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸)缩合。另外，h-膦酸酯法中，也可代替寡核苷酸前体的氧化，而进行寡核苷酸前体的硫化。
[0012]
除了如上述的代表性的亚磷酰胺法和h-膦酸酯法以外，还提出了各种寡核苷酸的制备方法。例如，在非专利文献1中，如下述式所示，公开了在大量的三苯基膦和大量的2,2
’‑
二吡啶基二硫化物的存在下，对h-膦酸酯(化合物1)和核苷(化合物2)进行缩合和氧化，来制备二核苷酸(化合物4)。
[0013]
[化学式3]
[0014][0015]
[式中，dmtr表示4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基，th表示胸腺嘧啶碱基，pph3表示三苯基膦，以及ac表示乙酰基。]
[0016]
另外，在非专利文献2和专利文献1中，未公开寡核苷酸的制备方法，但如下述式所示，公开了通过亚磷酸三乙酯(p(oet)3)来还原苯并异噻唑酮(benzoisothiazolone)衍生物(化合物1)(换言之，通过苯并异噻唑酮衍生物(化合物1)将亚磷酸三乙酯(p(oet)3)氧化，来形成磷酸三乙酯(o＝p(oet)3))。
[0017]
[化学式4]
[0018][0019]
现有技术文献
[0020]
专利文献
[0021]
专利文献1：国际公开第2017/070157号；
[0022]
非专利文献
[0023]
非专利文献1：arkivoc 2009(iii)264-273；
[0024]
非专利文献2：j.am.chem.soc.2016,138,6715-6718。
技术实现要素：
[0025]
发明所要解决的课题
[0026]
亚磷酰胺法中，作为用于氧化具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体(例如，所述式(3)所表示的化合物)的氧化剂，广泛使用碘。另外，h-膦酸酯法中，作为用于氧化具有膦酸酯键的寡核苷酸前体(例如所述式(8)所表示的化合物)的氧化剂，也广泛使用碘。
[0027]
在这一点上，本发明人发现了：当使用碘作为用于具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体的氧化剂时，生成由于前体的亚磷酸酯键部位与氧化剂作用后分解而形成的副产物(以下，有时记载为“缺损体”)。另外，还发现了：当使用碘来氧化除了亚磷酸酯键或膦酸酯键之外，还具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸前体时，生成由于所述硫代磷酸酯键转化成磷酸酯键而形成的副产物(以下，有时记载为“脱硫体”)。
[0028]
本发明是着眼于上述情况而完成的发明，其目的在于提供：与使用碘的情况相比，可抑制上述缺损体或脱硫体的生成的寡核苷酸的制备方法。
[0029]
用于解决课题的手段
[0030]
本发明人进行反复深入研究的结果，发现了：通过使用式(i)所表示的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)作为氧化剂，氧化具有亚磷酸酯键或膦酸酯键的寡核苷酸前体，可抑制上述副产物的生成。
[0031]
[化学式5]
[0032][0033]
[式中，
[0034]
x1表示单键、硫原子、氧原子、-s(＝o)
2-或-n(-r3)-，
[0035]
在x1为单键的情况下，r1表示卤素原子，且r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0036]
在x1为硫原子或-s(＝o)
2-的情况下，r1表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，且r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0037]
在x1为氧原子的情况下，r1和r2与它们所键合的硫原子和氧原子一起形成可被取代的杂环，以及
[0038]
在x1为-n(-r3)-的情况下，r1表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，以及r2和r3与它们所键合的硫原子和氮原子一起形成可被取代的杂环；或者r1和r3与它们所键合的氮原子一起形成可被取代的杂环，以及r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。]
[0039]
根据该见解，本发明如下所示。
[0040]
[1]一种方法，其是将具有亚磷酸酯键或膦酸酯键的寡核苷酸前体通过氧化剂进行氧化来制备具有磷酸酯键的寡核苷酸的方法，
[0041]
所述氧化剂为式(i)所表示的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)：
[0042]
[化学式6]
[0043][0044]
[式中，
[0045]
x1表示单键、硫原子、氧原子、-s(＝o)
2-或-n(-r3)-，
[0046]
在x1为单键的情况下，r1表示卤素原子，且r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0047]
在x1为硫原子或-s(＝o)
2-的情况下，r1表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，且r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0048]
在x1为氧原子的情况下，r1和r2与它们所键合的硫原子和氧原子一起形成可被取代的杂环，以及
[0049]
在x1为-n(-r3)-的情况下，r1表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，以及r2和r3与它们所键合的硫原子和氮原子一起形成可被取代的杂环；或者r1和r3与它们所键合的氮原子一起形成可被取代的杂环，以及r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。]。
[0050]
[2]所述[1]中所述的方法，其中，所述式(i)所表示的化合物为式(ia)所表示的化合物：
[0051]
[化学式7]
[0052][0053]
[式中，
[0054]r1a
表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0055]
环a表示5或6元的不饱和杂环，
[0056]y1a
表示-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0057]
m表示0～3的整数，
[0058]
m个的r
2a
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，和
[0059]
在m为2以上的整数的情况下，相邻的2个r
2a
可与环a一起形成可被取代的稠合环；和/或
[0060]
式(ib)所表示的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)：
[0061]
[化学式8]
[0062][0063]
式中，
[0064]r1b
表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0065]
环b表示6元的芳族烃环、或者5或6元的芳族杂环，
[0066]
n表示0～5的整数，
[0067]
n个的r
2b
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，和
[0068]
在n为2以上的整数的情况下，相邻的2个r
2b
可与环b一起形成可被取代的双环式稠合芳族杂环。]。
[0069]
[3]所述[2]中所述的方法，其中，所述式(ia)所表示的化合物为式(ic)所表示的化合物：
[0070]
[化学式9]
[0071][0072]
[式中，
[0073]r1c
表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0074]y1c
表示-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0075]
p表示0或1，
[0076]r2c
表示氢原子、可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
基；
[0091]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0092]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；
[0093]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基；
[0094]
(9)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的苯基；或
[0095]
(10)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～3个取代基取代的2-咪唑基。
[0096]
[8]所述[7]中所述的方法，其中，所述式(ib)所表示的化合物为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸、2,2
’‑
二硫基双(1h-咪唑)和2,2
’‑
二硫基双(1-甲基-1h-咪唑)。
[0097]
[9]所述[1]～[8]中任一项所述的方法，其中，所述氧化在水的存在下进行。
[0098]
[10]所述[1]～[9]中任一项所述的方法，其中，具有亚磷酸酯键或膦酸酯键的寡核苷酸前体为：
[0099]
(1)通过核苷、核苷酸或寡核苷酸与经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体；或
[0100]
(2)通过寡核苷酸与亚磷酰胺的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[0101]
[11]所述[1]～[10]中任一项所述的方法，其中，具有亚磷酸酯键或膦酸酯键的寡核苷酸前体是除了具有亚磷酸酯键或膦酸酯键之外、还具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[0102]
[12]一种方法，其是通过一锅法合成来制备寡核苷酸的方法，
[0103]
所述一锅法合成包括下述工序：
[0104]
工序(1)，在包含非极性溶剂的溶液中，将具有疏水性保护基的核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)与羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护、且经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)缩合，形成具有亚磷酸酯键和疏水性保护基、且羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的寡核苷酸前体(c)；
[0105]
工序(2)，在工序(1)后的溶液中添加所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的淬灭剂(i)，将所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)淬灭；
[0106]
工序(3)，在工序(2)后的溶液中添加氧化剂，将所述寡核苷酸前体(c)氧化，形成具有磷酸酯键和疏水性保护基、且羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的寡核苷酸(d)；
[0107]
工序(4)，在工序(3)后的溶液中添加氧化剂的淬灭剂(ii)，将氧化剂淬灭；
[0108]
工序(5)，在工序(4)后的溶液中添加酸，去除所述寡核苷酸(d)的在酸性条件下可
去除的临时保护基，形成具有未保护的羟基和疏水性保护基的寡核苷酸(e)；以及
[0109]
工序(7)，在包含所述寡核苷酸(e)的溶液中添加极性溶剂，使所述寡核苷酸(e)析出，以及
[0110]
所述氧化剂为式(i)所表示的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)：
[0111]
[化学式11]
[0112][0113]
[式中，
[0114]
x1表示单键、硫原子、氧原子、-s(＝o)
2-或-n(-r3)-，
[0115]
在x1为单键的情况下，r1表示卤素原子，且r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0116]
在x1为硫原子或-s(＝o)
2-的情况下，r1表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，且r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0117]
在x1为氧原子的情况下，r1和r2与它们所键合的硫原子和氧原子一起形成可被取代的杂环，以及
[0118]
在x1为-n(-r3)-的情况下，r1表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，以及r2和r3与它们所键合的硫原子和氮原子一起形成可被取代的杂环；或r1和r3与它们所键合的氮原子一起形成可被取代的杂环，以及r2表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。]。
[0119]
[13]所述[12]中所述的方法，其中，所述式(i)所表示的化合物为式(ia)所表示的化合物：
[0120]
[化学式12]
[0121][0122]
[式中，
[0123]r1a
表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0124]
环a表示5或6元的不饱和杂环，
[0125]y1a
表示-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0126]
m表示0～3的整数，
[0127]
m个的r
2a
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，和
[0128]
在m为2以上的整数的情况下，相邻的2个r
2a
可与环a一起形成可被取代的稠合环]；和/或
[0129]
式(ib)所表示的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)：
[0130]
[化学式13]
[0131][0132]
[式中，
[0133]r1b
表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0134]
环b表示6元的芳族烃环、或者5或6元的芳族杂环，
[0135]
n表示0～5的整数，
[0136]
n个的r
2b
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，和
[0137]
在n为2以上的整数的情况下，相邻的2个r
2b
可与环b一起形成可被取代的双环式稠合芳族杂环。]。
[0138]
[14]所述[13]中所述的方法，其中，所述式(ia)所表示的化合物为式(ic)所表示的化合物：
[0139]
[化学式14]
[0140][0141]
[式中，
[0142]r1c
表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0143]y1c
表示-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0144]
p表示0或1，
[0145]r2c
表示氢原子、可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
[0146]
环c表示6元的芳族烃环、6元的含氮芳族杂环、或含有氮原子的10元的双环式稠合芳族杂环，
[0147]
q表示0～4的整数，和
[0148]
q个的r
3c
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团。]。
[0149]
[15]所述[14]中所述的方法，其中，所述式(ic)所表示的化合物为选自下述的至少一种：2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-异丙基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮、2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、2-(2,6-二甲基苯基)-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、5-硝基-2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、5-硝基-2-(4-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、2-[1-甲基-1-(2-吡啶基)乙基]-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、2-苯基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮、2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮、2-(2,6-二甲基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮。
[0150]
[16]所述[14]中所述的方法，其中，所述环c为6元的芳族烃环或6元的含氮芳族杂环。
[0151]
[17]所述[16]中所述的方法，其中，所述式(ic)所表示的化合物为选自下述的至少一种：2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-异丙基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮、2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、2-(2,6-二甲基苯基)-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、5-硝基-2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮、5-硝基-2-(4-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮和2-[1-甲基-1-(2-吡啶基)乙基]-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮。
[0152]
[18]所述[13]～[17]中任一项所述的方法，其中，所述式(ib)所表示的化合物中的式(r1)所表示的基团为下述基团：
[0153]
[化学式15]
[0154][0155]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0156]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0157]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0158]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0159]
(5)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0160]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0161]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；
[0162]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基；
[0163]
(9)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的苯基；或
[0164]
(10)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～3个取代基取代的2-咪唑基。
[0165]
[19]所述[18]中所述的方法，其中，所述式(ib)所表示的化合物为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸、2,2
’‑
二硫基双(1h-咪唑)和2,2
’‑
二硫
基双(1-甲基-1h-咪唑)。
[0166]
[20]所述[12]～[19]中任一项所述的方法，其中，所述淬灭剂(i)为水。
[0167]
[21]所述[12]～[20]中任一项所述的方法，其中，所述淬灭剂(ii)为有机磷化合物。
[0168]
[22]所述[21]中所述的方法，其中，有机磷化合物为选自下述的至少一种：膦类、亚磷酸三酯、次亚膦酸酯、亚膦酸二酯和次膦酸酯。
[0169]
[23]所述[21]中所述的方法，其中，有机磷化合物为膦类。
[0170]
[24]所述[12]～[23]中任一项所述的方法，其中，所述一锅法合成进一步包括：在工序(3)后的溶液中添加芳族胺类。
[0171]
[25]所述[12]～[24]中任一项所述的方法，其中，所述一锅法合成进一步包括工序(6)：在工序(5)之后和工序(7)之前，向工序(5)后的溶液中添加碱。
[0172]
[26]所述[12]～[25]中任一项所述的方法，其中，所述寡核苷酸前体(c)是除了具有亚磷酸酯键之外、还具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[0173]
[27]式(in)所表示的化合物：
[0174]
[化学式16]
[0175][0176]
[式中，
[0177]
(1)r
1n
表示可被取代的苯基，p’表示0，环c”表示含有氮原子的10元的双环式稠合芳族杂环，且q’表示0；
[0178]
(2)r
1n
表示可被取代的苯基，p’表示0，环c”表示6元的含氮芳族杂环，q’表示1，且r
3n
表示c
1-6
全氟烷基；
[0179]
(3)r
1n
表示可被取代的苯基，p’表示1，环c”表示6元的含氮芳族杂环，且q’表示0；或
[0180]
(4)r
1n
表示被1个c
1-6
烷基取代的吡啶基，p’表示0，环c”表示6元的含氮芳族杂环，且q’表示0。]。
[0181]
[28]所述[27]中所述的化合物，其中，所述式(in)所表示的化合物为2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮或2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮。
[0182]
发明效果
[0183]
根据本发明，与使用碘的情况相比，可抑制上述的缺损体或脱硫体的生成，从而制备寡核苷酸。
具体实施方式
[0184]
1.术语
[0185]
首先，对本说明书中使用的术语进行说明。需要说明的是，除非另外指明，否则本说明书所记载的术语具有本发明所属技术领域的本领域技术人员通常理解的相同含义。
[0186]
1-1.关于基团的术语
[0187]
本说明书中，“c
a-b”是指碳数为a以上且b以下(a、b表示整数)。
[0188]
本说明书中，“卤素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。
[0189]
本说明书中，作为“烃基”，例如可举出：脂族烃基、芳香脂族烃基、单环式饱和烃基和芳族烃基等，作为其具体例，可举出：烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、亚烷基等一价基团和二价基团。
[0190]
本说明书中，“烷基(基团)”可以是直链状或支链状的任一种。作为“烷基(基团)”，可举出碳数1以上的烷基，在没有特别限定碳数范围的情况下，优选为c
1-10
烷基，更优选为c
1-6
烷基。作为其具体例，可举出：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。
[0191]
本说明书中，“烯基(基团)”可以是直链状或支链状的任一种。作为“烯基(基团)”，例如，可举出c
2-6
烯基等。具体而言，例如可举出：乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基等。
[0192]
本说明书中，“炔基(基团)”可以是直链状或支链状的任一种。作为“炔基(基团)”，例如可举出c
2-6
炔基等。作为其具体例，可举出：乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基等。
[0193]
本说明书中，“环烷基(基团)”是指环状烷基，例如可举出：c
3-8
环烷基，优选为c
3-6
环烷基。作为其具体例，可举出：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。
[0194]
本说明书中，“芳基(基团)”是指单环式或多环式(稠合)的芳族烃基，例如可举出：苯基、1-萘基、2-萘基、联苯基、1-蒽基、2-蒽基等c
6-14
芳基。其中，更优选c
6-10
芳基，特别优选苯基。
[0195]
本说明书中，“杂芳基(基团)”是指除了碳原子以外还含有选自氮原子、硫原子和氧原子的杂原子作为环构成原子的单环式或多环式(稠合)的芳族杂环基。作为杂芳基，例如可举出：5或6元的单环式杂芳基和8～14元的稠合多环式杂芳基。
[0196]
本说明书中，作为“5或6元的单环式杂芳基(基团)”，例如可举出：噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、(吡啶-n-氧化物)-基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基等。需要说明的是，本发明中，“杂芳基”包含下述式所示的(吡啶-n-氧化物)-基的基团(下述式中，*表示键合位置)。
[0197]
[化学式17]
[0198][0199]
本说明书中，作为“5或6元的单环式的含氮杂芳基(基团)”，例如可举出：上述的“5或6元的单环式杂芳基(基团)”中，含有至少1个以上氮原子作为环构成原子的基团。
[0200]
本说明书中，作为“8～14元的稠合多环式杂芳基(基团)”，例如可举出：苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、噻吩并吡啶基、呋喃并吡啶基、吡咯并吡啶基、吡唑并吡啶基、噁唑
并吡啶基、噻唑并吡啶基、咪唑并吡嗪基、咪唑并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、噁唑并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、吡唑并三嗪基、萘并[2,3-b]噻吩基、吩噁噻基(phenoxathinyl)、吲哚基、异吲哚基、1h-吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
[0201]
本说明书中，作为“8～14元的稠合多环式的含氮杂芳基(基团)”，例如可举出：上述的“8～14元的稠合多环式杂芳基(基团)”中，含有至少1个以上氮原子作为环构成原子的基团。
[0202]
本说明书中，作为“芳烷基(基团)”，可举出c
7-20
芳烷基，优选为c
7-16
芳烷基(c
6-10
芳基-c
1-6
烷基)。作为其具体例，可举出：苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、萘基甲基、1-萘基乙基、1-萘基丙基等。
[0203]
本说明书中，“亚烷基(基团)”可以是直链状或支链状的任一种。作为“亚烷基(基团)”，可举出碳数1以上的亚烷基，在没有特别限定碳数范围的情况下，优选为c
1-10
亚烷基，更优选为c
1-6
亚烷基。作为其具体例，可举出：亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基。
[0204]
本说明书中，“烷氧基(基团)”可以是直链状或支链状的任一种。作为“烷氧基(基团)”，可举出碳数1以上的烷氧基，在没有特别限定碳数范围的情况下，优选为c
1-10
烷氧基，更优选为c
1-6
烷氧基。作为其具体例，可举出：甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。
[0205]
本说明书中，“酰基(基团)”可以是直链状或支链状的任一种。作为“酰基(基团)”，例如可举出：c
1-6
烷酰基、c
7-13
芳酰基等。作为“酰基(基团)”的具体例，可举出：甲酰基、乙酰基、正丙酰基、异丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、新戊酰基、戊酰基、己酰基、苯甲酰基、萘甲酰基、乙酰丙酰基(levulinyl)等。“酰基(基团)”可被取代。
[0206]
本说明书中，“6元的芳族烃环”是指苯环。在“6元的芳族烃环”形成稠合环的部分的情况下，“6元的芳族烃环”是指形成稠合环的部分的苯环。
[0207]
本说明书中，作为“5或6元的芳族杂环”，例如可举出：噻吩环、呋喃环、1h-吡咯环、咪唑环、吡唑环、噻唑环、异噻唑环、噁唑环、异噁唑环、1,2,4-噁二唑环、1,3,4-噁二唑环、1,2,4-噻二唑环、1,3,4-噻二唑环、三唑环、四唑环、吡啶环、吡啶-n-氧化物环、吡嗪环、嘧啶环、哒嗪环、三嗪环等。需要说明的是，本发明中，“芳族杂环”包含吡啶-n-氧化物环。
[0208]
本说明书中，作为“4～8元的含氮杂环”，例如可举出：氮杂环丁烷环、吡咯烷环、二氢吡咯环、2h-吡咯环、哌啶环、哌嗪环、氮杂环庚烷环、氮杂环辛烷环、1h-吡咯环、咪唑环、吡唑环、噻唑环、异噻唑环、噁唑环、异噁唑环、1,2,4-噁二唑环、1,3,4-噁二唑环、1,2,4-噻二唑环、1,3,4-噻二唑环、三唑环、四唑环、吡啶环、吡啶-n-氧化物环、吡嗪环、嘧啶环、哒嗪环、三嗪环等。
[0209]
本说明书中，作为“5或6元的含氮杂环”，例如可举出：上述的“4～8元的含氮杂环”中，环构成原子为5或6个的含氮杂环。
[0210]
本说明书中，作为“6元的含氮芳族杂环”，例如可举出：吡啶环、吡啶-n-氧化物环、吡嗪环、嘧啶环、哒嗪环、三嗪环等。
[0211]
本说明书中，作为“双环式的稠合含氮杂环”，例如可举出：吡咯烷环、十氢异喹啉
乙氧基哌啶-4-基(cpep)等。
[0220]
本说明书中，作为“羟基的在酸性条件下可去除的临时保护基”，例如可举出：三苯甲基、9-苯基-9-呫吨基、9-苯基-9-噻吨基、1,1-双(4-甲氧基苯基)-1-苯基甲基(本说明书中有时记载为“4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基”)等双(c
1-6
烷氧基)三苯甲基，1-(4-甲氧基苯基)-1,1-二苯基甲基(本说明书中有时记载为“4-单甲氧基三苯甲基”)等单(c
1-18
烷氧基)三苯甲基等。从脱保护的容易程度等观点出发，所述临时保护基优选为4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基或4-单甲氧基三苯甲基，更优选为4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基。
[0221]
本说明书中，对“氨基的保护基”没有特别限定，可使用公知的保护基。作为该保护基，例如可举出：新戊酰基、新戊酰氧基甲基、乙酰基、三氟乙酰基、苯氧基乙酰基、4-异丙基苯氧基乙酰基、4-叔丁基苯氧基乙酰基、苯甲酰基、异丁酰基、(2-己基)癸酰基、二甲基甲脒基、1-(二甲基氨基)亚乙基、9-芴基甲氧基羰基。这些之中，可举出：乙酰基、苯氧基乙酰基、4-异丙基苯氧基乙酰基、苯甲酰基、异丁酰基、(2-己基)癸酰基、二甲基甲脒基和＝nc(r
11
)-n(r
12
)(r
13
)所表示的基团(式中，r
11
表示甲基，r
12
和r
13
分别独立地表示c
1-6
烷基；或者r
11
和r
12
成为一体可与它们所键合的碳原子和氮原子一起形成5或6元的含氮杂环。)等。作为所述＝nc(r
11
)-n(r
12
)(r
13
)所表示的基团，例如可举出：1-(二甲基氨基)亚乙基。
[0222]
本说明书中，对“磷酸基的保护基”没有特别限定，可使用公知的保护基。作为磷酸基的保护基，例如可举出以下的基团：
[0223]
下述式(pg-1)所表示的2-氰基乙基，
[0224]
下述式(pg-2)所表示的2-[2-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基氧基)乙基磺酰基]乙基，
[0225]
下述式(pg-3)所表示的[3-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基氧基)-2,2-二(乙氧基羰基)]丙基，
[0226]
下述式(pg-4)所表示的[3-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基氧基)-2,2-二(n-甲基氨基甲酰基)]丙基。
[0227]
磷酸基的保护基优选为2-氰基乙基。
[0228]
[化学式18]
[0229][0230]
[式中，me表示甲基，et表示乙基，dmtr表示4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基，且*表示与磷酸基的键合位置。]
[0231]
本说明书中，作为“疏水性保护基”，例如可使用国际公开第2017/104836号中记载为“锚”的保护基。
[0232]
疏水性保护基优选为下述式(pg-5)所表示的保护基：
[0233]
**l-y-z(pg-5)
[0234]
[式中，
[0235]
**表示与被保护的基团的键合位置；
[0236]
l表示单键、或者式(pg-i-1)或(pg-i-2)所表示的基团：
[0237]
[化学式19]
[0238][0239]
(式中，
[0240]
*表示与y的键合位置；
[0241]
**与上述同义；
[0242]r1p
和r
2p
分别独立地表示c
1-22
烃基；
[0243]
l1表示可被取代的二价c
1-22
烃基，所述二价c
1-22
烃基中的-ch
2-可用接头置换；
[0244]
l2表示单键、或***c(＝o)n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)****所表示的基团(式中，***表示与l1的键合位置，****表示与c＝o的键合位置，r
4p
表示c
1-22
亚烷基，r
3p
和r
5p
分别独立地表示氢原子或c
1-22
烷基，或者r
3p
和r
5p
成为一体可形成环。))；
[0245]
y表示单键、氧原子或nr(r表示氢原子、烷基或芳烷基。)；以及
[0246]
z表示式(pg-ii-1)～式(pg-ii-5)的任一式所表示的基团：
[0247]
[化学式20]
[0248][0249]
[式中，
[0250]
*表示键合位置；
[0251]
环a’表示苯环；
[0252]
环b’表示环己烷环；
[0253]
环d’表示萘环或双环式的稠合芳族杂环；
[0254]
在r
6p
为氢原子、或者rb为下述式(pg-iii)所表示的基团的情况下，环a’或环b’的r
6p
与r
8p
成为一体表示单键或-o-，环a’或环b’和环c’一起可形成稠合环；
c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-，进一步优选为-o-。
[0278]
所述“碳数10以上的直链状的脂族烃基经由单键或接头键合的烃基”优选为直链状的c
10-40
烷基、1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基，或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基。
[0279]
q优选为-o-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-，更优选为-o-。
[0280]
q’优选为单键、-o-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-，更优选为单键或-o-。
[0281]
式(pg-5)中，式(pg-i-1)所表示的l的优选方案为下述基团：
[0282]
l1为二价c
1-22
烃基或ch
2-o-1,4-亚苯基-o-ch2；和
[0283]
l2为单键、或***c(＝o)n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)****所表示的基团(式中，***表示与l1的键合位置，****表示与c＝o的键合位置，r
4p
表示c
1-6
亚烷基，r
3p
和r
5p
分别独立地表示氢原子或可被取代的c
1-6
烷基，或r
3p
和r
5p
成为一体可形成可被取代的c
1-6
亚烷基。)。
[0284]
式(pg-i-1)所表示的l的另一优选方案为下述基团：
[0285]
l1为二价c
1-22
烃基；和
[0286]
l2为单键。
[0287]
式(pg-i-1)所表示的l的另一优选方案为下述基团：
[0288]
l1为亚乙基；和
[0289]
l2为***c(＝o)n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)****所表示的基团(式中，***表示与l1的键合位置，****表示与c＝o的键合位置，r
4p
表示c
1-22
亚烷基，r
3p
和r
5p
分别独立地表示氢原子或c
1-22
烷基，或r
3p
和r
5p
成为一体可形成环。)。
[0290]
式(pg-i-1)所表示的l的另一优选方案为下述基团：
[0291]
l1为亚乙基；和
[0292]
l2为***c(＝o)n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)****所表示的基团(式中，***表示与l1的键合位置，****表示与c＝o的键合位置，n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)部分形成1,4-哌嗪二基。)。
[0293]
式(pg-i-1)所表示的l的另一优选方案为下述基团：
[0294]
l1为亚乙基；和
[0295]
l2为***c(＝o)n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)****所表示的基团(式中，***表示与l1的键合位置，****表示与c＝o的键合位置，r
4p
表示亚戊基或亚己基，r
3p
和r
5p
分别独立地表示氢原子或甲基。)。
[0296]
式(pg-i-1)所表示的l的另一优选方案为下述基团：
[0297]
l1为可具有取代基的亚苯基；和
[0298]
l2为***c(＝o)n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)****所表示的基团(式中，***表示与l1的键合位置，****表示与c＝o的键合位置，n(r
3p
)-r
4p-n(r
5p
)部分形成1,4-哌嗪二基。)。
[0299]
式(pg-i-1)所表示的l特别优选为琥珀酰基。
[0300]
其次，式(pg-5)中，对式(pg-i-2)所表示的l进行说明。
[0301]
式(pg-i-2)中的l1优选为二价c
6-10
芳族烃基，更优选为亚苯基。
[0302]
式(pg-i-2)中的l2优选为单键。
[0303]
作为式(pg-i-2)中的l1和l2的优选组合，是l1为二价c
6-10
芳族烃基、l2为单键的组合。作为式(pg-i-2)中的l1和l2的更优选组合，是l1为亚苯基、l2为单键的组合。
[0304]
式(pg-i-2)中的r
1p
和r
2p
分别独立地优选为c
1-22
烷基，更优选为c
1-10
烷基。
[0305]
式(pg-i-2)所表示的l的优选方案为下述基团：
[0306]r1p
和r
2p
分别独立地为c
1-22
烷基；
[0307]
l1为二价c
6-10
芳族烃基；和
[0308]
l2为单键。
[0309]
式(pg-i-2)所表示的l的另一优选方案为下述基团：
[0310]r1p
和r
2p
分别独立地为c
1-10
烷基；
[0311]
l1为亚苯基；和
[0312]
l2为单键。
[0313]
在式(pg-5)中的y为nr的情况下，所述r优选为氢原子、c
1-6
烷基或c
7-16
芳烷基，更优选为氢原子、甲基、乙基或苄基，进一步优选为氢原子。y优选为单键、氧原子或nr，更优选为单键或氧原子。
[0314]
式(pg-ii-1)中，r
6p
优选为氢原子。另外，式(pg-ii-1)中，ra和rb优选为氢原子、或成为一体形成氧代基。
[0315]
式(pg-ii-1)所表示的z的优选方案为下述基团：
[0316]
ra和rb为氢原子；
[0317]r6p
为氢原子；
[0318]
k为1～3的整数；
[0319]
k个的q为-o-；和
[0320]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基。
[0321]
式(pg-ii-1)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0322]
ra和rb为氢原子；
[0323]r6p
为氢原子；
[0324]
k为1～3的整数；
[0325]
k个的q为-o-；和
[0326]
k个的r
7p
分别独立地为1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基、或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基。
[0327]
式(pg-ii-1)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0328]
ra为氢原子；
[0329]r6p
为氢原子；
[0330]
k为1～3的整数；
[0331]
k个的q为-o-；和
[0332]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基；和
[0333]
rb为式(pg-iii)所表示的基团(式中，*为键合位置，j为0～3的整数，j个的q为-o-，j个的r
9p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基，且r
8p
为氢原子。)。
[0334]
式(pg-ii-1)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0335]
ra为氢原子；
[0336]
k为1～3的整数；
[0337]
k个的q为-o-；和
[0338]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基；和
[0339]
rb为式(pg-iii)所表示的基团(式中，*为键合位置，j为0～3的整数，j个的q为-o-，j个的r
9p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基，和r
8p
与r
6p
成为一体表示单键或-o-，环a’和环c’一起形成稠合环。)。
[0340]
式(pg-ii-1)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0341]
ra和rb成为一体形成氧代基；
[0342]r6p
为氢原子；
[0343]
k为1～3的整数；
[0344]
k个的q为-o-；和
[0345]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基。
[0346]
式(pg-ii-1)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0347]
ra和rb成为一体形成氧代基；
[0348]r6p
为氢原子；
[0349]
k为1～3的整数；
[0350]
k个的q为-o-；
[0351]
k个的r
7p
分别独立地为1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基、或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基。
[0352]
式(pg-ii-2)所表示的z的优选方案为下述基团：
[0353]r6p
为氢原子；
[0354]
k为1～3的整数；
[0355]
k个的q为-o-；和
[0356]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基、1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基、或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基。
[0357]
式(pg-ii-3)中，r
6p
优选为氢原子。另外，式(pg-ii-3)中，ra和rb优选为氢原子、或成为一体而形成氧代基。
[0358]
式(pg-ii-3)所表示的z的优选方案为下述基团：
[0359]
ra和rb为氢原子；
[0360]r6p
为氢原子；
[0361]
k为1～3的整数；
[0362]
k个的q为-o-；和
[0363]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基。
[0364]
式(pg-ii-3)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0365]
ra和rb为氢原子；
[0366]r6p
为氢原子；
[0367]
k为1～3的整数；
[0368]
k个的q为-o-；和
[0369]
k个的r
7p
分别独立地为1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基、或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基。
[0370]
式(pg-ii-3)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0371]
ra为氢原子；
[0372]r6p
为氢原子；
[0373]
k为1～3的整数；
[0374]
k个的q为-o-；和
[0375]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基；和
[0376]
rb为式(pg-iii)所表示的基团(式中，*为键合位置，j为0～3的整数，j个的q为-o-，j个的r
9p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基，且r
8p
为氢原子。)。
[0377]
式(pg-ii-3)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0378]
ra为氢原子；
[0379]
k为1～3的整数；
[0380]
k个的q为-o-；和
[0381]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基；和
[0382]
rb为式(pg-iii)所表示的基团(式中，*为键合位置，j为0～3的整数，j个的q为-o-，j个的r
9p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基，和r
8p
与r
6p
成为一体表示单键或-o-，环b’和环c’一起形成稠合环。)。
[0383]
式(pg-ii-3)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0384]
ra和rb成为一体形成氧代基；
[0385]r6p
为氢原子；
[0386]
k为1～3的整数；
[0387]
k个的q为-o-；和
[0388]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基。
[0389]
式(pg-ii-3)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0390]
ra和rb成为一体而形成氧代基；
[0391]r6p
为氢原子；
[0392]
k为1～3的整数；
[0393]
k个的q为-o-；
[0394]
k个的r
7p
分别独立地为1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基、或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基。
[0395]
式(pg-ii-4)所表示的z的优选方案为下述基团：
[0396]
环d’为萘环；
[0397]
ra和rb为氢原子；
[0398]
k为1～3的整数；
[0399]
k个的q’为-o-；和
[0400]
k个的r
7p
分别独立地为直链状的c
10-40
烷基、1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基、或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基。
[0401]
式(pg-ii-4)所表示的z的优选的另一方案为下述基团：
[0402]
环d’为吲哚环；
[0403]
ra和rb为氢原子；
[0404]
k为1；
[0405]
q’为单键；和
[0406]r7p
为直链状的c
10-40
烷基、1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的苄基、或1～3个的直链状的c
10-40
烷基经由-o-键合的环己基甲基；和
[0407]r7p
与吲哚环的氮原子键合。
[0408]
式(pg-ii-5)所表示的z的优选方案为下述基团：
[0409]
u为1或2；和
[0410]r10p
为c
4-10
全氟烷基。
[0411]
z优选为式(pg-ii-1)、式(pg-ii-2)或式(pg-ii-3)所表示的基团。
[0412]
保护基(pg-5)优选为下述基团：
[0413]
l为琥珀酰基，或式(pg-i-2)所表示的基团(式(pg-i-2)中，r
1p
和r
2p
分别独立地为c
1-10
烷基，l1为二价的亚苯基，l2为单键。)，和
[0414]
y-z为3,4,5-三(十八烷氧基)苄基氧基、3,5-双(二十二烷氧基)苄基氧基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氧基、3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)苄基氨基、2,4-双(二十二烷氧基)苄基氨基、3,5-双(二十二烷氧基)苄基氨基、双(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]苄基氨基、2,4-双(十二烷氧基)苄基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、双[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氨基、3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氨基、3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氧基、3,5-双(二十二烷氧基)环己基甲基氧基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氧基、3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氨基、2,4-双(二十二烷氧基)环己基甲基氨基、3,5-双(二十二烷氧基)环己基甲基氨基、双(4-二十二烷氧基环己基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基、2,4-双(十二烷氧基)环己基甲基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)环己基)甲基氨基、双[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)环己基]甲基氨基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基或3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基；或者
[0415]
l-y为单键或琥珀酰-1,4-哌嗪二基，和
[0416]
z为3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基、3,5-双(二十二烷氧基)苯甲酰基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苯甲酰基或3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苯甲酰基。
[0417]
保护基(pg-5)更优选为下述基团：
[0418]
l为琥珀酰基，和
[0419]
y-z为3,4,5-三(十八烷氧基)苄基氧基、3,5-双(二十二烷氧基)苄基氧基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氧基、3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)苄基氨基、2,4-双(二十二烷氧基)苄基氨基、3,5-双(二十二烷氧基)苄基氨基、双(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]苄基氨基、2,4-双(十二烷氧基)苄基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、双
[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氨基、3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苄基氨基、3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氧基、3,5-双(二十二烷氧基)环己基甲基氧基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氧基、3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氨基、2,4-双(二十二烷氧基)环己基甲基氨基、3,5-双(二十二烷氧基)环己基甲基氨基、双(4-二十二烷氧基环己基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基、2,4-双(十二烷氧基)环己基甲基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)环己基)甲基氨基、双[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)环己基]甲基氨基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基或3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基；或者
[0420]
l-y为单键或琥珀酰-1,4-哌嗪二基，和
[0421]
z为3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基、3,5-双(二十二烷氧基)苯甲酰基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苯甲酰基或3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)苄氧基]苯甲酰基。
[0422]
保护基(pg-5)进一步优选为下述基团：
[0423]
l为琥珀酰基，和
[0424]
y-z为3,4,5-三(十八烷氧基)苄基氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氧基、3,5-双(二十二烷氧基)环己基甲基氧基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氧基、3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氨基、2,4-双(二十二烷氧基)环己基甲基氨基、3,5-双(二十二烷氧基)环己基甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基、2,4-双(十二烷氧基)环己基甲基氨基、3,5-双[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基或3,4,5-三[3’,4’,5
’‑
三(十八烷氧基)环己基甲氧基]环己基甲基氨基；或者
[0425]
l-y为单键或琥珀酰-1,4-哌嗪二基，和
[0426]
z为3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基。
[0427]
保护基(pg-5)特别优选为下述基团：
[0428]
l为琥珀酰基，和
[0429]
y-z为3,4,5-三(十八烷氧基)苄基氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氧基或苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基；或者
[0430]
l-y为琥珀酰-1,4-哌嗪二基，和
[0431]
z为3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基。
[0432]
保护基(pg-5)最优选为下述基团：
[0433]
l为琥珀酰基，和
[0434]
y-z为3,4,5-三(十八烷氧基)苄基氧基或3,4,5-三(十八烷氧基)环己基甲基氧基；或者
[0435]
l-y为琥珀酰-1,4-哌嗪二基，和
[0436]
z为3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基。
[0437]
保护基(pg-5)和用于形成该保护基的化合物可通过已知的方法(例如国际公开第2017/104836号、国际公开第2019/131719号、国际公开第2020/235658号、国际公开第2021/039935号或国际公开第2021/198883号中所记载的方法)或基于该方法的方法形成或制备。
[0438]
1-2.关于寡核苷酸合成的术语
[0439]
本说明书中，“固相载体”只要在该领域中用于寡核苷酸合成的固相合成即可，没有特别限制，例如可举出：玻璃珠、树脂珠等。用作固相载体的支撑体或树脂可以是本技术领域中公知的、且适用于固相合成的任何支撑体或树脂。作为所述支撑体或树脂，例如可举出：聚苯乙烯支撑体(聚苯乙烯支撑体例如可通过对甲基二苯甲基胺(p－
メチルベンジル
－
ヒドリルアミン
)进一步功能化)、包封有硅藻土的聚二甲基丙烯酰胺(胃蛋白酶k)、二氧化硅、微孔性玻璃、两亲性的聚苯乙烯-聚乙二醇(peg)树脂、peg-聚酰胺、peg-聚酯树脂、wang-peg树脂、rink-酰胺peg树脂等。所述支撑体或树脂可被修饰。作为已修饰的支撑体或树脂，例如可举出：长链烷基氨基可控微孔玻璃(long chain alkylamino controlled pore glass，lcaa cpg)等。
[0440]
本说明书中，成为寡核苷酸的构成单元的“核苷”是指，核酸碱基通过n-糖苷化键合在糖(例如，2-脱氧核糖、核糖、2位碳原子和4位碳原子通过二价有机基团键合的2-脱氧核糖或核糖、3位碳原子和5位碳原子通过二价有机基团键合的2-脱氧核糖或核糖、3位碳原子和4位碳原子通过二价有机基团键合的2-脱氧核糖或核糖等)的1位上的化合物。
[0441]
本说明书中，“核酸碱基”只要是用于合成核酸的碱基即可，没有特别限制，例如可举出：胞嘧啶基(胞嘧啶碱基)、尿嘧啶基(尿嘧啶碱基)、胸腺嘧啶基(胸腺嘧啶碱基)等嘧啶碱基，腺嘌呤基(腺嘌呤碱基)、鸟嘌呤基(鸟嘌呤碱基)等嘌呤碱基。另外，“可被保护的核酸碱基”是指例如核酸碱基中的氨基、羰基等被保护。可被保护的核酸碱基优选为氨基可被上述的氨基保护基保护的核酸碱基，更优选为不具有氨基的核酸碱基、或具有被上述的氨基保护基保护的氨基的核酸碱基。
[0442]
通过使例如苯酚、2,5-二氯苯酚、3-氯苯酚、3,5-二氯苯酚、2-甲酰基苯酚、2-萘酚、4-甲氧基苯酚、4-氯苯酚、2-硝基苯酚、4-硝基苯酚、4-乙酰氨基苯酚、五氟苯酚、4-新戊酰氧基苄醇、4-硝基苯乙醇、2-(甲基磺酰基)乙醇、2-(苯基磺酰基)乙醇、2-氰基乙醇、2-(三甲基甲硅烷基)乙醇、二甲基氨基甲酰氯、二乙基氨基甲酰氯、乙基苯基氨基甲酰氯、1-吡咯烷甲酰氯、4-吗啉甲酰氯、二苯基氨基甲酰氯等与羰基反应，可保护羰基。
[0443]
本说明书中的“核酸碱基”中，也包含核酸碱基被取代基(例如，卤素原子、烷基、芳烷基、烷氧基、酰基、烷氧基烷基、羟基、氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、羧基、氰基、硝基等)取代的修饰核酸碱基(例如，8-溴腺嘌呤基、8-溴鸟嘌呤基、5-溴胞嘧啶基、5-碘胞嘧啶基、5-溴尿嘧啶基、5-碘尿嘧啶基、5-氟尿嘧啶基、5-甲基胞嘧啶基、8-氧代鸟嘌呤基、次黄嘌呤基(hypoxanthinyl)等)。
[0444]
本说明书中的“糖”也包含羟基被氨基置换的氨基糖和2位羟基被卤素原子置换的核糖。
[0445]
作为氨基糖，例如可举出：如下所示的3位羟基被氨基置换的2-脱氧核糖、3位羟基被氨基置换的核糖、和3位羟基被氨基置换且2位羟基被卤素置换的核糖(下述式中，xs表示卤素原子。)。
[0446]
[化学式22]
[0447][0448]
作为2位碳原子和4位碳原子通过二价有机基团键合的2-脱氧核糖或核糖、3位碳原子和5位碳原子通过二价有机基团键合的2-脱氧核糖或核糖、或3位碳原子和4位碳原子通过二价有机基团键合的2-脱氧核糖或核糖，例如可举出以下的化合物。
[0449]
[化学式23]
[0450][0451]
[式中，r表示氢原子、可被取代的烃基、可被取代的羟基或可被取代的氨基，且r’表示氢原子或羟基。]
[0452]
本说明书中的“磷酸基”不仅包含-o-p(＝o)(oh)2，还包含氧原子被硫原子或nh置换的基团(例如，-o-p(＝s)(oh)2、-nh-p(＝o)(oh)2、-nh-p(＝s)(oh)2)。另外，磷酸基中的羟基(-oh)被-or
p
(式中，r
p
表示有机基团(例如，磷酸基的保护基))置换的基团(例如，已保护的磷酸基)也包含在“磷酸基”中。
[0453]
本说明书中，“亚磷酸酯键”表示下述式(p1-1)所表示的键、或所述键中的氧原子被nh置换的下述式(p1-2)所表示的键(下述式中，*表示键合位置)。
[0454]
[化学式24]
[0455][0456]
本说明书中，“膦酸酯键”表示下述式(p2-1)所表示的键、或所述键中的氧原子被nh置换的下述式(p2-2)所表示的键(下述式中，*表示键合位置)。
[0457]
[化学式25]
[0458][0459]
本说明书中，“磷酸酯键”表示下述式(p3-1)所表示的键、或所述键中的氧原子被nh置换的下述式(p3-2)所表示的键(下述式中，*表示键合位置)。
[0460]
[化学式26]
[0461][0462]
本说明书中，“硫代磷酸酯键”表示下述式(p4-1)所表示的键、或所述键中的氧原子被nh置换的下述式(p4-2)所表示的键(下述式中，*表示键合位置)。
[0463]
[化学式27]
[0464][0465]
本说明书中，“核苷酸”是指磷酸基与核苷键合的化合物。需要说明的是，磷酸基的说明如上所述。
[0466]
本说明书中，“寡核苷酸”是指在核苷上连接有1个以上核苷酸的化合物。需要说明的是，“寡核苷酸”中不仅包含具有所述式(p3-1)所表示的磷酸酯键的寡核苷酸，还包含具有所述式(p3-2)所表示的磷酸酯键的寡核苷酸、具有所述式(p4-1)所表示的硫代磷酸酯键的寡核苷、和具有所述式(p4-2)所表示的硫代磷酸酯键的寡核苷。对本发明中的寡核苷酸中的核苷的数目没有特别限定，优选为2～50，更优选为2～30。
[0467]
本说明书中，“亚磷酰胺”是指亚磷酸二酯的单酰胺(p(or)2(nr2)，4个r分别独立地表示可被取代的烷基，所述nr2的二个r可彼此结合形成环状氨基)。
[0468]
本说明书中，“经亚磷酰胺化的核苷”是指通过在核苷上导入-x
n-p(or)(nr2)所表示的基团(式中，xn表示氧原子或nh，3个r分别独立地表示可被取代的烷基，所述nr2的二个r可彼此结合形成环状氨基)而得到的化合物。
[0469]
本说明书中，“经亚磷酰胺化的核苷酸”是指通过在核苷酸上导入-x
n-p(or)(nr2)所表示的基团(式中，xn表示氧原子或nh，3个r分别独立地表示可被取代的烷基，所述nr2的二个r可彼此结合形成环状氨基)而得到的具有-x
n-p(or)(nr2)所表示的基团和磷酸基的化合物。需要说明的是，所述磷酸基可被取代。
[0470]
本说明书中，“经亚磷酰胺化的寡核苷酸”是指通过在寡核苷酸上导入-x
n-p(or)(nr2)所表示的基团(式中，xn表示氧原子或nh，3个r分别独立地表示可被取代的烷基，所述nr2的二个r可彼此结合形成环状氨基)而得到的化合物。
[0471]
本说明书中，“具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体”是指寡核苷酸中的磷酸酯键被亚磷酸酯键置换的前体。通过氧化该前体，可制备具有磷酸酯键的寡核苷酸。
[0472]
具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体优选为：
[0473]
(1)通过核苷、核苷酸或寡核苷酸与经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体；或
[0474]
(2)通过寡核苷酸与亚磷酰胺的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[0475]
具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体更优选为：通过核苷、核苷酸或寡核苷酸与经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[0476]
具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体进一步优选为：通过具有疏水性保护基的核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)与羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护、且经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[0477]
所述缩合可以是从3’末端向5’末端的方向上进行寡核苷酸链延伸的缩合(以下记载为“3
’‑5’
缩合”)和从5’末端向3’末端的方向上进行寡核苷酸链延伸的缩合(以下记载为“5
’‑3’
缩合”)的任一种。以下，依次说明3
’‑5’
缩合和5
’‑3’
缩合的各自中优选的所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)和所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)。
[0478]3’‑5’
缩合中，作为所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)，例如可举出式(a-i)所表示的化合物(即，核苷或寡核苷酸)：
[0479]
[化学式28]
[0480][0481]
[式中，
[0482]
r表示0以上的整数；
[0483]
r 1个的base1分别独立地表示可被保护的核酸碱基；
[0484]
r 1个的x
n1
分别独立地表示氧原子或nh；
[0485]
r 1个的x
n2
分别独立地表示氢原子、卤素原子、可被保护的羟基、或与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团；
[0486]
r个的r
10
分别独立地表示氧原子或硫原子；
[0487]
r个的r
p1
分别独立地表示磷酸基的保护基；
[0488]
pg表示**l-y-z(式中，**表示与x
n1
的键合位置)、**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体；以及
[0489]
l、y和z的定义和说明与上述的保护基(pg-5)中的l、y和z的定义和说明相同。]。
[0490]
在r为0的情况下，化合物(a-i)为核苷，在r为1以上的情况下，化合物(a-i)为寡核苷酸。r优选49以下，更优选29以下，进一步优选19以下，特别优选4以下，最优选2以下。
[0491]
作为核酸碱基的base1的氨基优选被保护基保护。作为氨基的保护基，例如可举出上述的氨基的保护基，base1的氨基的保护基优选为乙酰基、苯氧基乙酰基、4-异丙基苯氧基乙酰基、苯甲酰基、异丁酰基、(2-己基)癸酰基、二甲基甲脒基、和＝nc(r
11
)-n(r
12
)(r
13
)所表示的基团(式中，r
11
表示甲基，r
12
和r
13
分别独立地表示c
1-6
烷基，或r
11
和r
12
成为一体可与它们所键合的碳原子和氮原子一起形成5或6元的含氮杂环。)。在化合物(a-i)具有多个氨基的情况下，氨基的保护基可仅为1种，也可为2种以上。
[0492]
作为x
n2
的卤素原子，优选氟原子、氯原子，更优选氟原子。
[0493]
作为x
n2
的可被保护的羟基的保护基，例如可举出上述的羟基的保护基，优选为甲基、2-甲氧基乙基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基、(2-氰基乙氧基)甲基、1-(2-氰基乙氧基)乙基。
[0494]
作为x
n2
的“与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团”，只要与核苷的2位碳原子和4位碳原子键合即可，没有特别限定。作为该二价有机基团，例如可举出：可被取代的c
2-7
亚烷基，以及由选自-o-、-nr
33-(r
33
表示氢原子或c
1-6
烷基)、-s-、-co-、-coo-、-oconr
34-(r
34
表示氢原子或c
1-6
烷基)和-conr
35-(r
35
表示氢原子或c
1-6
烷基)的二价接头与可被取代的c
1-7
亚烷基构成的二价有机基团等。作为c
1-7
亚烷基和c
2-7
亚烷基可具有的取代基，例如可举出亚甲基(ch2＝)。
[0495]
作为“与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团”，优选可被取代的c
2-7
亚烷基、-or
i-(ri表示与4位碳原子键合的c
1-6
亚烷基)、-o-nr
33-r
j-(rj表示与4位碳原子键合的c
1-6
亚烷基，r
33
表示与上述同义)、-o-r
k-o-r
l-(rk表示c
1-6
亚烷基，r
l
表示与4位碳原子键合交联的c
1-6
亚烷基)，更优选-or
i-(ri表示与上述同义)、-o-nr
33-r
j-(rj和r
33
表示与上述同义)、-o-r
k-o-r
l-(rk和r
l
表示与上述同义)。作为ri、rj、rk和r
l
所示的c
1-6
亚烷基，分别独立地优选亚甲基或亚乙基。
[0496]
作为“与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团”，更优选-o-ch
2-、-o-ch
2-ch
2-、-o-nr
33-ch
2-(r
33
表示与上述同义)、-o-ch
2-o-ch
2-，进一步优选-o-ch
2-、-o-ch
2-ch
2-、-o-nh-ch
2-、-o-n(ch3)-ch
2-、-o-ch
2-o-ch
2-(分别是左侧与2位碳原子键合，右侧与4位碳原子键合。)。
[0497]
r 1个的x
n2
分别独立地优选为氢原子、卤素原子或可被保护的羟基，更优选为氢原子、氟原子或可被保护的羟基。
[0498]
作为r个的r
p1
，例如可举出上述的磷酸基的保护基，优选为2-氰基乙基。
[0499]
在所述式(a-i)中的pg为**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体的情况下，化合物(a-i)是负载于固相载体上的核苷或寡核苷酸。pg优选为**l-y-z(式中，**表示与x
n1
的键合位置)或固相载体，更优选为**l-y-z。l、y和z的定义和说明与上述的保护基(pg-5)中的l、y和z的定义和说明相同。
[0500]3’‑5’
缩合中，作为所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)，例如可举出式(b-i)所表示的化合物(即，核苷或寡核苷酸)：
[0501]
[化学式29]
[0502][0503]
[式中，
[0504]
s表示0以上的整数；
[0505]
s 1个的base2分别独立地表示可被保护的核酸碱基；
[0506]
s 1个的x
n3
分别独立地表示氧原子或nh；
[0507]
s 1个的x
n4
分别独立地表示氢原子、卤素原子、可被保护的羟基、或与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团；
[0508]
q”表示羟基的在酸性条件下可去除的临时保护基；
[0509]
s个的r
14
分别独立地表示氧原子或硫原子；
[0510]
s 1个的r
p2
分别独立地表示磷酸基的保护基；以及
[0511]r15
和r
16
分别独立地表示烷基，或表示与相邻的氮原子成为一体而形成的5或6元的饱和环状氨基，所涉及的饱和环状氨基除了氮原子之外还可具有1个氧原子或硫原子作为环构成原子。]。
[0512]
在s为0的情况下，化合物(b-i)为经亚磷酰胺化的核苷，在s为1以上的情况下，化合物(b-i)为经亚磷酰胺化的寡核苷酸。化合物(b-i)中，s优选49以下，更优选29以下，进一步优选19以下，特别优选4以下，最优选2以下。
[0513]
作为核酸碱基的base2的氨基优选被保护基保护。作为该保护基，除了上述的氨基的保护基之外，还可使用上述的-l-y-z基。该保护基优选为上述的氨基的保护基，更优选为乙酰基、苯氧基乙酰基、4-异丙基苯氧基乙酰基、苯甲酰基、异丁酰基、(2-己基)癸酰基、二甲基甲脒基、和＝nc(r
11
)-n(r
12
)(r
13
)所表示的基团(式中，r
11
表示甲基，r
12
和r
13
分别独立地表示c
1-6
烷基，或r
11
和r
12
成为一体可与它们所键合的碳原子和氮原子一起形成5或6元的含氮杂环。)。在化合物(b-i)具有多个氨基的情况下，氨基的保护基可仅为1种，也可为2种以上。
[0514]
所述式(b-i)中的x
n4
的说明与所述式(a-i)中的x
n2
的说明相同。s 1个的x
n4
分别独立地优选为氢原子、卤素原子或可被保护的羟基，更优选为氢原子或可被保护的羟基。
[0515]
所述式(b-i)中的r
p2
的说明与所述式(a-i)中的r
p1
的说明相同。
[0516]
作为s 1个的r
p2
，例如可举出上述的磷酸基的保护基，优选为2-氰基乙基。
[0517]
所述式(b-i)中的r
15
和r
16
分别独立地优选为c
1-10
烷基、或与相邻的氮原子成为一体而形成的5或6元的饱和环状氨基，更优选为c
1-10
烷基，进一步优选为c
1-6
烷基。
[0518]
化合物(a-i)和化合物(b-i)可通过已知的方法(例如国际公开第2017/104836号中所记载的方法)或基于该方法的方法制备。
[0519]
通过化合物(a-i)和化合物(b-i)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体为下述式(c-i)所表示的化合物(下述式(c-i)的符号的定义和说明如上所述)。
[0520]
[化学式30]
[0521][0522]
在所述式(c-i)中的pg为**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体的情况下，化合物(c-i)为负载于固相载体上的寡核苷酸前体。pg优选为**l-y-z(式中，**表示与x
n1
的键合位置)或固相载体，更优选为**l-y-z。
[0523]
所述式(c-i)中，优选s个r
14
和r个r
10
的至少一个为硫原子。
[0524]5’‑3’
缩合中，作为所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)，例如可举出式(a-i’)所表示的化合物(即，核苷或寡核苷酸)：
[0525]
[化学式31]
[0526][0527]
[式中，
[0528]
r表示0以上的整数；
[0529]
r 1个的base1分别独立地表示可被保护的核酸碱基；
[0530]
r个的x
n1
分别独立地表示氧原子或nh；
[0531]
r 1个的x
n2
分别独立地表示氢原子、卤素原子、可被保护的羟基、或与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团；
[0532]
x
n5
表示羟基或氨基；
[0533]
r个的r
10
分别独立地表示氧原子或硫原子；
[0534]
r个的r
p1
分别独立地表示磷酸基的保护基；
[0535]
pg表示**l-y-z(式中，**表示与氧原子的键合位置)、**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体；以及
[0536]
l、y和z的定义和说明与上述的保护基(pg-5)中的l、y和z的定义和说明相同。]。
[0537]
式(a-i’)中的x
n5
优选为羟基。x
n5
以外的符号的说明与所述式(a-i)中的符号的说明相同。
[0538]
在所述式(a-i’)中的pg为**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体的情况下，化合物(a-i’)为负载于固相载体上的核苷或寡核苷酸。pg优选为**l-y-z(式中，**表示与氧原子的键合位置)或固相载体，更优选为**l-y-z。
[0539]5’‑3’
缩合中，作为所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)，例如可举出式(b-i’)所表示的化合物：
[0540]
[化学式32]
[0541][0542]
[式中，
[0543]
s表示0以上的整数；
[0544]
s 1个的base2分别独立地表示可被保护的核酸碱基；
[0545]
s个的x
n3
分别独立地表示氧原子或nh；
[0546]
s 1个的x
n4
分别独立地表示氢原子、卤素原子、可被保护的羟基、或与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团；
[0547]
x
n6
表示被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的羟基、或被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的氨基；
[0548]
s个的r
14
分别独立地表示氧原子或硫原子；
[0549]
s 1个的r
p2
分别独立地表示磷酸基的保护基；以及
[0550]r15
和r
16
分别独立地表示烷基，或表示与相邻的氮原子成为一体而形成的5或6元的饱和环状氨基，所涉及的饱和环状氨基除了氮原子之外还可具有1个氧原子或硫原子作为环构成原子。]。
[0551]
x
n6
优选为被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的羟基。x
n6
以外的符号的说明与所述式(b-i)中的符号的说明相同。
[0552]
化合物(a-i’)和化合物(b-i’)可通过已知的方法(例如国际公开第2017/104836号中所记载的方法)或基于该方法的方法制备。
[0553]
通过化合物(a-i’)和化合物(b-i’)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体为下述式(c-i’)所表示的化合物：
[0554]
[化学式33]
[0555][0556]
[式中，
[0557]
r表示0以上的整数；
[0558]
r 1个的base1分别独立地表示可被保护的核酸碱基；
[0559]
r 1个的x
n1
分别独立地表示氧原子或nh；
[0560]
r 1个的x
n2
分别独立地表示氢原子、卤素原子、可被保护的羟基、或与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团；
[0561]
r个的r
10
分别独立地表示氧原子或硫原子；
[0562]
r个的r
p1
分别独立地表示磷酸基的保护基；
[0563]
s表示0以上的整数；
[0564]
s 1个的base2分别独立地表示可被保护的核酸碱基；
[0565]
s个的x
n3
分别独立地表示氧原子或nh；
[0566]
s 1个的x
n4
分别独立地表示氢原子、卤素原子、可被保护的羟基、或与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团；
[0567]
x
n6
表示被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的羟基、或被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的氨基；
[0568]
s个的r
14
分别独立地表示氧原子或硫原子；
[0569]
s 1个的r
p2
分别独立地表示磷酸基的保护基；
[0570]
pg表示**l-y-z(式中，**表示与氧原子的键合位置)、**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体；以及
[0571]
l、y和z的定义和说明与上述的保护基(pg-5)中的l、y和z的定义和说明相同。](式中的符号的说明如上所述)。
[0572]
在所述式(c-i’)中的pg为**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体的情况下，化合物(c-i’)为负载于固相载体上的寡核苷酸前体。pg优选为**l-y-z(式中，**表示与氧原子的键合位置)或固相载体，更优选为**l-y-z。
[0573]
所述式(c-i’)中，优选r个r
10
和s个r
14
的至少一个为硫原子。
[0574]
其次，对“通过寡核苷酸与亚磷酰胺的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体”进行说明。作为所述前体，例如可举出式(γ-i)或式(γ-i’)所表示的化合物：
[0575]
[化学式34]
[0576][0577]
[式中，
[0578]
t表示1以上的整数；
[0579]
t 1个的base1分别独立地表示可被保护的核酸碱基；
[0580]
t 1个的x
n1
分别独立地表示氧原子或nh；
[0581]
t 1个的x
n2
分别独立地表示氢原子、卤素原子、可被保护的羟基、或与2位碳原子和4位碳原子键合的二价有机基团；
[0582]
t个的r
10
分别独立地表示氧原子或硫原子；
[0583]
t个的r
p1
和r
p3
分别独立地表示磷酸基的保护基；
[0584]rp4
表示具有被保护的氨基的烷基或磷酸基的保护基；
[0585]
pg表示**l-y-z(式中，**表示与x
n1
的键合位置或与氧原子的键合位置)、**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体；以及
[0586]
l、y和z的定义和说明与上述的保护基(pg-5)中的l、y和z的定义和说明相同。]。
[0587]
在所述式(γ-i)或式(γ-i’)中的pg为**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体的情况下，化合物(γ-i)或化合物(γ-i’)为负载于固相载体上的寡核苷酸前体。pg优选为**l-y-z(式中，**表示与氧原子的键合位置)或固相载体，更优选为**l-y-z。
[0588]
对所述式(γ-i)和式(γ-i’)中的符号进行说明。t优选49以下，更优选29以下，进一步优选19以下，特别优选4以下，最优选2以下。作为r
p3
和r
p4
的“磷酸基的保护基”，例如可举出上述的磷酸基的保护基。r
p3
优选为2-氰基乙基。作为r
p4
的“具有被保护的氨基的烷基”中的“被保护的氨基”，例如可举出：被上述的氨基的保护基保护的氨基。r
p4
的“具有被保护的氨基的烷基”优选为具有被保护的氨基的c
1-6
烷基，更优选为6-(三氟乙酰氨基)己基。r
p4
优选为2-氰基乙基或6-(三氟乙酰氨基)己基。其他符号的说明如上所述。
[0589]
本说明书中，“具有膦酸酯键的寡核苷酸前体”是指寡核苷酸中的磷酸酯键被膦酸酯键置换的前体。通过氧化该前体，可制备具有磷酸酯键的寡核苷酸。
[0590]
具有膦酸酯键的寡核苷酸前体优选为通过具有疏水性保护基的核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)与羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的h-膦酸酯(b)的缩合而得到的具有膦酸酯键的寡核苷酸前体。所述h-膦酸酯(b)可以以三乙胺盐等盐的形态使用。
[0591]
所述缩合可以是3
’‑5’
缩合和5
’‑3’
缩合的任一种。依次说明3
’‑5’
缩合和5
’‑3’
缩合的各自中优选的所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)和所述h-膦酸酯(b)。
[0592]3’‑5’
缩合中，所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)优选为上述的化合物(a-i)。
[0593]3’‑5’
缩合中，作为所述h-膦酸酯(b)，例如可举出下述式(b-i)所表示的化合物(下述式(b-i)中的符号的定义和说明与所述式(b-i)中的符号的定义和说明相同。)。
[0594]
[化学式35]
[0595][0596]
化合物(b-i)可通过已知的方法(例如acta biochimica polonica.1998,45,907-915.中所记载的方法)或基于该方法的方法制备。
[0597]
通过化合物(a-i)和化合物(b-i)的缩合而得到的具有膦酸酯键的寡核苷酸前体为下述式(c-i)所表示的化合物(下述式(c-i)中的符号的定义和说明与所述式(c-i)中的符号的定义和说明相同。)。
[0598]
[化学式36]
[0599][0600]
在所述式(c-i)中的pg为**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体的情况下，化合物(c-i)为负载于固相载体上的寡核苷酸前体。pg优选为**l-y-z(式中，**表示与x
n1
的键合位置)或固相载体，更优选为**l-y-z。
[0601]
所述式(c-i)中，优选s个r
14
和r个r
10
的至少一个为硫原子。
[0602]5’‑3’
缩合中，所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)优选为上述的化合物(a-i’)。
[0603]5’‑3’
缩合中，作为h-膦酸酯(b)，例如可举出下述式(b-i’)所表示的化合物(下述式(b-i’)的符号的定义和说明与所述式(b-i’)中的符号的定义和说明相同)。
[0604]
[化学式37]
[0605][0606]
化合物(b-i’)可通过已知的方法(例如phosphorus chemistry ii.topics in current chemistry,vol 361.springer,cham.recent advances in h-phosphonate chemistry中所记载的方法)或基于该方法的方法制备。
[0607]
通过化合物(a-i’)和化合物(b-i’)的缩合而得到的具有膦酸酯键的寡核苷酸前体为下述式(c-i’)所表示的化合物(下述式(c-i’)中的符号的定义和说明与所述式(c-i’)
中的符号的定义和说明相同。)。
[0608]
[化学式38]
[0609][0610]
在所述式(c-i’)中的pg为**l-y-sp(式中，**表示与x
n1
的键合位置，和sp表示固相载体)或固相载体的情况下，化合物(c-i)为负载于固相载体上的寡核苷酸前体。pg优选为**l-y-z(式中，**表示与氧原子的键合位置)或固相载体，更优选为**l-y-z。
[0611]
所述式(c-i’)中，优选r个r
10
和s个r
14
的至少一个为硫原子。
[0612]
本说明书中，“一锅法合成”是指下述的合成：由包括合成中间体的工序和合成目标最终产物的工序的多工序组成的合成，且不分离所述中间体。需要说明的是，所述“合成中间体的工序”可仅为一个，也可为二个以上。
[0613]
2.本发明的制备方法
[0614]
以下，对本发明的制备方法进行说明。本发明的制备方法的特征在于，使用下述式(i)所表示的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)作为氧化剂，将具有亚磷酸酯键或膦酸酯键的寡核苷酸前体氧化，来制备具有磷酸酯键的寡核苷酸。化合物(i)可仅使用1种，也可并用2种以上。
[0615]
[化学式39]
[0616][0617]
2-1.氧化剂
[0618]
以下，对本发明的制备方法中使用的氧化剂、即化合物(i)(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)进行说明。
[0619]
所述式(i)中的x1为单键、硫原子、氧原子、-s(＝o)
2-或-n(-r3)-。
[0620]
在x1为单键的情况下，所述式(i)中的r1为卤素原子，且所述式(i)中的r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。
[0621]
在x1为硫原子或-s(＝o)
2-的情况下，所述式(i)中的r1为可被取代的烷基、可被取
代的芳基或可被取代的杂芳基，且所述式(i)中的r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。
[0622]
在x1为氧原子的情况下，所述式(i)中的r1和r2与它们所键合的硫原子和氧原子一起形成可被取代的杂环。
[0623]
在x1为-n(-r3)-的情况下，
[0624]
(1)所述式(i)中的r1为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，以及所述式(i)中的r2和r3与它们所键合的硫原子和氮原子一起形成可被取代的杂环；或
[0625]
(2)所述式(i)中的r1和r3与它们所键合的氮原子一起形成可被取代的杂环，以及所述式(i)中的r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。
[0626]
2-1-1.化合物(ia)和化合物(ib)
[0627]
化合物(i)之中，优选下述化合物：
[0628]
所述式(i)中的x1为-n(-r3)-，r1为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，以及r2和r3与它们所键合的硫原子和氮原子一起形成可被取代的杂环的化合物(本说明书中记载为“化合物(ia)”)；以及
[0629]
所述式(i)中的x1为硫原子，r1为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，且r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)(以下，记载为化合物(ib)”)。
[0630]
即，化合物(i)之中，优选下述化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)：
[0631]
x1为硫原子或-n(-r3)-，
[0632]
r1为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，
[0633]
在x1为硫原子的情况下，r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，以及
[0634]
在x1为-n(-r3)-的情况下，r2和r3与它们所键合的硫原子和氮原子一起形成可被取代的杂环。
[0635]
以下，首先，对化合物(ia)和化合物(ib)进行说明。
[0636]
2-1-1a.化合物(ia)
[0637]
首先，对化合物(ia)进行说明。化合物(ia)中，所述式(i)中的r1为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，优选为可被取代的c
1-10
烷基、可被取代的苯基、可被取代的5或6元的单环式杂芳基或可被取代的8-14元的稠合多环式杂芳基。
[0638]
化合物(ia)中，所述式(i)中的r2和r3与它们所键合的硫原子和氮原子一起形成可被取代的杂环。
[0639]
2-1-1a-1.化合物(ia)
[0640]
化合物(ia)优选为下述式(ia)所表示的化合物。化合物(ia)可仅使用1种，也可并用2种以上。
[0641]
[化学式40]
[0642][0643]
以下，对化合物(ia)的各基团进行说明。
[0644]
所述式(ia)中的r
1a
为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，优选为可被取代的c
1-10
烷基、可被取代的苯基、或者可被取代的5或6元的单环式杂芳基。
[0645]
所述式(ia)中的环a为5或6元的不饱和杂环。所述式(ia)中的y
1a
为-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，优选为-c(＝o)-。
[0646]
所述式(ia)中的m为0～3的整数，且m个的r
2a
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，优选为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团。在此，“m为0”是指不存在r
2a
。
[0647]
在所述式(ia)中的m为2以上的整数情况下，相邻的2个r
2a
可与环a一起形成可被取代的稠合环。
[0648]
作为环a的5或6元的不饱和杂环是下述式(r2)～(r4)的任一式所表示的环[式中的符号的定义如上所述]。需要说明的是，下述式(r2)～(r4)中，省略了r
2a
。
[0649]
[化学式41]
[0650][0651]
相邻的2个r
2a
与环a所形成的稠合环优选为双环式或三环式的稠合环，更优选为双环式的稠合环。作为该稠合环，例如可举出：下述式(r5)～(r25)的任一式所表示的环。该稠合环可被取代。
[0652]
[化学式42]
[0653][0654]
[化学式43]
[0655][0656]
2-1-1a-2.化合物(ic)
[0657]
化合物(ia)优选为下述式(ic)所表示的化合物。
[0658]
[化学式44]
[0659][0660]
以下，对化合物(ic)的各基团进行说明。
[0661]
所述式(ic)中的r
1c
为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，优选为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的苯基、或者可被取代的5或6元的单环式杂芳基。
[0662]
在本发明的制备方法的一个方案中，r
1c
优选为下述基团：
[0663]
(1)可被选自可被取代的苯基和可被取代的5或6元的单环式杂芳基的1或2个取代基取代的c
1-6
烷基；
[0664]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的苯基；或
[0665]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的5或6元的单环式杂芳基。
[0666]
在本发明的制备方法的另一个方案中，r
1c
优选为下述基团：
[0667]
(1)可被选自可被取代的苯基和可被取代的5或6元的单环式杂芳基的1或2个取代基取代的c
1-6
烷基；
[0668]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的苯基；或
[0669]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的吡啶基。
[0670]
在本发明的制备方法的另一个方案中，r
1c
优选为下述基团：
[0671]
(1)可被1或2个吡啶基取代的c
1-6
烷基、
[0672]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的苯基；或
[0673]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的吡啶基。
[0674]
在本发明的制备方法的另一个方案中，r
1c
优选为下述基团：
[0675]
(1)可被1或2个吡啶基取代的c
1-6
烷基；
[0676]
(2)可被1或2个c
1-6
烷基取代的苯基；或
[0677]
(3)吡啶基(特别是，2-吡啶基或4-吡啶基)。
[0678]
在本发明的制备方法的另一个方案中，r
1c
优选为下述基团：
[0679]
(1)c
1-6
烷基；
[0680]
(2)可被选自c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基和卤素原子的1或2个取代基取代的苯基；或
[0681]
(3)被1个c
1-6
烷基取代的吡啶基(例，4-甲基-2-吡啶基)。
[0682]
所述式(ic)中的y
1c
为-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，优选为-c(＝o)-。
[0683]
所述式(ic)中的p为0或1，优选为0。在此，“p为0”是指式(ic)中的-ch(r
2c
)-不存在。
[0684]
所述式(ic)中的r
2c
为氢原子、可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，优选为氢原子、可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团。
[0685]
所述式(ic)中的环c为6元的芳族烃环、6元的含氮芳族杂环、或含有氮原子的10元的双环式稠合芳族杂环。
[0686]
在本发明的制备方法的一个方案中，所述环c优选为6元的芳族烃环(即，苯环)或6元的含氮芳族杂环，更优选为苯环或吡啶环，进一步优选为吡啶环。
[0687]
在本发明的制备方法的另一个方案中，所述环c优选为苯环、吡啶环或喹啉环。
[0688]
所述式(ic)中的q为0～4的整数，优选为0～2的整数，更优选为0或1。在此，“q为0”是指不存在r
3c
。
[0689]
所述式(ic)中的q个的r
3c
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团。
[0690]
在本发明的制备方法的一个方案中，q个的r
3c
分别独立地优选为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团，更优选为卤素原子或硝基，进一步优选为硝基。
[0691]
在本发明的制备方法的另一个方案中，q个的r
3c
分别独立地优选为吸电子性基团，更优选为卤素原子、c
1-6
全氟烷基或硝基，进一步优选为c
1-6
全氟烷基或硝基，特别优选为三氟甲基。
[0692]
作为适合的化合物(ic)，可举出以下的化合物。以下的化合物可仅使用任一种，也可并用2种以上。
[0693]
(化合物(ic-i))
[0694]
所述式(ic)中的、
[0695]r1c
为：
[0696]
(1)可被选自可被取代的苯基和可被取代的5或6元的单环式杂芳基的1或2个取代
基取代的c
1-6
烷基；
[0697]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的苯基；或
[0698]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的5或6元的单环式杂芳基，
[0699]y1c
为-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0700]
p为0或1，
[0701]r2c
为氢原子、可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
[0702]
环c为6元的芳族烃环或6元的含氮芳族杂环，
[0703]
q为0～4的整数，以及
[0704]
q个的r
3c
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-i)”)。
[0705]
(化合物(ic-ii))
[0706]
所述式(ic)中的、
[0707]r1c
为：
[0708]
(1)可被选自可被取代的苯基和可被取代的5或6元的单环式杂芳基的1或2个取代基取代的c
1-6
烷基；
[0709]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的苯基；或
[0710]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的吡啶基，
[0711]y1c
为-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0712]
p为0或1，
[0713]r2c
为氢原子、可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团，
[0714]
环c为6元的芳族烃环或6元的含氮芳族杂环，
[0715]
q为0～2的整数，以及
[0716]
q个的r
3c
分别独立地为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-ii)”)。
[0717]
(化合物(ic-iii))
[0718]
所述式(ic)中的、
[0719]r1c
为：
[0720]
(1)可被1或2个吡啶基取代的c
1-6
烷基；
[0721]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的苯基；或
[0722]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的吡啶基，
[0723]y1c
为-c(＝o)-，
[0724]
p为0，
[0725]
环c为苯环或吡啶环，
[0726]
q为0～2的整数，
[0727]
q个的r
3c
分别独立地为卤素原子或硝基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-iii)”)。
[0728]
(化合物(ic-iv))
[0729]
所述式(ic)中的、
[0730]r1c
为：
[0731]
(1)可被1或2个吡啶基取代的c
1-6
烷基；
[0732]
(2)可被1或2个c
1-6
烷基取代的苯基；或
[0733]
(3)吡啶基(特别是，2-吡啶基或4-吡啶基)，
[0734]y1c
为-c(＝o)-，
[0735]
p为0，
[0736]
环c为苯环或吡啶环，
[0737]
q为0～2的整数，以及
[0738]
q个的r
3c
为硝基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-iv)”)。
[0739]
(化合物(ic-i’))
[0740]
所述式(ic)中的、
[0741]r1c
为：
[0742]
(1)可被选自可被取代的苯基和可被取代的5或6元的单环式杂芳基的1或2个取代基取代的c
1-6
烷基；
[0743]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的苯基；或
[0744]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的5或6元的单环式杂芳基，
[0745]y1c
为-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0746]
p为0或1，
[0747]r2c
为氢原子、可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
[0748]
环c为6元的芳族烃环、6元的含氮芳族杂环、或含有氮原子的10元的双环式稠合芳族杂环，
[0749]
q为0～4的整数，以及
[0750]
q个的r
3c
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-i’)”)。
[0751]
(化合物(ic-ii’))
[0752]
所述式(ic)中的、
[0753]r1c
为：
[0754]
(1)可被选自可被取代的苯基和可被取代的5或6元的单环式杂芳基的1或2个取代基取代的c
1-6
烷基；
[0755]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的苯基；或
[0756]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4
个取代基取代的吡啶基，
[0757]y1c
为-s(＝o)-、-s(＝o)
2-、-c(＝o)-或-c(＝s)-，
[0758]
p为0或1，
[0759]r2c
为氢原子、可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团，
[0760]
环c为6元的芳族烃环、6元的含氮芳族杂环、或含有氮原子的10元的双环式稠合芳族杂环，
[0761]
q为0～2的整数，以及
[0762]
q个的r
3c
分别独立地为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-ii’)”)。
[0763]
(化合物(ic-iii’))
[0764]
所述式(ic)中的、
[0765]r1c
为：
[0766]
(1)c
1-6
烷基；
[0767]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的苯基；或
[0768]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的吡啶基，
[0769]y1c
为-c(＝o)-，
[0770]
p为0或1，
[0771]
环c为苯环、吡啶环或喹啉环，
[0772]
q为0～2的整数，
[0773]
q个的r
3c
分别独立地为卤素原子、c
1-6
全氟烷基或硝基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-iii’)”)。
[0774]
(化合物(ic-iv’))
[0775]
所述式(ic)中的、
[0776]r1c
为：
[0777]
(1)c
1-6
烷基；
[0778]
(2)可被选自c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基和卤素原子的1或2个取代基取代的苯基；或
[0779]
(3)被1或2个c
1-6
烷基取代的吡啶基(例，4-甲基-2-吡啶基)，
[0780]y1c
为-c(＝o)-，
[0781]
p为0或1，
[0782]
环c为苯环、吡啶环或喹啉环，
[0783]
q为0～2的整数，以及
[0784]
q个的r
3c
为c
1-6
全氟烷基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ic-iv’)”)。
[0785]
(化合物(ic)的优选的具体例)
[0786]
作为化合物(ic)的优选的具体例，可举出：下述式(ic-1)～(ic-17)的任一式所表示的化合物。
[0787]
[化学式45]
14))、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-16))和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-17))。
[0792]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(ic)优选为选自下述的至少一种：2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、2-异丙基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-3))、2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-4))、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-5))、2-(2,6-二甲基苯基)-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-6))、5-硝基-2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-7))、5-硝基-2-(4-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-8))和2-[1-甲基-1-(2-吡啶基)乙基]-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-9))。
[0793]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(ic)优选为选自下述的至少一种：2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-5))、2-苯基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-10))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮(化合物(ic-11))、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))、2-(2,6-二甲基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-14))、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-16))和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-17))。
[0794]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(ic)优选为选自下述的至少一种：2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、2-苯基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-10))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮(化合物(ic-11))、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))、2-(2,6-二甲基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-14))、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-16))和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-17))。
[0795]
本发明的制备方法中，化合物(ic)最优选为2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))。
[0796]
2-1-1b.化合物(ib)
[0797]
其次，对化合物(ib)进行说明。化合物(ib)中，所述式(i)中的r1为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。优选为可被取代的c
1-10
烷基、可被取代的苯基、可被取代的5或6元的单环式杂芳基、或可被取代的8-14元的稠合多环式杂芳基。
[0798]
化合物(ib)中，所述式(i)中的r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，优选为可被取代的苯基、可被取代的5或6元的单环式杂芳基、或可被取代的8-14元的稠合多环式杂芳基。
[0799]
2-1-1b-1.化合物(ib)
[0800]
化合物(ib)优选为下述式(ib)所表示的化合物(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)。化合物(ib)可仅使用1种，也可并用2种以上。
[0801]
[化学式47]
[0802][0803]
以下，对化合物(ib)的各基团进行说明。
[0804]
所述式(ib)中的r
1b
为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基，优选为可被取代的c
1-10
烷基、可被取代的苯基、可被取代的5或6元的单环式杂芳基、或可被取代的8-14元的稠合多环式杂芳基。
[0805]
本发明的制备方法的一个方案(以下记载为“方案(a)”)中，r
1b
更优选为：
[0806]
(1)被1个羧基取代的烷基；
[0807]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0808]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0809]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0810]
(5)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0811]
(6)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0812]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0813]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；
[0814]
(9)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基；
[0815]
(10)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的苯基；或
[0816]
(11)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～3个取代基取代的2-咪唑基。
[0817]
方案(a)中，r
1b
进一步优选为：
[0818]
(1)被1个羧基取代的烷基；
[0819]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0820]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0821]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0822]
(5)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0823]
(6)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0824]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0825]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0826]
(9)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0827]
方案(a)中，r
1b
特别优选为：
[0828]
(1)被1个羧基取代的c
1-6
烷基；
[0829]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0830]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0831]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0832]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0833]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0834]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0835]
(8)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0836]
(9)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0837]
方案(a)中，r
1b
最优选为被1个羧基取代的c
1-6
烷基、2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、5-(1,2,3-三唑)基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基。
[0838]
本发明的制备方法的另一个方案(以下记载为“方案(b)”)中，r
1b
更优选为：
[0839]
(1)被1个羧基取代的烷基；
[0840]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0841]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0842]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0843]
(5)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0844]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0845]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0846]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0847]
方案(b)中，r
1b
进一步优选为
[0848]
(1)被1个羧基取代的c
1-6
烷基；
[0849]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0850]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0851]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0852]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0853]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0854]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0855]
(8)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0856]
方案(b)中，r
1b
特别优选为被1个羧基取代的c
1-6
烷基、2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基。
[0857]
所述式(ib)中的环b为6元的芳族烃环(即，苯环)、或者5或6元的芳族杂环，优选为5或6元的芳族杂环，更优选为三唑环、四唑环、吡啶环或吡啶-n-氧化物环，进一步优选为四唑环、吡啶环或吡啶-n-氧化物环。
[0858]
所述式(ib)中的n为0～5的整数，n个的r
2b
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，更优选为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团。在此，“n为0”是指不存在r
2b
。
[0859]
在所述式(ib)中的n为2以上的整数的情况下，相邻的2个r
2b
可与环b一起形成可被取代的双环式的稠合芳族杂环(优选为可被取代的苯并咪唑环、可被取代的苯并噁唑环或可被取代的苯并噻唑环)。
[0860]
本发明的制备方法的一个方案(以下记载为“方案(c)”)中，化合物(ib)中的式(r1)所表示的基团优选为下述基团：
[0861]
[化学式48]
[0862][0863]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0864]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0865]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0866]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0867]
(5)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的可被1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0868]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0869]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；
[0870]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基；
[0871]
(9)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的苯基；或
[0872]
(10)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～3个取代基取代的2-咪唑基。
[0873]
方案(c)中，基团(r1)更优选为下述基团：
[0874]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0875]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0876]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0877]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0878]
(5)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0879]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0880]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0881]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0882]
方案(c)中，基团(r1)进一步优选为下述基团：
[0883]
(1)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0884]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0885]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0886]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0887]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0888]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0889]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0890]
(8)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0891]
方案(c)中，基团(r1)特别优选为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、5-(1,2,3-三唑)基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基，最优选为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、5-(1,2,3-三唑)基、1-苯基-1h-四唑-5-基或(吡啶-n-氧化物)-2-基。
[0892]
本发明的制备方法的另一个方案(以下记载为“方案(d)”)中，基团(r1)优选为下述基团：
[0893]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0894]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0895]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0896]
(4)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0897]
(5)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0898]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0899]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0900]
方案(d)中，基团(r1)进一步优选为下述基团：
[0901]
(1)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0902]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0903]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0904]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0905]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0906]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0907]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基。
[0908]
方案(d)中，基团(r1)特别优选为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基，最优选为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、1-苯基-1h-四唑-5-基或(吡啶-n-氧化物)-2-基。
[0909]
作为适合的化合物(ib)，可举出以下的化合物。以下的化合物可仅使用任一种，也可并用2种以上。
[0910]
(化合物(ib-i))
[0911]
所述式(ib)中的、
[0912]r1b
为：
[0913]
(1)被1个羧基取代的烷基；
[0914]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0915]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0916]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0917]
(5)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0918]
(6)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0919]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0920]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；
[0921]
(9)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代
基；
[0944]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0945]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0946]
(9)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基，以及
[0947]
基团(r1)为：
[0948]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0949]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0950]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0951]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0952]
(5)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0953]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0954]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0955]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ib-ii)”)。
[0956]
(化合物(ib-iii))
[0957]
所述式(ib)中的、
[0958]r1b
为：
[0959]
(1)被1个羧基取代的c
1-6
烷基；
[0960]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0961]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0962]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0963]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0964]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0965]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4
个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0966]
(8)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0967]
(9)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基，以及
[0968]
基团(r1)为：
[0969]
(1)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0970]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0971]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0972]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1或2个取代基取代的5-(1,2,3-三唑)基；
[0973]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0974]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0975]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0976]
(8)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ib-iii)”)。
[0977]
(化合物(ib-iv))
[0978]
所述式(ib)中的、
[0979]r1b
为被1个羧基取代的c
1-6
烷基、2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、5-(1,2,3-三唑)基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基，且
[0980]
基团(r1)为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、5-(1,2,3-三唑)基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ib-iv)”)。
[0981]
(化合物(ib-v))
[0982]
所述式(ib)中的、
[0983]r1b
为被1个羧基取代的c
1-6
烷基、2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、5-(1,2,3-三唑)基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基，且
[0984]
基团(r1)为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、5-(1,2,3-三唑)基、1-苯基-1h-四唑-5-基或(吡啶-n-氧化物)-2-基的化合物(本说明书中有时记载为“化合物(ib-v)”)。
[0985]
(化合物(ib-i’))
[0986]
所述式(ib)中的、
[0987]r1b
为：
[0988]
(1)被1个羧基取代的烷基；
[0989]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0990]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0991]
(4)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[0992]
(5)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[0993]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[0994]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[0995]
(8)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基，以及
[0996]
基团(r1)为：
[0997]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[0998]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[0999]
(3)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[1000]
(4)可被选自可被取代的烷基和可被取代的芳基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[1001]
(5)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[1002]
(6)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[1003]
(7)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ib-i’)”)。
[1004]
(化合物(ib-ii’))
[1005]
所述式(ib)中的、
[1006]r1b
为：
[1007]
(1)被1个羧基取代的c
1-6
烷基；
[1008]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[1009]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[1010]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4
个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[1011]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[1012]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[1013]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[1014]
(8)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基，以及
[1015]
基团(r1)为：
[1016]
(1)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基；
[1017]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～5个取代基取代的2-苯并咪唑基；
[1018]
(3)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噁唑基；
[1019]
(4)可被选自可被取代的c
1-6
烷基和可被取代的苯基的1个取代基取代的1h-四唑-5-基；
[1020]
(5)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的(吡啶-n-氧化物)-2-基；
[1021]
(6)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的4-吡啶基；或
[1022]
(7)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ib-ii’)”)。
[1023]
(化合物(ib-iii’))
[1024]
所述式(ib)中的、
[1025]r1b
为被1个羧基取代的c
1-6
烷基、2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基，且
[1026]
基团(r1)为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ib-iii’)”)。
[1027]
(化合物(ib-iv’))
[1028]
所述式(ib)中的、
[1029]r1b
为被1个羧基取代的c
1-6
烷基、2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、1-苯基-1h-四唑-5-基、(吡啶-n-氧化物)-2-基、4-吡啶基或2-吡啶基，且
[1030]
基团(r1)为2-苯并噻唑基、2-苯并咪唑基、2-苯并噁唑基、1-苯基-1h-四唑-5-基或(吡啶-n-氧化物)-2-基的化合物(本说明书中有时记载为“化合物(ib-iv’)”)。
[1031]
(化合物(ib)的优选的具体例)
[1032]
作为化合物(ib)的优选的具体例，可举出：下述式(ib-1)～(ib-12)的任一式所表
示的化合物(下述式(ib-7)中的ph表示苯基)。
[1033]
[化学式49]
[1034][1035]
在本发明的制备方法的一个方案中，化合物(ib)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物(化合物(ib-6))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物(化合物(ib-9))、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸(化合物(ib-10))、2,2
’‑
二硫基双(1h-咪唑)(化合物(ib-11))和2,2
’‑
二硫基双(1-甲基-1h-咪唑)(化合物(ib-12))。
[1036]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(ib)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物(化合物(ib-6))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡
啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物(化合物(ib-9))和3-(2-吡啶基二硫基)丙酸(化合物(ib-10))。
[1037]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(ib)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物(化合物(ib-9))和3-(2-吡啶基二硫基)丙酸(化合物(ib-10))。
[1038]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(ib)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物(化合物(ib-6))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))和2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))。
[1039]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(ib)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))和2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))。
[1040]
本发明的制备方法之中，化合物(ib)最优选为2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))。
[1041]
2-1-2.化合物(id)～化合物(ig)
[1042]
上述的化合物(ia)和化合物(ib)以外的化合物(i)可分类为以下的化合物：
[1043]
所述式(i)中的x1为单键、r1为卤素原子、且所述式(i)中的r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(id)”)；
[1044]
所述式(i)中的x1为-s(＝o)
2-、r1为可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基、且r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ie)”)；
[1045]
所述式(i)中的x1为氧原子、以及r1和r2与它们所键合的硫原子和氧原子一起形成可被取代的杂环的化合物(本说明书中记载为“化合物(if)”)；以及
[1046]
所述式(i)中的x1为-n(-r3)-、r1和r3与它们所键合的氮原子一起形成可被取代的杂环、以及r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ig)”)。
[1047]
化合物(id)、化合物(ie)、化合物(if)和化合物(ig)可仅使用任一种，也可并用2种以上。以下，依次说明化合物(id)、化合物(ie)、化合物(if)和化合物(ig)。
[1048]
2-1-2d.化合物(id)
[1049]
对所述式(i)中的x1为单键的化合物(id)进行说明。化合物(id)可由下述式(id)表示：
[1050]r2d-s-r
1d
ꢀꢀ
(id)
[1051]
[式中，r
1d
表示卤素原子，且r
2d
表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。]。化合物(id)(＝化合物(id))可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1052]
所述式(id)中的r
1d
优选为氯原子。所述式(id)中的r
2d
优选为可被取代的杂芳基，更优选为可被吸电子性基团取代的5或6元的单环式杂芳基，进一步优选为可被硝基取代的吡啶基。
[1053]
作为适合的化合物(id)，可举出以下的化合物。以下的化合物可仅使用任一种，也可并用2种以上。
[1054]
(化合物(id-i))
[1055]
所述式(id)中，r
1d
为卤素原子、且r
2d
为可被取代的杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(id-i)”)。
[1056]
(化合物(id-ii))
[1057]
所述式(id)中，r
1d
为氯原子、且r
2d
为可被吸电子性基团取代的5或6元的单环式杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(id-ii)”)。
[1058]
(化合物(id-iii))
[1059]
所述式(id)中，r
1d
为氯原子、且r
2d
为可被硝基取代的吡啶基的化合物(本说明书中记载为“化合物(id-iii)”)。
[1060]
(化合物(id)的优选的具体例)
[1061]
化合物(id)的优选的具体例为下述式(id-1)所表示的3-硝基-2-吡啶次磺酰氯。
[1062]
[化学式50]
[1063][1064]
2-1-2e.化合物(ie)
[1065]
对所述式(i)中的x1为-s(＝o)
2-的化合物(ie)进行说明。化合物(ie)可由下述式(ie)表示：
[1066]
[化学式51]
[1067][1068]
[式中，r
1e
和r
2e
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。]。化合物(ie)(＝化合物(ie))可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1069]
所述式(ie)中的r
1e
和r
2e
分别独立地优选为可被取代的芳基，更优选为可被取代的苯基。
[1070]
(化合物(ie)的优选的具体例)
[1071]
化合物(ie)的优选的具体例为下述式(ie-1)所表示的(s)-苯基硫代苯基砜。
[1072]
[化学式52]
[1073][1074]
2-1-2f.化合物(if)
[1075]
对所述式(i)中的x1为氧原子、以及r1和r2与它们所键合的硫原子和氧原子一起形成可被取代的杂环的化合物(if)进行说明。化合物(if)优选为下述式(if)所表示的化合物：
[1076]
[化学式53]
[1077][1078]
[式中，
[1079]
环d表示6元的芳族烃环、或者5或6元的芳族杂环，
[1080]
w表示0～4的整数，
[1081]
w个的r
1f
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
[1082]
x
1f
表示-c(＝o)-、-c(＝s)-、-s(＝o)
2-或-chr
2f-，
[1083]r2f
表示氢原子、可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，且
[1084]
v表示0～3的整数。]。化合物(if)可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1085]
所述式(if)中的环d优选为6元的芳族烃环(即，苯环)。
[1086]
所述式(if)中的w优选为0～2的整数，更优选为0或1。在此，“w为0”是指不存在r
1f
。
[1087]
所述式(if)中的w个的r
1f
分别独立地优选为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子或硝基。
[1088]
所述式(if)中的r
2f
优选为氢原子、可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基或吸电子性基团，更优选为氢原子、可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子或硝基。
[1089]
所述式(if)中的x
1f
优选为-c(＝o)-。
[1090]
所述式(if)中的v优选为0。在此，“v为0”是指所述式(if)中的括弧内的-ch
2-不存在。
[1091]
作为适合的化合物(if)，可举出以下的化合物。以下的化合物可仅使用任一种，也可并用2种以上。
[1092]
(化合物(if-i)
[1093]
所述式(if)中的、
[1094]
环d为苯环，
[1095]
w优选为0～2的整数，和
[1096]
w个的r
1f
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
[1097]
x
1f
为-c(＝o)-，且
[1098]
v为0～3的整数的化合物(本说明书中记载为“化合物(if-i)”)。
[1099]
(化合物(if-ii)
[1100]
所述式(if)中的、
[1101]
环d为苯环，
[1102]
w优选为0～2的整数，和
[1103]
w个的r
1f
分别独立地为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子或硝基，
[1104]
x
1f
为-c(＝o)-，且
[1105]
v为0～3的整数的化合物(本说明书中记载为“化合物(if-ii)”)。
[1106]
(化合物(if-iii)
[1107]
所述式(if)中的、
[1108]
环d为苯环，
[1109]
w优选为0或1的整数，
[1110]r1f
为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子或硝基，和
[1111]
x
1f
为-c(＝o)-，
[1112]
v为0的化合物(本说明书中记载为“化合物(if-iii)”)。
[1113]
(化合物(if)的优选的具体例)
[1114]
化合物(if)的优选的具体例为下述式(if-1)所表示的3h-2,1-苯并氧杂硫醇-3-酮。
[1115]
[化学式54]
[1116][1117]
2-1-2g.化合物(ig)
[1118]
对所述式(i)中的x1为-n(-r3)-、r1和r3与它们所键合的氮原子一起形成可被取代的杂环、以及r2为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基的化合物(ig)进行说明。化合物(ig)优选为下述式(ig)所表示的化合物：
[1119]
[化学式55]
[1120][1121]
[式中，
[1122]
环e表示4～8元的含氮杂环，
[1123]
x表示0～6的整数，
[1124]
x个的r
1g
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基、氧代基或吸电子性基团，
[1125]
在x为2以上的整数的情况下，相邻的2个r
1g
可与环e一起形成可被取代的双环式的稠合含氮杂环，和
[1126]r2g
表示可被取代的芳基或可被取代的杂芳基。]。化合物(ig)可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1127]
所述式(ig)中的r
2g
优选为可被取代的杂芳基，更优选为可被取代的5或6元的单环
式的含氮杂芳基、或可被取代的8～14元的稠合多环式的含氮杂芳基。
[1128]r2g
进一步优选为：
[1129]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基；或
[1130]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基。
[1131]r2g
特别优选为：
[1132]
(1)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的2-吡啶基；或
[1133]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基。
[1134]r2g
最优选为2-吡啶基或2-苯并噻唑基。
[1135]
所述式(ig)中的x为0～6的整数，优选为2～6的整数。在此，“x为0”是指不存在r
1g
。
[1136]
所述式(ig)中的x个的r
1g
分别独立地优选为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、氧代基、卤素原子或硝基。
[1137]
化合物(ig)中的式(r17)所表示的基团优选为式(r17’)所表示的基团：
[1138]
[化学式56]
[1139][1140]
[化学式57]
[1141][1142]
[式中，
[1143]
环f表示4～8元的含氮杂环，
[1144]
y表示0～4的整数，和
[1145]
y个的r
3g
分别独立地表示可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
[1146]
在y为2以上的整数的情况下，相邻的2个r
3g
可与环f一起形成可被取代的双环式的稠合含氮杂环。]。
[1147]
所述式(r17’)中的y为0～4。在此，“y为0”是指不存在r
3g
。
[1148]
所述式(r17’)中的y个的r
3g
分别独立地优选为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子或硝基，或相邻的2个r
3g
优选为与环f一起形成可被取代的双环式的稠合含氮杂环。所述双环式的稠合含氮杂环优选为可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的异吲哚环，更优选为可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的异吲哚环。
[1149]
环f优选为吡咯烷环，或与相邻的2个r
3g
一起形成可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的异吲哚环。
[1150]
环f更优选为吡咯烷环，或与相邻的2个r
3g
一起形成可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的异吲哚环。
[1151]
化合物(ig)优选为下述式(ig’)所表示的具有酰亚胺键(-c(＝o)-n(-s-r
2g
)-c(＝o)-)的化合物(下述式中的符号的定义如上所述)。
[1152]
[化学式58]
[1153][1154]
作为适合的化合物(ig’)，可举出以下的化合物。以下的化合物可仅使用任一种，也可并用2种以上。
[1155]
(化合物(ig-i-a))
[1156]
所述式(ig’)中的、
[1157]
环f为吡咯烷环，
[1158]
y为0～4的整数，
[1159]
y个的r
3g
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，
[1160]r2g
为可被取代的杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-i-a)”)。
[1161]
(化合物(ig-i-b))
[1162]
所述式(ig’)中的、
[1163]
环f为与相邻的2个r
3g
一起形成可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的异吲哚环，且
[1164]r2g
为可被取代的杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-i-b)”)。
[1165]
(化合物(ig-ii-a))
[1166]
所述式(ig’)中的、
[1167]
环f为吡咯烷环，
[1168]
y为0～4的整数，
[1169]
y个的r
3g
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，且
[1170]r2g
为可被取代的5或6元的单环式的含氮杂芳基、或可被取代的8～14元的稠合多环式的含氮杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-ii-a)”)。
[1171]
(化合物(ig-ii-b))
[1172]
所述式(ig’)中的、
[1173]
环f为相邻的2个r
3g
一起形成可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的异吲哚环，且
[1174]r2g
为可被取代的5或6元的单环式的含氮杂芳基、或可被取代的8～14元的稠合多环式的含氮杂芳基的化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-ii-b)”)。
[1175]
(化合物(ig-iii-a))
[1176]
所述式(ig’)中的、
[1177]
环f为吡咯烷环，
[1178]
y为0～4的整数，
[1179]
y个的r
3g
分别独立地为可被取代的烷基、可被取代的烷氧基或吸电子性基团，且
[1180]r2g
为：
[1181]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基；或
[1182]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-iii-a)”)。
[1183]
(化合物(ig-iii-b))
[1184]
所述式(ig’)中的、
[1185]
环f为与相邻的2个r
3g
一起形成可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的异吲哚环，且
[1186]r2g
为：
[1187]
(1)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-吡啶基；或
[1188]
(2)可被选自可被取代的烷基、可被取代的烷氧基和吸电子性基团的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-iii-b)”)。
[1189]
(化合物(ig-iv-a))
[1190]
所述式(ig’)中的、
[1191]
环f为吡咯烷环，
[1192]
y为0～4的整数，
[1193]
y个的r
3g
分别独立地为可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子或硝基，且
[1194]r2g
为：
[1195]
(1)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的2-吡啶基；或
[1196]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-iv-a)”)。
[1197]
(化合物(ig-iv-b))
[1198]
所述式(ig’)中的、
[1199]
环f为与相邻的2个r
3g
一起形成可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的异吲哚环，且
[1200]r2g
为：
[1201]
(1)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的2-吡啶基；或
[1202]
(2)可被选自可被取代的c
1-6
烷基、可被取代的c
1-6
烷氧基、卤素原子和硝基的1～4个取代基取代的2-苯并噻唑基的、化合物(本说明书中记载为“化合物(ig-iv-b)”)。
[1203]
(化合物(ig)的优选的具体例)
[1204]
作为化合物(ig)的优选的具体例，可举出：下述式(ig-1)所表示的1-(2-吡啶基硫基)-2,5-吡咯烷二酮、下述式(ig-2)所表示的1-(2-苯并噻唑基硫基)-2,5-吡咯烷二酮、下述式(ig-3)所表示的2-(2-吡啶基硫基)-1h-异吲哚-1,3(2h)-二酮和下述式(ig-4)所表示
的2-(2-苯并噻唑基硫基)-1h-异吲哚-1,3(2h)-二酮。
[1205]
[化学式59]
[1206][1207]
2-1-3.优选的化合物(i)
[1208]
本发明的制备方法中，化合物(i)优选为化合物(ia)和/或化合物(ib)。化合物(ia)之中，优选化合物(ic)。
[1209]
在本发明的制备方法的一个方案中，化合物(i)优选为化合物(ib)和/或化合物(ic)，更优选为化合物(ib-i)和/或化合物(ic-i)，更加优选为化合物(ib-ii)和/或化合物(ic-ii)，进一步优选为化合物(ib-iii)和/或化合物(ic-iii)，进一步更加优选为化合物(ib-iv)和/或化合物(ic-iv)，特别优选为化合物(ib-v)和/或化合物(ic-iv)。
[1210]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为化合物(ib-i’)和/或化合物(ic-i’)，更优选为化合物(ib-ii’)和/或化合物(ic-ii’)，更加优选为化合物(ib-iii’)和/或化合物(ic-iii’)，进一步优选为化合物(ib-iv’)和/或化合物(ic-iv’)。
[1211]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物(化合物(ib-6))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物(化合物(ib-9))、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸(化合物(ib-10))、2,2
’‑
二硫基双(1h-咪唑)(化合物(ib-11))、2,2
’‑
二硫基双(1-甲基-1h-咪唑)(化合物(ib-12))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、2-异丙基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-3))、2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-4))、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-5))、2-(2,6-二甲基苯基)-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-6))、5-硝基-2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-7))、5-硝基-2-(4-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-8))和2-[1-甲基-1-(2-吡啶基)乙基]-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-9))。
[1212]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物
(化合物(ib-6))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物(化合物(ib-9))、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸(化合物(ib-10))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、2-异丙基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-3))、2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-4))、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-5))、2-(2,6-二甲基苯基)-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-6))、5-硝基-2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-7))、5-硝基-2-(4-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-8))和2-[1-甲基-1-(2-吡啶基)乙基]-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-9))。
[1213]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物(化合物(ib-6))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、2-异丙基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-3))、2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-4))、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-5))、2-(2,6-二甲基苯基)-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-6))、5-硝基-2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-7))、5-硝基-2-(4-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-8))和2-[1-甲基-1-(2-吡啶基)乙基]-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-9))。
[1214]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二(1,2,3-三唑基)二硫化物(化合物(ib-6))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物(化合物(ib-9))、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸(化合物(ib-10))、2,2
’‑
二硫基双(1h-咪唑)(化合物(ib-11))、2,2
’‑
二硫基双(1-甲基-1h-咪唑)(化合物(ib-12))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、2-异丙基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-3))、2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-4))、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-5))、2-(2,6-二甲基苯基)-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-6))、5-硝基-2-(2-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-7))、5-硝基-2-(4-吡啶基)-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-8))、2-[1-甲基-1-(2-吡啶基)乙基]-5-硝基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-9))、2-苯基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-10))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮(化合物(ic-11))、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))、2-(2,6-二甲基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-14))、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]
吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-16))和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-17))。
[1215]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))、3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))、2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))、2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))、5,5
’‑
二硫基双(1-苯基-1h-四唑)(化合物(ib-7))、2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))、4,4
’‑
二吡啶基二硫化物(化合物(ib-9))、3-(2-吡啶基二硫基)丙酸(化合物(ib-10))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、5-硝基-2-苯基-1,2-苯并噻唑-3(2h)-酮(化合物(ic-5))、2-苯基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-10))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮(化合物(ic-11))、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))、2-(2,6-二甲基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-14))、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-16))和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-17))。
[1216]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-异丙基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-2))、2-苯基异噻唑并[4,5-c]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-10))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮(化合物(ic-11))、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))、2-(2,6-二甲基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-14))、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-16))和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-17))。
[1217]
在本发明的制备方法的另一个方案中，化合物(i)优选为选自下述的至少一种：2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))、2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))、2-(2,6-二甲基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-14))、2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))、2-(4-甲氧基苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-16))和2-(4-氟苯基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-17))。
[1218]
本发明的制备方法中，化合物(i)特别优选为2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))和/或2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))，最优选为2-苯基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-1))。
[1219]
2-1-4. 化合物(i)的制备方法
[1220]
化合物(i)可使用市售品，也可通过已知的方法制备。例如，化合物(ib-1)(即，2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物、mbts)等是市售的。
[1221]
作为化合物(i)的制备方法的实例，代表性的制备方法如下所示，但制备方法不限
于这些方法。
[1222]
化合物(i)可通过以下所示的代表性的制备方法、后述的合成例、已知的方法(例如，非专利文献2的supporting information中所记载的方法)或基于这些方法的方法制备。
[1223]
以下，表示代表性的制备方法中的各工序的反应的简图，简图中的各符号与上述同义。
[1224]
(化合物(ib)的制备方法)
[1225]
化合物(ib)例如可如下述式所示，通过硫醇的氧化和偶联来制备。
[1226]
[化学式60]
[1227][1228]
作为用于将化合物(ib-1s)和化合物(ib-2s)氧化的氧化剂，例如可举出：过氧化氢、碘、氧、n-溴琥珀酰亚胺、n-氯琥珀酰亚胺等。氧化剂可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1229]
相对于化合物(ib-1s)和化合物(ib-2s)的总计1mol，氧化剂的使用量优选为1～10mol、更优选为1～5mol。化合物(ib-2s)优选相对于化合物(ib-1s)以大致等量使用。
[1230]
该反应在不阻碍反应的适当溶剂中进行。作为所述溶剂，例如可举出：乙酸乙酯、乙酸异丙酯等酯系溶剂；1,4-二噁烷、四氢呋喃等极性醚系溶剂；二氯甲烷、氯仿等卤素系溶剂；苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯等芳族系溶剂等。相对于化合物(ib-1s)和化合物(ib-2s)的总计1mmol，所述溶剂的使用量优选为1～20ml、更优选为3～10ml。
[1231]
该反应温度优选为-10℃～50℃、更优选为0℃～40℃，其反应时间优选为1～24小时、更优选为1～10小时。
[1232]
所述反应后，可通过已知的方法(例如萃取等)回收化合物(ib)。所回收的化合物(ib)可通过已知的手段(例如重结晶、色谱等)进行纯化。
[1233]
(y
1c
为羰基的化合物(ic)的制备方法)
[1234]y1c
为羰基的化合物(ic)例如可通过以下所示的工序进行制备。
[1235]
[化学式61]
[1236][1237]
工序a1
[1238]
本工序是合成化合物(ic-1s)的酰氯的工序。详细而言，向反应器中添加化合物(ic-1s)和过量的亚硫酰氯(例如，相对于1mol的化合物(ic-1s)为10mol)，并回流1小时～1夜，由此得到化合物(ic-1s)的酰氯。
[1239]
本工序优选在惰性气氛下(例如，氩气气氛下)进行。反应结束后，馏去亚硫酰氯，由此可回收包含化合物(ic-1s)的酰氯的固体。
[1240]
工序a2
[1241]
本工序是通过使化合物(ic-1s)的酰氯与适当的胺(r
4c-nh2)反应来合成化合物(ic-2s)的工序。详细而言，将工序a1中得到的包含化合物(ic-1s)的酰氯的固体、适当的胺(r
4c-nh2)和碱添加到适当的溶剂中，使其反应，由此得到化合物(ic-2s)。
[1242]
碱可以是有机碱和无机碱的任一种，优选为三乙胺。相对于1mol的化合物(ic-1s)的酰氯，r
4c-nh2和碱的使用量分别优选为1～1.5mol左右。
[1243]
本工序在不阻碍反应的适当溶剂中进行。作为所述溶剂，例如可举出：1,4-二噁烷、四氢呋喃(thf)等极性醚系溶剂，优选thf。所述溶剂的使用量只要可溶解所述固体即可，没有特别限定，相对于1mmol的化合物(ic-1s)的酰氯，优选为5～10ml左右。
[1244]
本工序优选在低温(例如0℃左右)下进行。反应的结束可通过tlc等进行确认。反应结束后，可通过已知的手段(例如浓缩和萃取)，来回收化合物(ic-2s)。
[1245]
工序a3
[1246]
本工序是通过使化合物(ic-2s)与叔丁基硫醇反应来合成化合物(ic-3s)的工序。详细而言，使化合物(ic-2s)与叔丁基硫醇在碱的存在下、在适当的溶剂中反应，由此得到化合物(ic-3s)。
[1247]
相对于1mol的化合物(ic-2s)，叔丁基硫醇的使用量优选为1～1.5mol左右。
[1248]
作为本工序中使用的碱，可举出：氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物，优选氢氧化钠。相对于1mol的化合物(ic-3s)，碱的使用量优选为1～2mol左右。
[1249]
本工序在不阻碍反应的适当溶剂中进行。作为所述溶剂，例如可举出：二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基乙酰胺、n-甲基哌啶酮等酰胺系溶剂，优选dmf。所述溶剂的使用量只要可
溶解化合物(ic-2s)即可，没有特别限定，相对于1mmol的化合物(ic-2s)，优选为5～10ml左右。
[1250]
本工序的反应温度为室温左右(例如25℃)，其时间例如为1小时～1夜，优选为3～20小时左右。反应结束后，可通过已知的手段(例如固液分离)，来回收化合物(ic-3s)。
[1251]
工序a4
[1252]
本工序是通过化合物(ic-3s)的闭环反应来合成y
1c
为羰基的化合物(ic)的工序。可通过以下的工序a4-1和工序a4-2的两种方法，来进行本工序。
[1253]
工序a4-1
[1254]
本工序中，将化合物(ic-3s)、二甲基亚砜(dmso)和三甲基氯硅烷(tmscl)添加到适当的溶剂中，使所得的反应混合物在室温左右(例如25℃)反应，由此合成y
1c
为羰基的化合物(ic)。
[1255]
相对于1mol的化合物(ic-3s)，dmso的使用量优选为1～2mol左右。相对于1mol的化合物(ic-3s)，tmscl的使用量优选为1～1.5mol左右。
[1256]
本工序在不阻碍反应的适当溶剂中进行。作为所述溶剂，例如可举出：氯仿、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷等卤素系溶剂，优选二氯甲烷。所述溶剂的使用量只要可溶解化合物(ic-3s)即可，没有特别限定，相对于1mmol的化合物(ic-3s)，优选为2～5ml左右。
[1257]
本工序的反应时间例如为1小时～1夜、优选为5～10小时左右。反应结束后，可通过已知的手段(例如固液分离)来回收y
1c
为羰基的化合物(ic)。所回收的化合物(ic)可通过已知的手段(例如重结晶、色谱等)进行纯化。
[1258]
工序a4-2
[1259]
本工序中，使化合物(ic-3s)和间氯过氧苯甲酸(mcpba)在适当的溶剂中反应，得到亚砜中间体后，将其加热，由此合成y
1c
为羰基的化合物(ic)。
[1260]
相对于1mol的化合物(ic-3s)，mcpba的使用量优选为1～1.5mol左右。
[1261]
化合物(ic-3s)和间氯过氧苯甲酸(mcpba)的反应在不阻碍反应的适当溶剂中进行。作为所述溶剂，例如可举出：氯仿、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷等卤素系溶剂，优选二氯甲烷。所述溶剂的使用量只要可溶解化合物(ic-3s)即可，没有特别限定，相对于1mmol的化合物(ic-3s)，优选为8～15ml左右。
[1262]
化合物(ic-3s)和间氯过氧苯甲酸(mcpba)的反应优选在低温(例如0℃左右)下进行。其反应时间例如为30分钟～1小时左右。反应结束后，可通过已知的手段(例如在萃取之后进行浓缩和重结晶等)来回收亚砜中间体。
[1263]
通过将所回收的亚砜中间体在不阻碍其环化反应的适当的溶剂中加热，可合成y
1c
为羰基的化合物(ic)。作为所述溶剂，例如可举出：甲苯、二甲苯、吡啶和它们的组合，优选甲苯与吡啶的组合。所述反应温度优选70℃～120℃。合成的化合物(ic)可通过已知的手段(例如重结晶、色谱等)进行纯化。
[1264]
所述化合物(ic-2s)(即，用于合成y
1c
为羰基的化合物(ic)的中间体)例如也可通过以下所示的工序制备。
[1265]
[化学式62]
[1266][1267]
工序a2’[1268]
本工序是通过使用缩合剂使化合物(ic-1s)与适当的胺(r
4c-nh2)反应来合成化合物(ic-2s)的工序。
[1269]
作为本工序中使用的缩合剂，例如可举出：二环己基碳二亚胺(dcc)、二异丙基碳二亚胺(dic)、1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]碳二亚胺(edc)及其盐酸盐(edc
·
hcl)、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基(pybop)、o-(苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲四氟硼酸盐(tbtu)、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-5-氯-1h-苯并三唑-3-氧化物六氟磷酸盐(hctu)、o-苯并三唑-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐(hbtu)等。这些之中，优选edc
·
hcl。
[1270]
相对于1mol的化合物(ic-1s)，r
4c-nh2和缩合剂的使用量分别优选为1～5mol左右。
[1271]
本工序中可使用碱。碱可以是有机碱和无机碱的任一种，优选为三乙胺。在使用碱的情况下，相对于1mol的化合物(ic-1s)，其量优选为1～5mol左右。
[1272]
本工序在不阻碍反应的适当溶剂中进行。作为所述溶剂，例如可举出：1,4-二噁烷、四氢呋喃(thf)等极性醚系溶剂，优选thf。对所述溶剂的使用量没有特别限定，相对于1mmol的化合物(ic-1s)，优选为1～10ml左右。
[1273]
本工序的反应温度为室温左右(例如25℃)，其时间例如为1小时～1夜、优选为3～20小时左右。本工序优选在惰性气氛下(例如，氩气气氛下)进行。反应的结束可通过tlc等进行确认。反应结束后，可通过已知的手段(例如浓缩和萃取)，来回收化合物(ic-2s)。
[1274]
2-2.氧化
[1275]
本发明的制备方法的特征在于，使用化合物(i)(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)，来氧化具有亚磷酸酯键或膦酸酯键的寡核苷酸前体(以下有时简称为“寡核苷酸前体”)。
[1276]
通过使用化合物(i)作为氧化剂，可抑制副产物(缺损体和脱硫体)的生成。为了抑制副产物的生成，相对于本发明的制备方法中使用的氧化剂整体，化合物(i)的量优选为80mol％以上、更优选为90mol％以上。本发明的制备方法中，氧化剂进一步优选由化合物(i)构成。
[1277]
从氧化反应的完成性的观点出发，相对于1mol的寡核苷酸前体，化合物(i)的使用量优选为1～15mol、更优选为1～10mol、进一步优选为1～5mol。
[1278]
寡核苷酸前体优选为：
[1279]
(1)通过核苷、核苷酸或寡核苷酸与经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体；或
[1280]
(2)通过寡核苷酸与亚磷酰胺的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[1281]
作为所述(1)的寡核苷酸前体，例如可举出：所述化合物(c-i)(即，通过所述化合物(a-i)与所述化合物(b-i)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体)和所述化合物(c-i’)(即，通过所述化合物(a-i’)与所述化合物(b-i’)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体)。作为所述(2)的寡核苷酸前体，例如可举出：所述化合物(γ-i)和所述化合物(γ-i’)。
[1282]
具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体更优选为通过核苷、核苷酸或寡核苷酸与经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[1283]
寡核苷酸前体进一步优选为通过具有疏水性保护基的核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)与羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护、且经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[1284]
寡核苷酸前体特别优选为pg为**l-y-z的所述化合物(c-i)(即，通过pg为**l-y-z的所述化合物(a-i)与所述化合物(b-i)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体)或pg为**l-y-z的所述化合物(c-i’)(即，通过pg为**l-y-z的所述化合物(a-i’)与所述化合物(b-i’)的缩合而得到的具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体)。
[1285]
寡核苷酸前体优选为除了亚磷酸酯键或膦酸酯键之外还具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸前体。若用碘氧化具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸前体，则生成硫代磷酸酯键转化成磷酸酯键而得到的副产物(脱硫体)，但根据使用化合物(i)作为氧化剂的本发明，可抑制该脱硫体的生成。
[1286]
优选在水的存在下进行寡核苷酸前体的氧化。由于体系中存在的水作为氧原子的供给源起作用，因此可促进寡核苷酸前体的氧化。相对于1mol的寡核苷酸前体，水的量优选为0.5～200mol、更优选为1～100mol、进一步优选为1～50mol。
[1287]
寡核苷酸前体氧化的反应温度优选为10～50℃、更优选为15～40℃，其反应时间优选为5分钟～5小时、更优选为30分钟～3小时。
[1288]
寡核苷酸前体的氧化优选在包含非极性溶剂的溶液中进行。溶液中的寡核苷酸前体的浓度只要它们可溶解在溶剂中即可，没有特别限定，优选为1～30重量％。
[1289]
作为非极性溶剂，例如可举出：氯仿、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷等卤素系溶剂；苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯等芳族系溶剂；乙酸乙酯、乙酸异丙酯等酯系溶剂；己烷、戊烷、庚烷、辛烷、壬烷、环己烷等脂族系溶剂；二乙醚、环戊基甲醚、叔丁基甲醚等非极性醚系溶剂。非极性溶剂可仅使用1种，也可并用2种以上。非极性溶剂优选为选自卤素系溶剂、芳族系溶剂、酯系溶剂和脂族系溶剂的至少一种，更优选为卤素系溶剂和甲苯，进一步优选为选自氯仿、二氯甲烷和甲苯的至少一种，特别优选为二氯甲烷。
[1290]
包含非极性溶剂的溶液可进一步包含非质子性极性溶剂。作为非质子性极性溶剂，可举出：乙腈、丙腈等腈系溶剂；四氢呋喃等极性醚系溶剂；吡啶等，这些之中，优选腈系溶剂，更优选乙腈或吡啶。相对于100ml的非极性溶剂，非质子性极性溶剂的使用量优选为10～100ml、更优选为10～50ml。
[1291]
2-3.一锅法合成
[1292]
本发明的制备方法也可采用一锅法合成来进行。
[1293]
该一锅法合成包括下述工序：
[1294]
工序(1)，在包含非极性溶剂的溶液中，将具有疏水性保护基的核苷、核苷酸或寡
核苷酸(a)与羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护、且经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)缩合，形成具有亚磷酸酯键和疏水性保护基、且羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的寡核苷酸前体(c)；
[1295]
工序(2)，在工序(1)后的溶液中添加所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的淬灭剂(i)，将所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)淬灭；
[1296]
工序(3)，在工序(2)后的溶液中添加氧化剂，将所述寡核苷酸前体(c)氧化，形成具有磷酸酯键和疏水性保护基、且羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的寡核苷酸(d)；
[1297]
工序(4)，在工序(3)后的溶液中添加氧化剂的淬灭剂(ii)，将氧化剂淬灭；
[1298]
工序(5)，在工序(4)后的溶液中添加酸，去除所述寡核苷酸(d)的在酸性条件下可去除的临时保护基，形成具有未保护的羟基和疏水性保护基的寡核苷酸(e)；
[1299]
工序(6)，根据需要，在工序(5)后的溶液添加碱；以及
[1300]
工序(7)，在包含所述寡核苷酸(e)的溶液中添加极性溶剂，使所述寡核苷酸(e)析出，以及
[1301]
其特征在于，所述氧化剂为化合物(i)(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)。在此，基于一锅法合成的本发明的制备方法的特征在于，不分离中间体(即，工序(1)中得到的寡核苷酸前体(c)和工序(3)中得到的寡核苷酸(d))。以下，依次说明该一锅法合成的各工序。
[1302]
(工序(1)(缩合))
[1303]
工序(1)中，在包含非极性溶剂的溶液中，将具有疏水性保护基的核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)与羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护、且经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)缩合，形成具有亚磷酸酯键和疏水性保护基、且羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的寡核苷酸前体(c)。
[1304]
所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)所具有的疏水性保护基为所述保护基(pg-5)。保护基(pg-5)的说明如上所述。
[1305]
从脱保护的容易程度等观点出发，所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)所具有的羟基的临时保护基优选为4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基或4-单甲氧基三苯甲基、更优选为4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基。
[1306]
工序(1)中使用的所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)与所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的组合优选为所述化合物(a-i)与所述化合物(b-i)的组合、或所述化合物(a-i’)与所述化合物(b-i’)的组合，更优选为pg为**l-y-z的所述化合物(a-i)与所述化合物(b-i)的组合、或pg为**l-y-z的所述化合物(a-i’)与所述化合物(b-i’)的组合。
[1307]
工序(1)在包含非极性溶剂的溶液中进行。作为非极性溶剂，例如可举出：氯仿、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷等卤素系溶剂；苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯等芳族系溶剂；乙酸乙酯、乙酸异丙酯等酯系溶剂；己烷、戊烷、庚烷、辛烷、壬烷、环己烷等脂族系溶剂；二乙醚、环戊基甲醚、叔丁基甲醚等非极性醚系溶剂。非极性溶剂可仅使用1种，也可并用2种以上。非极性溶剂优选为选自卤素系溶剂、芳族系溶剂、酯系溶剂和脂族系溶剂的至少一种，更优选为选自卤素系溶剂和甲苯的至少一种，进一步优选为选自氯仿、二氯甲烷和甲苯的至少一种，特别优选为二氯甲烷和/或甲苯。工序(1)以后的工序也同样地在包含非极性溶剂的溶液中
进行。
[1308]
包含非极性溶剂的溶液可进一步包含非质子性极性溶剂。作为非质子性极性溶剂，可举出：乙腈、丙腈等腈系溶剂；四氢呋喃等极性醚系溶剂等，这些之中，优选腈系溶剂，更优选乙腈。相对于100ml的非极性溶剂，非质子性极性溶剂的使用量优选为10～100ml、更优选为10～50ml。
[1309]
相对于1mol的所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)的使用量，所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的使用量例如为1～10mol、优选为1～5mol。溶液中的所述核苷、核苷酸或寡核苷酸(a)的浓度优选为1～30重量％。
[1310]
工序(1)的反应温度只要能够进行缩合即可，没有特别限定，例如为0～100℃、优选为20～50℃。反应时间根据所使用的原料的种类、反应温度等而不同，例如为5分钟～24小时。
[1311]
为了促进缩合，也可使用已知的活化剂。作为活化剂，例如可举出：吡啶三氟乙酸盐、四唑、5-乙基硫基-1h-四唑、5-苄基硫基-1h-四唑、4,5-双氰咪唑等。活化剂可仅使用1种，也可并用2种以上。在使用活化剂的情况下，相对于1mol的所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)，其使用量优选为0.5～10mol、更优选为1～5mol。
[1312]
(工序(2)(经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的淬灭))
[1313]
工序(2)中，在工序(1)后的溶液中添加所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的淬灭剂(i)，将所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)淬灭。
[1314]
淬灭剂(i)可仅使用1种，也可并用2种以上。作为淬灭剂(i)，例如可举出：水、醇类、酚类和胺类。
[1315]
作为可用作淬灭剂(i)的醇类，例如可举出：甲醇、2-丙醇、叔丁醇、2,2,2,-三氟乙醇、四氢糠醇、糠醇、2,3-o-异亚丙基-d-呋喃核糖、3
’‑
o-三异丙基甲硅烷基-胸苷等可被卤化的一元醇；乙二醇、二甘醇等可被卤化的多元醇。
[1316]
作为可用作淬灭剂(i)的酚类，例如可举出：4-硝基苯酚或五氟苯酚。作为可用作淬灭剂(i)的胺类，例如可举出：吗啉。
[1317]
相对于1mol的工序(1)中的经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的使用量，淬灭剂(i)的使用量优选为1～20mol、更优选为1～10mol、进一步优选为1～5mol。
[1318]
淬灭剂(i)优选为水。通过使用水作为淬灭剂(i)，可促进其后的工序(3)的氧化。在使用水作为淬灭剂(i)的情况下，相对于1mol的经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的工序(1)中的使用量，其使用量优选为1～20mol、更优选为2～15mol、进一步优选为2～10mol。
[1319]
淬灭剂(i)的添加后的溶液温度只要经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)能够淬灭即可，没有特别限定，优选为5～40℃、更优选为15～30℃。淬灭剂(i)的添加后的溶液的搅拌时间根据所使用的淬灭剂(i)的种类、温度等而不同，例如10分钟～3小时。
[1320]
(工序(3)(氧化))
[1321]
工序(3)的特征在于，使用化合物(i)(条件是，不包括2,2-二吡啶基二硫化物)作为氧化剂，将所述寡核苷酸前体(c)的亚磷酸酯键氧化，而转化成磷酸酯键。详细而言，工序(3)中，在工序(2)后的溶液中添加氧化剂(即，化合物(i))，将所述寡核苷酸前体(c)氧化，形成具有磷酸酯键和疏水性保护基、且羟基被在酸性条件下可去除的临时保护基保护的寡
核苷酸(d)。氧化剂和氧化的说明如上所述。
[1322]
本发明的制备方法中，为了能够抑制脱硫体的生成，优选所述寡核苷酸前体(c)是除了亚磷酸酯键之外还具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸前体。
[1323]
(芳族胺的添加)
[1324]
优选在工序(3)后的溶液中添加芳族胺。芳族胺可仅使用1种，也可并用2种以上。通过添加芳族胺，可进一步抑制缺损体的生成。芳族胺的添加可在工序(3)之后、工序(4)的淬灭剂添加前进行，可在工序(4)中同时添加淬灭剂(ii)和芳族胺，也可在工序(4)中依次添加淬灭剂(ii)和芳族胺。
[1325]
作为芳族胺，例如可举出：苯胺、2-氯苯胺、3-氯苯胺、2,4-二氯苯胺、2-氟苯胺、4-甲氧基苯胺、4-硝基苯胺、2,6-二氯苯胺、2,6-二甲苯胺等。
[1326]
芳族胺优选为选自苯胺、2-氯苯胺、3-氯苯胺、2,4-二氯苯胺、2-氟苯胺、4-甲氧基苯胺、4-硝基苯胺、2,6-二氯苯胺、2,6-二甲苯胺的至少一种，更优选为2-氯苯胺和/或2,6-二甲苯胺，进一步优选为2,6-二甲苯胺(即，2,6-二甲基苯胺)。
[1327]
从抑制缺损体的观点出发，相对于1mol的工序(3)中使用的氧化剂，芳族胺的使用量优选为1～20mol、更优选为1～10mol、进一步优选为1～5mol。
[1328]
(工序(4)(氧化剂的淬灭))
[1329]
工序(4)中，在工序(3)后的溶液中添加氧化剂的淬灭剂(ii)，将氧化剂淬灭。淬灭剂(ii)可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1330]
淬灭剂(ii)优选为有机磷化合物。有机磷化合物可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1331]
有机磷化合物优选为选自膦类、亚磷酸三酯、次亚膦酸酯、亚膦酸二酯和次膦酸酯的至少一种，更优选为膦类。所述膦类等可仅使用任意1种，也可并用两种以上。
[1332]
膦类为式：p(r)3(式中，三个r分别独立地表示氢原子、烷基或芳基)所表示的化合物。作为膦类，例如可举出：三苯基膦、甲基二苯基膦等。
[1333]
亚磷酸三酯为式：p(or’)3(式中，三个r’分别独立地表示烷基或芳基)所表示的化合物。作为亚磷酸三酯，例如可举出亚磷酸三乙酯等。
[1334]
次亚膦酸酯为式：p(or’)(r)2(式中，二个r分别独立地表示氢原子、烷基或芳基，且r’表示烷基或芳基)所表示的化合物。作为次亚膦酸酯，例如可举出乙氧基二苯基膦等。
[1335]
亚膦酸二酯为式：p(r)(or’)
2、
(式中，r表示氢原子、烷基或芳基，且二个r’分别独立地表示烷基或芳基)所表示的化合物。作为亚膦酸二酯，例如可举出二乙氧基苯基膦等。
[1336]
次膦酸酯为式：p(＝o)(r)2(or’)(式中，二个r分别独立地表示氢原子、烷基或芳基，r’表示烷基或芳基，以及一个的r和r’可与它们所键合的磷原子和氧原子一起形成杂环)所表示的化合物。作为次膦酸酯，例如可举出下述式所表示的9,10-二氢-9-氧杂-10-磷杂菲10-氧化物等。
[1337]
[化学式63]
[1338][1339]
在本发明的制备方法的一个方案中，淬灭剂(ii)优选为选自三苯基膦、甲基二苯基膦、亚磷酸三乙酯、乙氧基二苯基膦、二乙氧基苯基膦和9,10-二氢-9-氧杂-10-磷杂菲10-氧化物的至少一种，更优选为三苯基膦和/或甲基二苯基膦，进一步优选为三苯基膦。
[1340]
淬灭剂(ii)的使用量只要能够淬灭工序(3)中的氧化剂的剩余部分即可，相对于1mol的氧化剂的剩余量(即，“氧化剂的工序(3)中的使用量
”‑“
所述经亚磷酰胺化的核苷、核苷酸或寡核苷酸(b)的工序(1)中的使用量”)，优选为1～10mol、更优选为1～5mol。
[1341]
淬灭剂(ii)的添加后的溶液温度只要能够将氧化剂淬灭即可，没有特别限定，优选为0℃～50℃、更优选为10℃～40℃。淬灭剂(ii)的添加后的溶液的搅拌时间根据所使用的淬灭剂(ii)的种类、温度等而不同，优选为5分钟～5小时、更优选为5分钟～2小时。
[1342]
(工序(5)(临时保护基的去除))
[1343]
工序(5)中，在工序(4)后的溶液中添加酸，去除所述寡核苷酸(d)的在酸性条件下可去除的临时保护基，形成具有未保护的羟基和疏水性保护基的寡核苷酸(e)。酸可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1344]
酸只要能够良好地去除临时保护基即可，没有特别限定，例如可举出：三氟乙酸、二氯乙酸、三氟甲磺酸、三氯乙酸、甲磺酸、盐酸、乙酸、对甲苯磺酸等。从良好的临时保护基的去除的观点出发，更优选三氟乙酸、二氯乙酸、三氟甲磺酸、三氯乙酸，进一步优选三氟乙酸、二氯乙酸、三氟甲磺酸，更加进一步优选三氟乙酸、三氟甲磺酸，特别优选三氟乙酸。
[1345]
相对于1mol的寡核苷酸(d)，酸的使用量例如为1～100mol、优选为1～40mol。
[1346]
工序(5)的反应温度只要能够使反应进行即可，没有特别限定，例如为-10℃～50℃、更优选为0℃～40℃。反应时间根据所使用的寡核苷酸(d)、酸的种类和非极性溶剂的种类、反应温度等而不同，例如为5分钟～5小时。
[1347]
优选在寡核苷酸(d)的临时保护基的去除前、期间或去除后，向溶液中添加阳离子捕捉剂。即，优选在阳离子捕捉剂的存在下进行临时保护基的去除、或者在临时保护基的去除后向反应液中添加阳离子捕捉剂。阳离子捕捉剂可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1348]
作为阳离子捕捉剂，只要不进行由所去除的临时保护基引起的再保护或对脱保护的官能团的副反应即可，没有特别限定，可使用：吡咯、2-甲基吡咯、3-甲基吡咯、2,3-二甲基吡咯、2,4-二甲基吡咯等吡咯衍生物；吲哚、3-甲基吲哚、4-甲基吲哚、5-甲基吲哚、6-甲基吲哚、7-甲基吲哚、5,6-二甲基吲哚、6,7-二甲基吲哚、5-甲氧基吲哚等吲哚衍生物；2-甲基呋喃、2,3-二甲基呋喃、2-甲基-3-(甲基硫基)呋喃、薄荷呋喃等呋喃衍生物。相对于1mol的所述寡核苷酸(d)，阳离子捕捉剂的使用量优选为1～50mol、更优选为5～20mol。
[1349]
(工序(6)(中和))
[1350]
为了中和工序(5)中使用的酸，所述一锅法合成可进一步包括工序(6)：在工序(5)之后和工序(7)之前，向工序(5)后的溶液中添加碱。然而，通过进行工序(7)(固液分离)和
洗涤，可从寡核苷酸(e)中去除工序(5)中使用的酸，因此工序(6)(中和)不是必需的。
[1351]
碱可仅使用1种，也可并用2种以上。作为碱，优选有机碱。作为有机碱，例如可举出：吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑、n-苯基咪唑、2-氨基-4,6-二甲基嘧啶、1,10-菲咯啉、咪唑、n-甲基咪唑、2-氯苯并咪唑、2-溴苯并咪唑、2-甲基咪唑、2-苯基苯并咪唑、n-苯基苯并咪唑、5-硝基苯并咪唑等。这些之中，优选吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑、n-苯基咪唑、n-甲基咪唑、2-氨基-4,6-二甲基嘧啶、1,10-菲咯啉，更优选吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑、n-苯基咪唑，进一步优选吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑，特别优选吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑。
[1352]
相对于1mol的工序(5)中的酸的使用量，工序(6)中的碱的使用量优选为1～10mol、更优选为1～3mol。
[1353]
(工序(7)(固液分离))
[1354]
工序(7)中，在包含所述寡核苷酸(e)的溶液(即，工序(5)后的溶液、或根据需要为工序(6)后的溶液)中添加极性溶剂，使所述寡核苷酸(e)析出。
[1355]
作为工序(7)中使用的极性溶剂，例如可举出：甲醇、乙醇、异丙醇等醇系溶剂；乙腈、丙腈等腈系溶剂；丙酮、2-丁酮等酮系溶剂；1,4-二噁烷、四氢呋喃等极性醚系溶剂；二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、n-甲基哌啶酮等酰胺系溶剂、二甲基亚砜等亚砜系溶剂；水等。极性溶剂可仅使用1种，也可并用2种以上。这些之中，优选腈系溶剂，更优选乙腈。
[1356]
为了提高所述寡核苷酸(e)的回收率，相对于1ml的溶液中所含的非极性溶剂，固液分离中的极性溶剂的添加量优选为1～20ml、更优选为5～20ml、进一步优选为5～10ml。
[1357]
为了提高所述寡核苷酸(e)的回收率，可使用如国际公开第2016/117663号中记载的沉淀促进剂(例如，3,4,5-三(十八烷氧基)苄基新戊酸酯)。
[1358]
所析出的所述寡核苷酸(e)可通过过滤等已知的手段进行回收。
[1359]
通过重复包括工序(1)～(5)和(7)(优选为工序(1)～(7))的一锅法合成，可延伸寡核苷酸链。重复这样的一锅法合成的寡核苷酸的制备方法也包括在本发明的制备方法中。
[1360]
(脱保护)
[1361]
本发明的制备方法中，在工序(7)(固液分离)之后，也可包括通过已知的方法去除所得寡核苷酸(e)的保护基(例如，磷酸基的保护基、疏水性保护基)的工序。例如，作为磷酸基的保护基的2-氰基乙基和上述的保护基(pg-5)等可通过用氨水、氨水/乙醇溶液、或氨水和甲基胺水溶液的混合液处理而去除。
[1362]
3.新型化合物
[1363]
本发明还提供在寡核苷酸的制备方法中有用的式(in)所表示的化合物：
[1364]
[化学式64]
[1365][1366]
[式中，
[1367]
(1)r
1n
表示可被取代的苯基，p’表示0，环c”表示含有氮原子的10元的双环式稠合
芳族杂环，和q’表示0，
[1368]
(2)r
1n
表示可被取代的苯基，p’表示0，环c”表示6元的含氮芳族杂环，q’表示1，且r
3n
表示c
1-6
全氟烷基，
[1369]
(3)r
1n
表示可被取代的苯基，p’表示1，环c”表示6元的含氮芳族杂环，且q’表示0，或
[1370]
(4)r
1n
表示被1个c
1-6
烷基取代的吡啶基，p’表示0，环c”表示6元的含氮芳族杂环，且q’表示0。]。
[1371]
在寡核苷酸的制备方法中，化合物(in)作为用于氧化具有亚磷酸酯键或膦酸酯键的寡核苷酸前体(特别是，具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体)的氧化剂有用。化合物(in)可仅使用1种，也可并用2种以上。
[1372]
所述式(in)中，“p’表示0”是指式(in)中的括弧内的-ch
2-不存在。
[1373]
所述式(in)中，“q’表示0，”是指式(in)中的r
3n
不存在。
[1374]r1n
的“可被取代的苯基”优选为苯基。
[1375]r1n
的“被1个c
1-6
烷基取代的吡啶基”优选为被1个甲基取代的吡啶基、更优选为4-甲基-2-吡啶基。
[1376]
环c”的“含有氮原子的10元的双环式稠合芳族杂环”优选为喹啉环。
[1377]
环c”的“6元的含氮芳族杂环”优选为吡啶环。
[1378]r3n
的“c
1-6
全氟烷基”优选为三氟甲基。
[1379]
化合物(in)优选为2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮(化合物(ic-11))、2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))、2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))或2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))。
[1380]
化合物(in)可通过上述的“y
1c
为羰基的化合物(ic)的制备方法”、后述的合成例、已知的方法(例如，非专利文献2的supportinginformation中所记载的方法)或基于这些方法的方法制备。
[1381]
实施例
[1382]
以下，例举实施例等更具体地说明本发明，但本发明不受以下实施例等的限制，也可在能够符合上述/下述的主旨的范围内适当地加入变更来实施，它们均包含在本发明的技术范围内。
[1383]
以下的实施例等中所述的“室温”是指“20℃～30℃”。
[1384]
另外，以下实施例等中使用的缩写的含义如下所述。
[1385]
dmf：二甲基甲酰胺；
[1386]
thf：四氢呋喃；
[1387]
suc：琥珀酰；
[1388]
tob：3,4,5-三(十八烷氧基)苄氧基；
[1389]
piv-tob：3,4,5-三(十八烷氧基)苄基新戊酸酯；
[1390]
ddtt：[(n,n-二甲基氨基亚甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮；
[1391]
pos：5-苯基-3h-1,2,4-二噻唑-3-酮；
[1392]
dmtr：4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基。3’‑
磷酰基-2
’‑
o-甲基胞苷-3
’‑
磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
磷酰基-脱氧胸苷；
[1412]
dmtro-af(o)cm(o)t-oh：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
氟-脱氧腺苷-3
’‑
磷酰基-2
’‑
o-甲基胞苷-3
’‑
磷酰基-脱氧胸苷；
[1413]
dmtro-af(o)t(o)t-oh：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
氟-脱氧腺苷-3
’‑
磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
磷酰基-脱氧胸苷；
[1414]
ho-a(s)c(s)t(s)t-suc-tob：n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-脱氧胞苷3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1415]
dmtro-g(iii)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]亚磷酰基(phosphityl)-n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-脱氧胞苷3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1416]
dmtro-g(o)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-脱氧胞苷3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1417]
dmtro-g(o)a(s)c(s)t(s)t-oh：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-脱氧鸟苷-3
’‑
磷酰基-脱氧腺苷-3
’‑
硫代磷酰基-脱氧胞苷-3
’‑
硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
硫代磷酰基-脱氧胸苷；
[1418]
dmtro-t(oh)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-脱氧胸苷-3
’‑
磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1419]
ho-g(o)t(s)t-suc-tob：n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1420]
ho-a(o)g(o)t(s)t-suc-tob：n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1421]
ho-me
c(o)a(o)g(o)t(s)t-suc-tob：n
4-苯甲酰基-2
’‑
脱氧-5-甲基胞苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1422]
ho-t(s)t(s)t-suc-tob：脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1423]
ho-t(s)t(s)t-oh：脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷；
[1424]
dmtro-c(o)t(s)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
4-苯甲酰基-脱氧胞苷3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1425]
dmtro-c(s)t(s)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
4-苯甲酰基-脱氧胞苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1426]
ho-me
c-suc-tob：n
4-苯甲酰基-5-甲基-2
’‑
脱氧胞苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1427]
ho-g(s)
me
c-suc-tob：n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-5-甲基-2
’‑
脱氧胞苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1428]
ho-a(s)g(s)
me
c-suc-tob：n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-5-甲基-2
’‑
脱氧胞苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1429]
dmtro-g(o)a(s)g(s)
me
c-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]磷酰基-n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-5-甲基-2
’‑
脱氧胞苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1430]
dmtro-g(s)a(s)g(s)
me
c-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-5-甲基-2
’‑
脱氧胞苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1431]
dmtro-g(o)a(s)g(s)
me
c-oh：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-脱氧鸟苷-3
’‑
磷酰基-脱氧腺苷-3
’‑
硫代磷酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
硫代磷酰基-5-甲基-2
’‑
脱氧胞苷。
[1432]
(寡核苷酸前体)
[1433]
dmtro-g(iii)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]亚磷酰基-n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-脱氧胞苷3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1434]
dmtro-c(iii)t(s)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
4-苯甲酰基-脱氧胞苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]亚磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1435]
dmtro-t(h)t-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-脱氧胸苷-3
’‑
膦酰基脱氧胸苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯；
[1436]
dmtro-g(iii)a(s)g(s)
me
c-suc-tob：5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]亚磷酰基-n
6-[1-(二甲基氨基)亚乙基]-脱氧腺苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
2-异丁酰基-脱氧鸟苷-3
’‑
[o-(2-氰基乙基)]硫代磷酰基-n
4-苯甲酰基-5-甲基-2
’‑
脱氧胞苷-3
’‑
基-[3,4,5-三(十八烷氧基)苄基]琥珀酸酯。
[1437]
合成例1：具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体的合成
[1438]
在氩气气氛下，向1000ml的烧瓶中加入ho-t-suc-tob(2.5g，2.0mmol)、piv-tob(5.0g，5.0mmol)、无水二氯甲烷(100ml)和无水乙腈(30ml)，调制了溶液。之后，加入dt-ce亚磷酰胺(3.0g，4.0mmol)和三苯基膦(270mg，1.0mmol)，将溶液搅拌30分钟。接下来，加入5-乙基硫基-1h-四唑(530mg，4.0mmol)，将溶液在室温下搅拌45分钟。之后，向溶液中加入2,2,2-三氟乙醇(1.5ml、20mmol)，在室温下搅拌30分钟后，依次加入2,6-二甲基苯胺(1.8ml、15mmol)和pos(1.0g，5.1mmol)，在室温下将溶液搅拌1.0小时。之后，依次加入2,3-二甲基呋喃(2.1ml，20mmol)、三氟乙酸(5.2ml，68mmol)和2,6-二甲基苯胺(83.5μl、0.7μmol)，将溶液在室温下搅拌55分钟。进一步加入三氟乙酸(620μl，8.1mmol)和2,6-二甲基苯胺(10μl、0.10μmol)，将溶液在室温下搅拌15分钟。接下来，向溶液中依次加入吡啶(19ml，230mmol)和甲醇(870μl)，将溶液在室温下搅拌115分钟。之后，添加乙腈(1l)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为二聚体的寡核苷酸ho-t(s)t-suc-tob的混合物(8.1g，收率98％)。
[1439]
m/z：理论值1610.03，实测值1611.06[m h]
[1440]
除了使用上述中得到的固体(8.1g)和dc-ce亚磷酰胺代替dt-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，得到了piv-tob和作为三聚体的寡核苷酸ho-c(s)t(s)t-suc-tob的混合物(8.7g，收率97％)。
[1441]
m/z：理论值2072.11，实测值2073.14[m h]
[1442]
除了使用上述中得到的固体(2.8g)和da-ce亚磷酰胺代替dt-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，得到了piv-tob和作为四聚体的寡核苷酸ho-a(s)c(s)t(s)t-suc-tob的混合物(3.0g，收率98％)。
[1443]
m/z：理论值2523.23，实测值1262.63[m 2h]
2
[1444]
在氩气气氛下，向100ml的双口烧瓶中加入上述中得到的固体(400mg)、无水二氯甲烷(4.0ml)和无水乙腈(1.2ml)，调制了溶液。之后，依次加入dg-ce亚磷酰胺(136mg，161μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(21.1mg，162μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，添加乙腈(30ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为五聚体的寡核苷酸前体dmtro-g(iii)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob的混合物(453mg、收率99％)。
[1445]
m/z：理论值3261.49，实测值1631.67[m 2h]
2
[1446]
实施例1：使用化合物(ib-1)的氧化
[1447]
在氩气气氛下，向20ml的双口烧瓶中加入合成例1中得到的固体(100.0mg：以dmtro-g(iii)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob计为56.9mg、17.4μmol)、无水二氯甲烷(0.9ml)和无水乙腈(0.3ml)，调制了溶液。之后，依次加入水(9μl，0.5mmol)和化合物(ib-1)(12.1mg，36.4μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，加入三苯基膦(4.6mg，18μmol)，将溶液搅拌30分钟。接下来，添加乙腈(10ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为五聚体的寡核苷酸dmtro-g(o)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob的混合物(82mg、收率82％)。
[1448]
需要说明的是，化合物(ib-1)使用了市售品。
[1449]
m/z：理论值3277.48，实测值1639.75[m 2h]
2
[1450]
实施例2：使用化合物(ic-1)的氧化
[1451]
在氩气气氛下，向20ml的双口烧瓶中加入合成例1中得到的固体(100mg：以dmtro-g(iii)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob计为57mg、17μmol)、无水二氯甲烷(0.9ml)和无水乙腈(0.3ml)，调制了溶液。之后，依次加入水(9μl，0.5mmol)和化合物(ic-1)(8.0mg，35μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，加入三苯基膦(4.7mg，18μmol)，将溶液搅拌30分钟。接下来，添加乙腈(10ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为五聚体的寡核苷酸dmtro-g(o)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob的混合物(83mg、收率83％)。
[1452]
需要说明的是，化合物(ic-1)使用了通过非专利文献2的supporting information中所记载的方法合成的化合物。
[1453]
m/z：理论值3277.48，实测值1639.75[m 2h]
2
[1454]
比较例1：使用碘的氧化
[1455]
在氩气气氛下，向20ml的双口烧瓶中加入合成例1中得到的固体(100mg：以dmtro-g(iii)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob计为57mg、17μmol)、无水二氯甲烷(0.9ml)和无水乙腈(0.3ml)，调制了溶液。之后，依次加入水(9μl，0.5mmol)、吡啶(5.7μl，71μmol)和碘(8.8mg，35μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，加入三苯基膦(4.8mg，18μmol)，将溶液搅拌30分钟。接下来，添加乙腈(10ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为五聚体的寡核苷酸dmtro-g(o)a(s)c(s)t(s)t-suc-tob的混合物(83mg、收率83％)。
[1456]
m/z：理论值3277.48，实测值1639.75[m 2h]
2
[1457]
实施例1、实施例2和比较例1的对比
[1458]
如下进行操作，对具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸和硫代磷酸酯键转化成磷酸酯键而得到的副产物(以下记载为“脱硫体”)进行分析，计算出脱硫体的比例。
[1459]
将实施例1、实施例2或比较例1中得到的固体(10mg)和28重量％氨水(5ml)装入高压釜中，在65℃下加热4小时后，冷却至室温。利用注射器式过滤器去除反应液中的不溶物后，用离心蒸发器减压浓缩，得到了具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸dmtro-g(o)a(s)c(s)t(s)t-oh(以下记载为“目标寡核苷酸”)。
[1460]
m/z：理论值1827.36，实测值1826.34[m-h]-[1461]
通过液相色谱-质谱分析(lc-ms)分析了包含所得的目标寡核苷酸和脱硫体的混合物。使用所观测到的各化合物(目标寡核苷酸和脱硫体)的萃取离子色谱图(eic)，计算出各化合物的峰面积，通过下述式计算出脱硫体的比例(％)。结果见表1。
[1462]
脱硫体的比例(％)＝(脱硫体的峰面积/目标寡核苷酸的峰面积)
×
100
[1463]
[表1]
[1464][1465]
由表1的结果可知，作为氧化剂，通过使用化合物(ib-1)或化合物(ic-1)代替碘，
可抑制脱硫体的生成。
[1466]
合成例2：具有膦酸酯键的寡核苷酸前体的合成
[1467]
在氩气气氛下，向200ml的三口烧瓶中加入ho-t-suc-tob(500mg，400μmol)、dt-h-膦酸酯tea盐(568mg，800μmol)、无水二氯甲烷(10ml)和无水吡啶(10ml)，调制了溶液。接下来，加入新戊酰氯(0.2ml，1.6mmol)，将溶液搅拌1小时。之后，添加乙腈(140ml)，将析出的固体通过使用kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了作为二聚体的寡核苷酸前体dmtro-t(h)t-suc-tob(727mg、收率98％)。
[1468]
实施例3：使用化合物(ic-1)的氧化
[1469]
在氩气气氛下，向50ml的双口烧瓶中加入合成例2中得到的寡核苷酸前体(171mg，93μmol)、二氯甲烷(4.7ml)和乙腈(1.4ml)，调制了溶液。接下来，加入水(60μl)、化合物(ic-1)(43mg，189μmol)和二氮杂双环十一碳烯(dbu)(55μl，372μmol)，将溶液在室温下搅拌2小时。之后，添加乙腈(42ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，定量性地得到了作为二聚体的寡核苷酸dmtro-t(oh)t-suc-tob。
[1470]
m/z：理论值1843.16，实测值1842.15[m-h]-[1471]
实施例4：使用化合物(ib-1)的氧化
[1472]
在氩气气氛下，向50ml的双口烧瓶中加入合成例2中得到的寡核苷酸前体(170mg，93μmol)、二氯甲烷(4.7ml)和乙腈(1.4ml)，调制了溶液。接下来，加入化合物(ib-1)(62mg，186μmol)和dbu(55μl，372μmol)，将溶液在室温下搅拌2小时。之后，添加乙腈(42ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，定量性地得到了作为二聚体的寡核苷酸dmtro-t(oh)t-suc-tob。
[1473]
m/z：理论值1843.16，实测值1842.15[m-h]-[1474]
实验例1
[1475]
在非专利文献1(arkivoc 2009(iii)264-273)中，如下述式所示，公开了：在大量的三苯基膦和大量的2,2
’‑
二吡啶基二硫化物的存在下，对h-膦酸酯(化合物1)和核苷(化合物2)进行缩合和氧化，来制备二核苷酸(化合物4)。
[1476]
[化学式65]
[1477][1478]
另外，若通过寡核苷酸合成重复进行延伸，则有时会无意图地去除寡核苷酸的硫代磷酸酯部分的保护基(例如，2-氰基乙基)。因此，使去除了硫代磷酸酯部分的保护基的寡核苷酸与非专利文献1中使用的2,2
’‑
二吡啶基二硫化物或本发明中使用的化合物(ib-1)反应，评价了2,2
’‑
二吡啶基二硫化物和化合物(ib-1)。需要说明的是，在以下的实验中，按照非专利文献1中所述的反应条件，相对于底物(即，去除了硫代磷酸酯部分的保护基的寡核苷酸)，使用了大量的2,2
’‑
二吡啶基二硫化物或大量的化合物(ib-1)。
[1479]
(1)使用2,2
’‑
二吡啶基二硫化物和三苯基膦的实验
[1480]
使去除了2-氰基乙基的ho-t(s)t(s)t-suc-tob和piv-tob的混合物(40mg：以ho-t
(s)t(s)t-suc-tob计为20mg、0.012mmol)溶解于无水二氯甲烷(0.3ml)和无水吡啶(0.3ml)中，调制溶液，加入三苯基膦(15mg、0.059mmol)和2,2
’‑
二吡啶基二硫化物(25mg、0.12mmol)，将溶液在室温下搅拌4.5小时。之后，向溶液中添加乙腈(7ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行减压干燥，得到了固体(31.2mg)。
[1481]
将所得的固体(10mg)和28重量％氨水(5ml)装入高压釜中，在65℃下加热4小时后，冷却至室温。利用注射器式过滤器去除反应液中的不溶物后，用离心蒸发器减压浓缩，对所得的浓缩物进行了lc-ms分析。
[1482]
(2)使用化合物(ib-1)和水的实验
[1483]
使去除了氰基乙基的ho-t(s)t(s)t-suc-tob和piv-tob的混合物(40mg：以ho-t(s)t(s)t-suc-tob计为20mg、0.012mmol)溶解于无水二氯甲烷(0.3ml)和无水吡啶(0.3ml)，调制溶液，加入水(6μl、0.3mmol)和化合物(ib-1)(39mg、0.12mmol)，将溶液在室温下搅拌4.5小时。之后，向溶液中添加乙腈(7ml)，将所析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行减压干燥，定量性地得到了固体。
[1484]
将所得的固体(10mg)和28重量％氨水(5ml)装入高压釜中，在65℃下加热4小时后，冷却至室温。利用注射器式过滤器去除反应液中的不溶物后，用离心蒸发器减压浓缩，对所得的浓缩物进行了lc-ms分析。
[1485]
(3)评价
[1486]
如下进行操作，测定具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸ho-t(s)t(s)t-oh(以下记载为“目标寡核苷酸”)的量、和目标寡核苷酸与氧化剂(2,2
’‑
二吡啶基二硫化物或化合物(ib-1))进行反应而形成的副产物(以下记载为“副产物”)的量，计算出副产物的比例。详细而言，通过lc-ms分析上述实验中得到的浓缩物，使用所观测到的各化合物(目标寡核苷酸和副产物)的萃取离子色谱图(eic)，计算出各化合物的峰面积，通过下述式计算出副产物的比例。结果见表2。
[1487]
副产物的比例(％)＝(副产物的峰面积/(目标寡核苷酸的峰面积 副产物的峰面积)
×
100
[1488]
[表2]
[1489] 副产物的比例(1)2,2
’‑
二吡啶基二硫化物和三苯基膦81％(2)2,2
’‑
二苯并噻唑基二硫化物(化合物(ib-1))和水未检测到
[1490]
如表2所示，若使用2,2
’‑
二吡啶基二硫化物和三苯基膦，则产生了大量的副产物。另一方面，即使使用大量的化合物(ib-1)和水，也未检测到副产物。需要说明的是，在使用2,2
’‑
二吡啶基二硫化物和三苯基膦的非专利文献1中所记载的方法中，与该实验例1中所示的结果同样地产生了大量的副产物。
[1491]
合成例3：2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))的合成
[1492]
向200ml的茄型烧瓶中加入四氢呋喃(100ml)、2-巯基丙酸(10mmol)和化合物(ib-1)(20mmol)，将溶液搅拌24小时。之后，过滤溶液，减压馏去滤液的溶剂后，将所得的浓缩物通过硅胶柱色谱进行纯化，得到了目标物(1.6g)。
[1493]1h-nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.91(d，j＝8.0，1h)，7.81(d，j＝8.0，1h)，7.47(dd，j＝8.0，1h)，7.38(dd，j＝8.0，1h)，3.89(q，j＝7.1，1h)，1.58(d，j＝7.1，3h)
[1494]
合成例4：3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))的合成
[1495]
向200ml的茄型烧瓶中加入四氢呋喃(100ml)、3-巯基丙酸(10mmol)和化合物(ib-1)(20mmol)，调制溶液，将溶液搅拌24小时。之后，过滤溶液，减压馏去滤液的溶剂后，将所得的浓缩物通过硅胶柱色谱进行纯化，得到了目标物(1.3g)。
[1496]1h-nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.93(d，j＝8.0，1h)，7.81(d，j＝8.0，1h)，7.48(dd，j＝8.0，1h)，7.39(dd，j＝8.0，1h)，3.24(t，j＝6.8，2h)，2.81(t，j＝6.8，2h).
[1497]
合成例5：2,2
’‑
二苯并咪唑基二硫化物(化合物(ib-4))的合成
[1498]
向300ml的茄型烧瓶中加入二氯甲烷(150ml)、2-巯基苯并咪唑(20mmol)和三乙胺(22mmol)，之后，加入碘(11mmol)，将溶液搅拌3小时。之后，过滤溶液，减压馏去滤液的溶剂后，使用二乙醚和乙醇对所得的浓缩物进行重结晶，得到了目标物(2.5g)。
[1499]1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ＝7.58-7.56(m，4h)，7.26-7.22(m，4h).
[1500]
合成例6：2,2
’‑
二苯并噁唑基二硫化物(化合物(ib-5))的合成
[1501]
向30ml的茄型烧瓶中加入2-巯基苯并噁唑(1.5g，10mmol)和乙酸乙酯(18ml)，调制了溶液。在0℃下用60分钟向溶液中滴加过氧化氢(33重量％，489μl)后，将溶液升温至室温，并搅拌2.5小时。向溶液中加入水(1.4ml)，将混合物搅拌10分钟后，分取有机层，将水层用乙酸乙酯(5ml)萃取2次。将萃取所得到的溶液用硫酸钠干燥，减压去除其溶剂。将所得的固体用冰冷的二乙醚洗涤后，通过二乙醚进行重结晶。通过过滤来回收所析出的固体后，进行减压干燥，得到了目标物(210mg)。
[1502]1h-nmr(400mhz，氯仿-d)δ＝7.76-7.69(m，2h)，7.58-7.50(m，2h)，7.42-7.32(m，4h).
[1503]
合成例7：2,2
’‑
二硫基双(吡啶-n-氧化物)(化合物(ib-8))的合成
[1504]
向100ml的茄型烧瓶中加入2-巯基吡啶-n-氧化物(3.8g，30mmol)和水(27ml)，调制了溶液。在0℃下用60分钟向溶液中滴加过氧化氢(33重量％，3.2ml)后，将溶液升温至40℃，并搅拌1小时。过滤溶液，回收固体，将所回收的固体用甲醇洗涤，进行减压干燥，得到了目标物(1.2g)。
[1505]1h-nmr(400mhz，氯仿-d)δ＝8.31(d，j＝5.2，2h)，7.62(d，j＝6.4，2h)，7.34-7.24(m，2h)，7.20(dd，j＝6.4，2h).
[1506]
合成例8：具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体的合成
[1507]
在氩气气氛下，向200ml的双口烧瓶中加入ho-t-suc-tob(2.1g，1.7mmol)、无水二氯甲烷(87ml)和无水乙腈(26ml)，调制了溶液。之后，依次加入分子筛3a(1.7g)、三苯基膦(227mg，867μmol)、dt-ce亚磷酰胺(2.6g，3.5mmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(452mg，3.47mmol)，在室温下搅拌60分钟。向反应溶液中加入三氟乙醇(1.3ml，17mmol)，在室温下搅拌30分钟。之后，加入2,6-二甲苯胺(2.6ml，21mmol)和ddtt(892，4.34mmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。通过过滤去除分子筛3a后，依次加入吲哚(2.0g，17mmol)和三氟乙酸(4.8ml，63mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。进一步加入三氟乙酸(265μl，3.46mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。之后，向溶液中依次加入吡啶(16ml，200mmol)和水(742μl)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，添加乙腈(858ml)，将所析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了作为二聚体的寡核苷酸ho-t(s)t-suc-tob(2.6g，收率94％)。
[1508]
m/z：理论值1610.03，实测值1611.05[m h]
[1509]
在氩气气氛下，向100ml的双口烧瓶中加入ho-t(s)t-suc-tob(1.3g，811μmol)、无水二氯甲烷(40ml)和无水乙腈(12ml)，调制了溶液。之后，依次加入分子筛3a(816mg)、三苯基膦(109mg，417μmol)、dc(bz)-ce亚磷酰胺(1.4g，1.6mmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(212mg，1.63μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。通过过滤去除分子筛3a后，添加乙腈(30ml)，将所析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了作为三聚体的寡核苷酸前体dmtro-c(iii)t(s)t-suc-tob(1.8g，收率96％)。
[1510]
m/z：理论值2342.26，实测值2343.28[m h]
[1511]
实施例5～15和比较例2：使用各种氧化剂的氧化
[1512]
向烧瓶中加入dmtro-c(iii)t(s)t-suc-tob(60mg，25μmol)、无水二氯甲烷(1.3ml)和无水乙腈(0.4ml)，调制了溶液。向溶液中加入水(17μl)后，添加下述表3所示的各种氧化剂(38μmol)，在室温下搅拌3小时进行氧化，合成了作为三聚体的寡核苷酸dmtro-c(o)t(s)t-suc-tob(以下记载为“氧化体”)。需要说明的是，如下述表3所示，在使用了作为氧化剂的2-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-2))或3-(2-苯并噻唑基二硫基)丙酸(化合物(ib-3))的实施例6和7中，如上所述，除了在水的存在下的氧化之外，在所述操作中不向溶液中添加水，也进行了在无水条件下的氧化。
[1513]
需要说明的是，化合物(ib-2)～化合物(ib-5)和化合物(ib-8)使用了上述的合成例3～7中得到的化合物。
[1514]
化合物(ic-1)使用了通过非专利文献2的supporting information中所记载的方法合成的化合物。
[1515]
其他氧化剂使用了市售品。
[1516]
实施例5～15和比较例2的对比
[1517]
将实施例5～15和比较例2的氧化后的溶液(10μl)和ddtt(1mg)装入1ml的小瓶(vial bottle)中，用四氢呋喃(450μl)稀释后，装入dbu(20μl)，将溶液在室温下搅拌30秒，硫化未反应的dmtro-c(iii)t(s)t-suc-tob，合成dmtro-c(s)t(s)t-suc-tob(以下“硫化体”)，调制了包含氧化体和硫化体的试验液。对所得的试验液进行ms分析，使用所观测到的各化合物(氧化体(即，目标寡核苷酸dmtro-c(o)t(s)t-suc-tob)和硫化体)的丰度，通过下述式计算出氧化体的比例。结果见表3。
[1518]
氧化体的比例(％)＝(氧化体的丰度/(氧化体的丰度 硫化体的丰度))
×
100
[1519]
需要说明的是，表3的实施例6和7的括弧内的数值表示在无水条件下进行氧化时的氧化体的比例。
[1520]
[表3]
[1521][1522][1523]
如表3所示，通过使用化合物(ib-1)～化合物(ib-10)或化合物(ic-1)作为氧化剂，与非专利文献1(arkivoc 2009(iii)264-273)中使用的2,2
’‑
二吡啶基二硫化物相比，可有效地氧化寡核苷酸前体。
[1524]
实施例16：使用化合物(ib-1)作为氧化剂的dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-oh的合成
[1525]
在氩气气氛下，向300ml的双口烧瓶中加入ho-t-suc-tob(351mg，284μmol)、piv-tob(350mg，350μmol)、无水二氯甲烷(14ml)和无水乙腈(4ml)，调制了溶液。之后，依次加入dt-ce亚磷酰胺(402mg，540μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(69.9mg，537μmol)，将溶液在室温下搅拌45分钟。进一步加入dt-ce亚磷酰胺(21mg，29μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(3.7mg，28μmol)，将溶液在室温下搅拌35分钟。之后，加入水(184μl，10.2mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。向溶液中加入化合物(ib-1)(282mg，848μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，加入三苯基膦(74.2mg，283μmol)，将溶液搅拌30分钟后，依次加入2,3-二甲基呋喃(298μl，2.83mmol)和三氟乙酸(563μl，7.35mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。进一步加入三氟乙酸(86.6μl，1.13mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。接下来，向溶液中依次加入吡啶
(2.0ml，25mmol)和水(120μl)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，添加乙腈(170ml)，将所析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行减压干燥，得到了piv-tob和作为二聚体的寡核苷酸ho-t(o)t-suc-tob的混合物(766mg、收率96％)。
[1526]
m/z：理论值1594.06，实测值1595.07[m h]
[1527]
除了使用上述中得到的固体(766mg)和2
’‑
ome-c-ce亚磷酰胺代替dt-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，得到了piv-tob和作为三聚体的寡核苷酸ho-cm(o)t(o)t-suc-tob的混合物(875mg、收率98％)。
[1528]
m/z：理论值2070.17，实测值2071.19[m h]
[1529]
在氩气气氛下，向200ml的双口烧瓶中加入上述中得到的固体(875mg)、无水二氯甲烷(13ml)和无水乙腈(4ml)，调制了溶液。之后，依次加入2
’‑
f-a-ce亚磷酰胺(441mg，503μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(65.7mg，505μmol)，将溶液在室温下搅拌45分钟。进一步加入2
’‑
f-a-ce亚磷酰胺(25mg，28μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(3.4mg，26μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。接下来，加入水(172μl，9.54mmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟后，向溶液中加入化合物(ib-1)(266mg，800μmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟，之后，加入三苯基膦(71.1mg，271μmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。之后，添加乙腈(129ml)，将所析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行减压干燥，得到了piv-tob和作为四聚体的寡核苷酸dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-suc-tob的混合物(1007mg、收率93％)。
[1530]
m/z：理论值2860.41，实测值2861.42[m h]
[1531]
将上述中得到的固体(9.3mg)和28重量％氨水(5ml)装入高压釜中，在65℃下加热4小时后，冷却至室温。利用注射器式过滤器去除反应液中的不溶物后，用离心蒸发器减压浓缩，得到了dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-oh的水溶液。
[1532]
m/z：理论值1498.39，实测值1497.37[m-h]-[1533]
实施例17：使用化合物(ic-1)作为氧化剂的dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-oh的合成
[1534]
除了将化合物(ib-1)变更成化合物(ic-1)以外，与实施例16同样地进行操作，得到了dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-oh的水溶液。
[1535]
m/z：理论值1498.39，实测值1497.37[m-h]-[1536]
比较例3：使用碘作为氧化剂的dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-oh的合成
[1537]
在氩气气氛下，向200ml的双口烧瓶中加入ho-t-suc-tob(354mg，286μmol)和piv-tob(351mg，352μmol)，然后加入无水二氯甲烷(14ml)和无水乙腈(4.2ml)，调制了溶液。之后，依次加入dt-ce亚磷酰胺(406mg，545μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(70.1mg，539μmol)，将溶液在室温下搅拌45分钟。进一步加入dt-ce亚磷酰胺(23mg，31μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(4.0mg，31μmol)，将溶液在室温下搅拌35分钟。接下来，加入水(180μl，10.2mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟后，向溶液中依次加入吡啶(91μl，1.1mmol)和碘(145mg，569μmol)，将溶液在室温下搅拌90分钟。之后，依次加入2,3-二甲基呋喃(298μl，2.83mmol)和三氟乙酸(650μl，8.48mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。进一步加入三氟乙酸(86.6μl，1.13mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟后，向溶液中依次加入吡啶(2.3ml，29mmol)和水(120μl)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，添加乙腈(140ml)，将所析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行减压干燥，定量性地得到了piv-tob和作为二聚体的寡核苷酸ho-t(o)t-suc-tob的混合物(827mg)。
ce亚磷酰胺(7.3g，9.8mmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(1.3g，9.8mmol)，将溶液在室温下搅拌65分钟。进一步加入dt-ce亚磷酰胺(385mg，517μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(67.3mg，517μmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟后，加入水(932μl，51.7mmol)，将溶液在室温下搅拌40分钟。接下来，加入化合物(ic-1)(3.5g，15mmol)，将溶液搅拌60分钟。向溶液中依次加入三苯基膦(1.4g，5.2mmol)和作为芳族胺的2,6-二甲苯胺(5.5ml，45mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。之后，依次加入2,3-二甲基呋喃(5.4ml，52mmol)和三氟乙酸(13.8ml，180mmol)，在室温下搅拌80分钟。接下来，向溶液中依次加入吡啶(43.7ml，541mmol)和水(2.5ml)，将溶液在室温下搅拌90分钟。之后，添加乙腈，将所析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为二聚体的寡核苷酸ho-t(o)t-suc-tob的混合物(21g，收率98％)。
[1553]
m/z：理论值1594.06，实测值1595.07[m h]
[1554]
除了使用上述中得到的固体(21g)和2
’‑
ome-c-ce亚磷酰胺代替dt-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，定量性地得到了piv-tob和作为三聚体的寡核苷酸ho-cm(o)t(o)t-suc-tob的混合物(23g)。
[1555]
m/z：理论值2070.17，实测值2071.19[m h]
[1556]
除了使用上述中得到的固体(21g)和2
’‑
f-a-ce亚磷酰胺代替2
’‑
ome-c-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，得到了piv-tob和作为四聚体的寡核苷酸ho-af(o)cm(o)t(o)t-suc-tob的混合物(23g，收率99％)。
[1557]
m/z：理论值2558.28，实测值2559.29[m h]
[1558]
另外，为了确认芳族胺的添加效果，从加入2,3-二甲基呋喃之前的反应溶液中取出1.3ml的溶液，向该溶液中添加乙腈(9ml)，将所析出的固体通过kiriyama漏斗抽吸过滤后，进行干燥，由此得到了piv-tob和作为四聚体的寡核苷酸dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-suc-tob的混合物(69mg)。
[1559]
m/z：理论值2860.41，实测值2861.42[m h]
[1560]
将上述中得到的dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-suc-tob(3.4mg)和28重量％氨水(5ml)装入高压釜中，在65℃下加热4小时后，冷却至室温。利用注射器式过滤器去除反应液中的不溶物后，用离心蒸发器减压浓缩，得到了dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-oh的水溶液。
[1561]
m/z：理论值1498.39，实测值1497.37[m-h]-[1562]
实施例17和实施例18的对比
[1563]
通过ms分析测定了实施例17和实施例18中得到的水溶液中的dmtro-af(o)cm(o)t(o)t-oh(以下记载为“目标寡核苷酸”)、和从目标寡核苷酸分别缺损了第2残基或第3残基而得的三聚体即dmtro-af(o)cm(o)t-oh或dmtro-af(o)t(o)t-oh(以下记载为“缺损体”)。ms分析如下：使用所观测到的各化合物(目标寡核苷酸和缺损体)的萃取离子色谱图(eic)，计算出各化合物的峰面积，通过下述式计算出缺损体的比例。结果见表5。
[1564]
缺损体量的比例(％)＝(各缺损体的峰面积的总计/目标寡核苷酸的峰面积)
×
100
[1565]
[表5]
[1566][1567]
由表5的结果可知，通过在使用化合物(ic-1)的氧化工序后，添加芳族胺(2,6-二甲苯胺)，可进一步抑制缺损体的生成。
[1568]
实施例19：使用化合物(ib-1)作为氧化剂的ho-me
c(o)a(o)g(o)t(s)t-suc-tob的合成
[1569]
在氩气气氛下，向30ml的双口烧瓶中加入ho-t(s)t-suc-tob(250mg，88μmol)、无水二氯甲烷(4.4ml)和无水乙腈(1.3ml)，调制了溶液。之后，依次加入dg-ce亚磷酰胺(149mg，176μmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(23mg，0.18mmol)，将溶液在室温下搅拌45分钟。之后，向溶液中加入2,2,2-三氟乙醇(38μl，0.53mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。接下来，加入水(70μl)和化合物(ib-1)(59mg，18mmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。对溶液的一部分进行取样后，向溶液中依次加入2,3-二甲基呋喃(46μl，0.88mmol)和三氟乙酸(102μl，1.32mmol)，将溶液在室温下搅拌80分钟。接下来，向溶液中依次加入吡啶(319μl，3.95mmol)和水(19μl)，将溶液在室温下搅拌90分钟。之后，添加乙腈，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了作为三聚体的寡核苷酸ho-g(o)t(o)t-suc-tob(111mg)。
[1570]
m/z：理论值2062.15，实测值2063.16[m h]
[1571]
除了使用上述中得到的固体(111mg，34μmol)和da-ce亚磷酰胺代替dg-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，得到了作为四聚体的寡核苷酸ho-a(o)g(o)t(s)t-suc-tob(113mg，收率90％)。
[1572]
m/z：理论值2497.30，实测值2498.32[m h]
[1573]
除了使用上述中得到的固体(99mg，27μmol)和5-me-dc(bz)-ce亚磷酰胺代替da-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，得到了作为五聚体的寡核苷酸ho-me
c(o)a(o)g(o)t(s)t-suc-tob(93mg，收率84％)。
[1574]
m/z：理论值2957.41，实测值1479.71[m 2h]
2
[1575]
实施例20：使用化合物(ib-1)作为氧化剂的ho-me
c(o)a(o)g(o)t(s)t-suc-tob的合成(有芳族胺的添加)
[1576]
在氧化工序(即，向溶液中加入化合物(ib-1)，将溶液在室温下搅拌30分钟的工序)之后，追加了将作为芳族胺的2,6-二甲苯胺(相对于1mol的化合物(ib-1)为3mol)加入到溶液中，并将溶液在室温下搅拌30分钟的工序，除此之外，与实施例19同样地进行操作，得到了ho-me
c(o)a(o)g(o)t(s)t-suc-tob(121mg)。
[1577]
实施例19和实施例20的对比
[1578]
使实施例19和实施例20中得到的ho-me
c(o)a(o)g(o)t(s)t-suc-tob溶解于四氢呋喃后，用dbu去除与磷酸酯部分和硫代磷酸酯部分键合的保护基(2-氰基乙基)，通过ms分析测定了去除了保护基的寡核苷酸(以下记载为“目标寡核苷酸”)、和从目标寡核苷酸分别缺损了
me
c、a和g的任一者的四聚体即寡核苷酸(以下记载为“缺损体”)。ms分析如下：使用所观
测到的各化合物(目标寡核苷酸和缺损体)的萃取离子色谱图(eic)，计算出各化合物的峰面积，通过下述式计算出缺损体的比例。
[1579]
缺损体的比例(％)＝(各缺损体的峰面积的总计/目标寡核苷酸的峰面积)
×
100
[1580]
[表6]
[1581][1582]
由表6的结果可知，在使用化合物(ib-1)的氧化工序后，通过添加芳族胺(2,6-二甲苯胺)，可进一步抑制缺损体的生成。
[1583]
实施例21：作为二十聚体的寡核苷酸(dmtro-um(o)cm(o)am(o)am(o)gm(s)gm(s)am(s)am(s)gm(s)am(s)um(s)gm(s)gm(s)cm(s)am(s)um(s)um(s)um(s)cm(s)um-oh)(seq id no:1)的固相合成
[1584]
通过基于亚磷酰胺法的固相合成，合成了所述序列的二十聚体寡核苷酸(所述序列中，am表示2
’‑
o-甲基腺苷残基，cm表示2
’‑
o-甲基胞苷残基，gm表示2
’‑
o-甲基鸟苷残基，um表示2
’‑
o-甲基尿苷残基，(o)表示所述式(p3-1)所表示的磷酸酯键，且(s)表示所述式(p4-1)所表示的硫代磷酸酯键)。
[1585]
具体而言，将以41μmol/g负载有5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
o-甲基尿苷的多孔玻璃(cpg)固相载体(chemgenes公司制造)(固相载体的量：24mg、5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
o-甲基尿苷量：1μmol)装入带玻璃过滤器的柱中，使用寡核苷酸合成仪(商品名“ns-8”、gene design公司制造)，从3’侧向5’侧进行合成。作为亚磷酰胺，使用了n
6-苯甲酰基-5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
o-甲基腺苷亚磷酰胺和n
4-乙酰-5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
o-甲基胞苷亚磷酰胺、n
2-异丁酰基-5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
o-甲基鸟苷亚磷酰胺、5
’‑
o-(4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基)-2
’‑
o-甲基尿苷亚磷酰胺的各自的乙腈溶液，作为活化剂，使用了5-乙基硫基-1h-四唑的乙腈溶液，作为硫化剂，使用了ddtt的吡啶溶液，作为加帽试剂，使用了10重量％乙酸酐的thf溶液和1-甲基咪唑及吡啶的thf溶液的混合溶液，作为脱三苯甲基试剂，使用了三氯乙酸(tca)的二氯甲烷溶液。作为氧化剂，使用了(1)0.01m的化合物(ib-1)的吡啶溶液、(2)0.1m的化合物(ic-1)的吡啶溶液或(3)0.02m的化合物(ic-1)的乙腈溶液。
[1586]
为了从固相载体上切出合成的寡核苷酸并对其碱基部分进行脱保护，使用28重量％氨水和乙醇的混合溶液(氨水：乙醇的体积比＝3：1)，将合成的寡核苷酸在55℃下处理15小时后，过滤出固相载体，并在离心浓缩机中对滤液进行减压浓缩。将合成的寡核苷酸通过lc-ms进行分析，测定了分子量。其结果，通过使用化合物(ib-1)或化合物(ic-1)作为氧化剂的固相合成，确认到合成了目标寡核苷酸。
[1587]
m/z：理论值7215.88，实测值2404.43[m-3h]
3-[1588]
合成例9：2-苯基异噻唑并[5,4-b]喹啉-3(2h)-酮(化合物(ic-11))的合成
[1589]
在氩气气氛下，向100ml的烧瓶中加入2-氯喹啉-3-甲酸(2.5g，12mmol)和亚硫酰
氯(40ml)，将混合物在80℃下搅拌17小时。在减压下馏去亚硫酰氯，进一步加入甲苯(30ml)，将所得的溶液减压浓缩，再次加入甲苯(60ml)，将所得的溶液在减压下进行干燥，得到了固体。向所得的固体中加入thf(15ml)，在冰浴下缓慢滴加了三乙胺(2.5ml、18mmol)和苯胺(1.3ml、14mmol)。将所得的混合物升温至室温，加入thf(2ml)和三乙胺(0.5ml、3.6mmol)，搅拌2.5小时后，在减压下馏去溶剂，加入二氯甲烷(50ml)。将所得的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤2次、用饱和食盐水洗涤1次后，用硫酸钠进行干燥。通过过滤去除硫酸钠后，在减压下干燥滤液，得到了固体。
[1590]
向所述固体中加入无水dmf(10ml)，调制了稀释液。另外，在氩气气氛下，向100ml烧瓶中加入无水dmf(2ml)、氢氧化钠(0.48g，12mmol)和叔丁基硫醇(1.4ml，12mmol)，在冰冷下搅拌，向所得的混合物中滴加所述稀释液后，将混合物升温至室温，并搅拌4小时。之后，在冰浴下向混合物中缓慢滴加了水(120ml)。通过过滤来回收所析出的固体，加入乙醇(400ml)，将混合物在100℃下搅拌后，将混合物冷却至室温。通过过滤来回收从混合物中析出的固体，将所得的固体在减压下进行干燥(1.7g)。另外，将滤液在减压下浓缩，加入乙醇(400ml)，将混合物在100℃下搅拌后，滴加水(200ml)，将混合物冷却至室温。通过过滤来回收从混合物中析出的固体，将所得的固体在减压下进行干燥(0.85g)。将所得的1.7g固体与0.85g固体混合，将其中的2.0g固体用于下一个工序。
[1591]
在氩气气氛下，向100ml烧瓶中加入所述固体(2.0g)和二氯甲烷(19ml)，将混合物在冰冷下搅拌15分钟。向所得的混合物中加入间氯过氧苯甲酸(1.5g，6.4mmol)，并搅拌1小时，调制了有机层。向所得的有机层中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，在室温下搅拌30分钟。将析出的固体通过过滤去除，去除滤液的水层后，用饱和硫代硫酸钠水溶液(20ml)和饱和食盐水(20ml)依次洗涤有机层，用硫酸钠干燥后，进行过滤，并进行减压浓缩(1.3g)。向所得的浓缩液中加入甲苯(72ml)和吡啶(7.2ml)，将混合物升温至100℃，并搅拌2小时。之后，将混合物冷却至室温，通过过滤来回收所析出的固体后，向所得的固体中加入乙醇(200ml)，将混合物在100℃下搅拌后，滴加水(67ml)，将混合物冷却至室温。通过过滤来回收所析出的固体后，将所得的固体通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯的体积比＝2/1)纯化后，进行减压浓缩。向所得的浓缩液中加入乙醇，将混合物在100℃下搅拌后，滴加水，将混合物冷却至室温。通过过滤来回收所析出的固体后，在减压下进行干燥，得到了目标物(121mg)。
[1592]1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ8.85(s,1h),8.06(d,j＝8.6hz,1h),7.99(dd,j＝8.3,1.4hz,1h),7.83(ddd,j＝8.5,6.8,1.5hz,1h),7.73-7.65(m,2h),7.57(ddd,j＝8.1,7.0,1.0hz,1h),7.48-7.39(m,2h),7.32-7.24(m,1h).
[1593]
m/z:理论值278.05,实测值279.06[m h]
[1594]
合成例10：2-苯基-5-三氟甲基异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-12))的合成
[1595]
向200ml的烧瓶中加入2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸(2.5g，11mmol)和亚硫酰氯(37ml)，将混合物在80℃下搅拌4小时。在减压下馏去亚硫酰氯后，加入甲苯(30ml)，将所得的溶液在减压下进行浓缩，得到了浓缩液。
[1596]
向所述浓缩液中加入无水thf(5ml)，在冰冷下搅拌，调制了稀释液。向所述稀释液中加入三乙胺(1.9ml，13mmol)、苯胺(1.2ml，13mmol)和无水thf(10ml)的溶液，将所得的混
合物升温至室温，并搅拌2.5小时。在减压下馏去溶剂后，向所得的残渣中加入二氯甲烷(30ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)，并进行搅拌。去除水层后，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和饱和食盐水(50ml)依次洗涤有机层，用硫酸钠干燥，在减压下进行干燥，得到了固体(3.1g)。
[1597]
向所述固体中加入无水dmf(5ml)，调制了稀释液。另外，在氩气气氛下，向100ml烧瓶中加入无水dmf(2ml)、氢氧化钠(0.47g，12mmol)和叔丁基硫醇(1.3ml，11mmol)，在冰冷下搅拌，向所得的混合物中滴加所述稀释液后，将混合物升温至室温，并搅拌4小时。之后，在冰冷下向混合物中缓慢滴加了水(70ml)。通过过滤来回收析出的固体，加入乙醇(30ml)，将混合物在100℃下搅拌后，滴加水(30ml)，将混合物冷却至室温。通过过滤来回收析出的固体，将所得的固体在减压下进行干燥。向所得的固体中加入乙醇(30ml)，将混合物在100℃下搅拌后，滴加水(30ml)，将混合物冷却至室温。通过过滤来回收析出的固体，将所得的固体在减压下进行干燥(3.4g)。
[1598]
在氩气气氛下，向100ml烧瓶中加入所述固体(3.4g)和二氯甲烷(32ml)，将混合物在冰冷下搅拌15分钟。向所得的混合物中加入间氯过氧苯甲酸(2.5g，10mmol)，并搅拌2小时，调制了有机层。向所得的有机层中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，在室温下搅拌1小时，去除水层后，用饱和硫代硫酸钠水溶液(50ml)和饱和食盐水(50ml)依次洗涤有机层，用硫酸钠干燥后，过滤，并进行减压浓缩(3.4g)。向所得的浓缩液中加入甲苯(186ml)和吡啶(19ml)，将混合物升温至100℃，并搅拌1.5小时。之后，将混合物冷却至室温，在减压下去除溶剂。向所得的残渣中加入乙醇(160ml)，将混合物升温至100℃，并缓慢滴加了水(80ml)。进一步将混合物在室温下搅拌1小时、在冰冷下搅拌15分钟，通过过滤来回收析出的固体，在减压下进行干燥。向所得的固体中加入乙醇(120ml)，将混合物升温至100℃，缓慢滴加了水(50ml)。进一步将混合物在室温下搅拌1小时、在冰冷下搅拌15分钟，通过过滤来回收析出的固体，在减压下进行干燥，得到了目标物(2.1g)。
[1599]1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ9.08(d,j＝2.2hz,1h),8.62(d,j＝2.0hz,1h),7.75-7.67(m,2h),7.59-7.49(m,2h),7.46-7.37(m,1h).
[1600]
m/z:理论值296.02,实测值297.03[m h]
[1601]
合成例11：2-苯基-2h-1,2-苯并噻嗪-3(4h)-酮(化合物(ic-13))的合成
[1602]
在氩气气氛下，向300ml的烧瓶中加入2-氯吡啶-3-乙腈(5.0g，33mmol)和4mol/l氢氧化钠水溶液(75ml)，将混合物在110℃下搅拌1小时。将混合物冷却至室温后，搅拌1小时，在冰冷下缓慢滴加6mol/l盐酸(60ml)，并搅拌1小时。通过过滤来回收析出的固体，用2-丙醇(40ml)洗涤，在减压下进行干燥(5.6g)。
[1603]
在氩气气氛下，向200ml的烧瓶中加入所述固体和无水thf(109ml)，在冰冷下搅拌15分钟。向所得的混合物中依次加入三乙胺(9.2ml、66mmol)、苯胺(3.6ml、39mmol)和1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(9.4g，49mmol)，升温至室温，并搅拌2小时。向混合物中加入乙酸乙酯(100ml)，将所得的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)洗涤3次、用饱和食盐水(100ml)洗涤1次后，用硫酸钠进行干燥。通过过滤去除硫酸钠后，将滤液进行减压浓缩，得到了浓缩液(8.1g)。
[1604]
向所述浓缩液中加入无水dmf(20ml)，调制了稀释液。另外，在氩气气氛下，向300ml烧瓶中加入无水dmf(2ml)、氢氧化钠(2.6g，64mmol)和叔丁基硫醇(4.4ml，39mmol)，
在冰冷下搅拌10分钟，向所得的混合物中滴加所述稀释液后，将混合物在110℃下搅拌23小时。之后，在冰冷下向混合物中缓慢滴加了水(260ml)。向混合物中加入二氯甲烷，将所得的有机层用水洗涤2次、用饱和食盐水洗涤1次后，用硫酸钠进行干燥。通过过滤去除硫酸钠后，将滤液进行减压浓缩，得到了浓缩液。将所得的浓缩液通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯的体积比＝1/1)纯化，在减压下进行浓缩，得到了浓缩液。(1.4g)。
[1605]
在氩气气氛下，向所述浓缩液中加入二氯甲烷(16ml)，将混合物在冰冷下搅拌15分钟。向所得的混合物中加入间氯过氧苯甲酸(1.2g，5.2mmol)，并搅拌1小时，调制了有机层。向所得的有机层中加入饱和碳酸氢钠水溶液(16ml)，在室温下搅拌30分钟，去除水层后，用饱和硫代硫酸钠水溶液(20ml)、饱和食盐水(20ml)洗涤有机层，用硫酸钠干燥后，过滤，并进行减压浓缩(1.3g)。向所得的浓缩液中加入甲苯(85ml)和吡啶(8.5ml)，将混合物升温至100℃，搅拌1小时后，升温至120℃，并搅拌4小时。之后，将混合物冷却至室温，在减压下馏去溶剂后，将所得的残渣通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯的体积比＝1/3)纯化后，在减压下进行浓缩，得到了浓缩液。向所得的浓缩液中加入乙醇，升温至100℃，并缓慢滴加了水。将混合物冷却至室温后，通过过滤来回收析出的固体，得到了目标物(146mg)。
[1606]1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ8.82-8.71(m,1h),8.28(d,j＝4.1hz,1h),7.71(d,j＝7.4hz,1h),7.55(d,j＝7.9hz,2h),7.32-7.28(m,1h),7.17-7.07(m,2h),4.00(s,2h).
[1607]
m/z:理论值242.05,实测值243.05[m h]
[1608]
合成例12：2-(4-甲基-2-吡啶基)异噻唑并[5,4-b]吡啶-3(2h)-酮(化合物(ic-15))的合成
[1609]
在氩气气氛下，向100ml的烧瓶中加入2-氯吡啶-3-羰酰氯(5.0g，28mmol)和无水thf(12ml)，将混合物在冰冷下搅拌。用30分钟向所得的混合物中滴加三乙胺(4.8ml、34mmol)、2-氨基-5-甲基吡啶(3.7g，34mmol)和无水thf(28ml)的溶液，升温至室温，并搅拌23小时。在减压下馏去溶剂后，向所得的残渣中加入二氯甲烷(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)，并进行搅拌。去除水层后，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和饱和食盐水(50ml)依次洗涤有机层，用硫酸钠干燥，并进行减压浓缩，得到了浓缩液(7.1g)。
[1610]
向所述浓缩液中加入无水dmf(20ml)，调制了稀释液。另外，在氩气气氛下，向300ml烧瓶中加入无水dmf(4ml)、氢氧化钠(1.3g，34mmol)和叔丁基硫醇(3.6ml，32mmol)，在冰冷下搅拌，向所得的混合物中滴加所述稀释液后，将混合物升温至室温，并搅拌5小时。之后，在冰冷下用25分钟向混合物中缓慢滴加了水(240ml)。通过过滤来回收析出的固体，加入乙醇(60ml)，将混合物在100℃下搅拌后，滴加水(60ml)，将混合物在冰冷下冷却。通过过滤来回收析出的固体，将所得的固体在减压下进行干燥(5.4g)。
[1611]
在氩气气氛下，向100ml烧瓶中加入所述固体和二氯甲烷(60ml)，将混合物在冰冷下搅拌15分钟。向所得的混合物中加入间氯过氧苯甲酸(4.7g，20mmol)，并搅拌2小时，调制了有机层。向所得的有机层中加入饱和碳酸氢钠水溶液(60ml)，在室温下搅拌1小时后，通过过滤去除了析出的固体。去除滤液的水层后，用饱和硫代硫酸钠水溶液(50ml)和饱和食盐水(50ml)依次洗涤有机层，用硫酸钠干燥后，过滤，并进行减压浓缩(5.7g)。向所得的浓缩液中加入甲苯(356ml)和吡啶(36ml)，将混合物升温至100℃，并搅拌1小时。之后，将混合物冷却至室温，通过过滤去除析出的固体后，在减压下去除滤液的溶剂。将所得的残渣通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯的体积比＝1/1)纯化后，在减压下进行浓缩，得到了目标物
(1.3g)。
[1612]1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ8.82(dd,j＝4.8,1.7hz,1h),8.60(d,j＝8.5hz,1h),8.33(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),8.26(s,1h),7.66(dd,j＝8.5,2.3hz,1h),7.39(dd,j＝7.9,4.7hz,1h),2.39(s,3h).
[1613]
m/z:理论值243.05,实测值244.05[m h]
[1614]
合成例13：具有亚磷酸酯键的寡核苷酸前体的合成
[1615]
在氩气气氛下，向500ml的烧瓶中加入ho-me
c-suc-tob(15.1g，11.2mmol)、piv-tob(30.1g，30.2mmol)、无水氯仿(562ml)和无水乙腈(169ml)，调制了溶液。之后，加入分子筛3a(11.2g)、dg-ce亚磷酰胺(18.9g，22.5mmol)和三苯基膦(1.5g，5.6mmol)，将溶液搅拌30分钟。接下来，加入5-乙基硫基-1h-四唑(2.9g，22.5mmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，向溶液中加入2,2,2-三氟乙醇(8.2ml、112mmol)，在室温下搅拌30分钟后，依次加入2,6-二甲基苯胺(10ml、81mmol)和pos(5.5g，28mmol)，在室温下将溶液搅拌1.0小时。之后，依次加入2,3-二甲基呋喃(11.8ml，0.11mol)、三氟乙酸(27.1ml，0.35mol)和2,6-二甲基苯胺(436μl、3.5mmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。进一步加入三氟乙酸(1.7ml，22mmol)和2,6-二甲基苯胺(28μl、0.22mmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。接下来，向溶液中依次加入吡啶(91ml，1.1mmol)和无水甲醇(7.3ml)，将溶液在室温下搅拌120分钟。通过过滤去除分子筛3a后，添加乙腈(4.7l)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为二聚体的寡核苷酸ho-g(s)
me
c-suc-tob的混合物(50g，收率99％)。
[1616]
m/z：理论值1808.12，实测值1809.13[m h]
[1617]
除了使用上述中得到的固体(50g)、无水二氯甲烷代替无水氯仿和da-ce亚磷酰胺代替dg-ce亚磷酰胺以外，与上述同样地进行操作，得到了piv-tob和作为三聚体的寡核苷酸ho-a(s)g(s)
me
c-suc-tob的混合物(54.4g，收率99％)。
[1618]
m/z：理论值2259.24，实测值2260.25[m h]
[1619]
在氩气气氛下，向20ml的双口烧瓶中加入上述中得到的固体(3.0g)、无水二氯甲烷(30ml)和无水乙腈(9.1ml)，调制了溶液。之后，依次加入分子筛3a(0.6g)、dg-ce亚磷酰胺(1.0g，1.2mmol)和5-乙基硫基-1h-四唑(161mg，1.2mmol)，将溶液在室温下搅拌60分钟。之后，向溶液中加入2,2,2-三氟乙醇(197μl、6.1mmol)，在室温下搅拌30分钟。通过过滤去除分子筛3a后，添加乙腈(152ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行干燥，得到了piv-tob和作为四聚体的寡核苷酸前体dmtro-g(iii)a(s)g(s)
me
c-suc-tob的混合物(3.3g，收率98％)。
[1620]
m/z：理论值2997.50，实测值1499.75[m 2h]
2
[1621]
实施例22～41和比较例4：使用各种氧化剂的氧化
[1622]
向烧瓶中加入dmtro-g(iii)a(s)g(s)
me
c-suc-tob和piv-tob的混合物(100mg：以dmtro-g(iii)a(s)g(s)
me
c-suc-tob计为52.8mg、0.018mmol)、以及无水二氯甲烷(0.9ml)，调制了溶液。向溶液中加入吡啶(0.11mmol)和水(8.8μl)后，添加下述表7～9所示的各种氧化剂(53μmol)，在室温下搅拌3小时进行氧化，合成了作为四聚体的寡核苷酸dmtro-g(o)a(s)g(s)
me
c-suc-tob。之后，加入三苯基膦(9.2mg，35μmol)，将溶液在室温下搅拌30分钟。之后，添加乙腈(129ml)，将析出的固体通过使用了kiriyama漏斗的抽吸过滤回收后，进行减
压干燥，得到了piv-tob和作为四聚体的寡核苷酸dmtro-g(o)a(s)g(s)
me
c-suc-tob的混合物。
[1623]
m/z：理论值3013.49，实测值3014.54[m h]
[1624]
需要说明的是，化合物(ib-2)～化合物(ib-5)和化合物(ib-8)使用了上述的合成例3～7中得到的化合物。
[1625]
化合物(ic-11)～化合物(ic-13)和化合物(ic-15)使用了上述的合成例9～12中得到的化合物。
[1626]
化合物(ic-1)、化合物(ic-2)、化合物(ic-5)、化合物(ic-10)、化合物(ic-14)、化合物(ic-16)和化合物(ic-17)使用了通过非专利文献2的supporting information中所记载的方法合成的化合物。
[1627]
其他氧化剂使用了市售品。
[1628]
实施例22～41和比较例4的对比(脱硫体的比例)
[1629]
如下进行操作，分析具有硫代磷酸酯键的寡核苷酸和硫代磷酸酯键转化成磷酸酯键而得到的副产物(以下记载为“脱硫体”)，计算出脱硫体的比例。
[1630]
将实施例22～41或比较例4中得到的固体(5mg)和28重量％氨水(5ml)装入高压釜中，在65℃下加热4小时后，冷却至室温。利用注射器式过滤器去除反应液中的不溶物后，用离心蒸发器减压浓缩，得到了具有硫代磷酸酯键的dmtro-g(o)a(s)g(s)
me
c-oh(以下记载为“目标寡核苷酸”)的水溶液。
[1631]
m/z：理论值1547.37，实测值1546.34[m-h]-[1632]
通过液相色谱-质谱分析(lc-ms)分析了包含所得目标寡核苷酸和脱硫体的混合物。使用所观测到的各化合物(目标寡核苷酸和脱硫体)的萃取离子色谱图(eic)，计算出各化合物的峰面积，通过下述式计算出脱硫体的比例。结果见表7和8。
[1633]
脱硫体的比例(％)＝(脱硫体的峰面积/目标寡核苷酸的峰面积)
×
100
[1634]
[表7]
[1635]
[1636][1637]
[表8]
[1638][1639]
由表7和8的结果可知，作为氧化剂，通过使用表7和8所示的化合物(ic-1)等代替碘，可抑制脱硫体的生成。
[1640]
实施例22～32和比较例4的对比(缺损体的比例)
[1641]
进行上述的实施例22～32和比较例4的氧化为止的操作，调制了包含作为四聚体的寡核苷酸dmtro-g(o)a(s)g(s)
me
c-suc-tob(以下记载为“氧化体”)的溶液。将该溶液(10μl)和ddtt(1mg)装入1ml小瓶中，用四氢呋喃(450μl)稀释后，装入dbu(20μl)，将溶液在室温下搅拌30秒，将未反应的dmtro-g(iii)a(s)g(s)
me
c-suc-tob硫化，合成dmtro-g(s)a(s)g(s)
me
c-suc-tob(以下记载为“硫化体”)，调制了包含氧化体和硫化体的试验液。对所得的试
验液进行ms分析，使用所观测到的各化合物(作为目标寡核苷酸的氧化体)和缺损体(ho-a(s)g(s)
me
c-suc-tob))的丰度，通过下述式计算出缺损体的比例。结果见表9。
[1642]
缺损体的比例(％)＝(缺损体的丰度/氧化体的丰度)
×
100
[1643]
[表9]
[1644][1645][1646]
由表9的结果可知，作为氧化剂，通过使用表9所示的化合物(ic-1)等(条件是，不包括化合物(ic-5))代替碘，可抑制缺损体的生成。
[1647]
产业适用性
[1648]
根据本发明的制备方法，与使用碘的情况相比，可抑制上述的缺损体或脱硫体的生成，而制备寡核苷酸。通过本发明的制备方法得到的寡核苷酸可在用于人体或动物的药品(rna、dna、寡核酸药物等)、功能性食品、用于特定保健的食品、食品、化学产品、用于生物体或用于工业的高分子材料等各种用途中使用。
[1649]
本技术以在日本技术的特愿2021-21175号作为基础，其内容全部包含在本技术说明书中。