作为cbl-b抑制剂的内酰胺
1.优先权申明
2.本技术要求2021年2月3日提交的美国临时专利申请第63/145,401号的优先权的权益，该美国临时专利申请的内容以引用方式并入本文。
技术领域
3.本文描述的技术整体涉及cbl-b的抑制剂，并且该抑制剂也具有针对c-cbl的活性，或者可以对c-cbl具有选择性，并且另外涉及该抑制剂的制备和使用方法。
背景技术：
4.casitas b谱系淋巴瘤-b(cbl-b)是ring e3泛素连接酶cbl家族的成员。cbl家族蛋白的常见功能是受体酪氨酸激酶信号传导的负调节。由于cbl-b抑制导致免疫激活，因此预计cbl-b抑制剂可能在多种肿瘤学适应症中具有广泛的活性。
5.cbl蛋白包含三个主要结构域：保守的n末端酪氨酸激酶结合(tkb)结构域、短接头区和ring指(rf)结构域。tkb结构域又由三个亚结构域构成：4-螺旋束(4h)、具有ef手折叠的钙结合结构域和变体src同源区2(sh2)结构域，这三个亚结构域都参与磷酸酪氨酸结合。tkb结构域结合含有磷酸酪氨酸基序的底物，诸如zap70。
6.具有内在的e3连接酶活性的保守的rf结构域可以募集e2泛素结合酶，并介导泛素向底物的转移。
7.接头结构域内y363处cbl-b的磷酸化通过去除tkb结构域对rf结构域的掩蔽来调节其e3泛素连接酶活性。
8.在t细胞中，cbl-b是直接调节细胞活化的关键耐受因子。具体而言，cbl-b在鼠类和人cd4 和cd8 t细胞中高度表达，在这些细胞中其通过控制活化阈值和对共刺激的需求，作为t细胞活化的有效负调节因子发挥作用。从机制上讲，cbl-b通过使t细胞受体(tcr)下游的多种底物，包括zap70泛素化而发挥作用，导致tcr内在化和信号传导终止。t细胞中cbl-b的缺失导致tcr表面表达延长，并且与tcr刺激组合导致活化标记物诸如cd25的表达增加、细胞因子产生和增殖。
9.小鼠模型已经令人惊讶地证明，cbl-b的缺失导致适应性和先天性抗肿瘤免疫增加，这是由增强的t细胞效应子功能以及增加的自然杀伤(nk)细胞活性介导的。cbl-b缺陷小鼠以cd8 t细胞依赖性的方式自发排斥多种癌症肿瘤，包括自发性实体瘤和造血系统恶性肿瘤。cbl-b-/-cd8 t细胞的过继转移足以排斥肿瘤，表明cbl-b在调节t细胞介导的抗肿瘤活性中具有非冗余作用。
10.因此，开发一种抑制cbl-b的小分子方法是癌症免疫疗法的有希望但具有挑战性的目标。
11.然而，c-cbl，一个与cbl-b密切相关的家族成员，在n末端处(包括在tkb和ring结构域中)与cbl-b具有高序列同源性。c-cbl对许多生长因子受体，包括flt3和c-kit的信号传导进行负调节。在其他缺陷中，c-cbl缺陷小鼠表现出骨髓中造血干细胞和多能祖细胞的
扩增。在条件性缺乏c-cbl和cbl-b的小鼠中，这种缺陷被放大，并且小鼠在约8周龄时发展为快速进行性和致命的骨髓增生性疾病，并伴有脾肿大。考虑到c-cbl在生长因子受体调节中的广泛功能，以及在缺乏c-cbl和cbl-b的情况下这些途径的失调的强烈放大，对cbl-b而不是c-cbl具有选择性的化合物可能是非常理想的癌症免疫治疗剂。对可以称为“泛cbl”的cbl-b和c-cbl都具有活性的化合物，如果它们对cbl-b的抑制作用足够强，则可能证明是有益的。
12.因此，需要既抑制cbl-b又能表现出对c-cbl结合的选择性或对c-cbl具有已知活性的化合物。
13.包括本文背景的讨论以解释该技术的上下文。这不应被视为承认所提及的任何材料在所附任何权利要求的优先权日已公开可获得、已知或成为公知常识的一部分。
14.在本技术的整个说明书和权利要求书中，词语“包括”及其变型(诸如“包含”和“含有”)并不旨在排除其他添加剂、组分、整体或步骤。
技术实现要素：
15.本公开涉及用于抑制cbl-b受体的化合物，其也表现出针对c-cbl受体的抑制活性，并且在一些情况下对c-cbl受体具有选择性。特别地，本公开包括许多此类化合物及其使用方法。
16.本公开提供了式(i-a)、(i-b)、(i-c)、(i-d)、(i-e)、(i-f)和(i-g)的化合物：
17.[0018][0019]
在式(i-a)、(i-b)、(i-c)、(i-d)、(i-e)、(i-f)和(i-g)中，q为可选地被一个或多个烷基、环烷基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基基团。
[0020]
本公开包括用于制备式(i-a)、(i-b)、(i-c)、(i-d)、(i-e)、(i-f)和(i-g)的化合物的方法。
[0021]
本公开还包括一种治疗方法，该方法包括将式(i-a)、(i-b)、(i-c)、(i-d)、(i-e)、(i-f)和(i-g)的化合物可选地与另一种药剂诸如检查点抑制剂联合施用于患有癌症的患者。
附图说明
[0022]
图1示出了本文所述化合物的示例性合成方案；
[0023]
图2示出了本文所述化合物的示例性合成方案；
[0024]
图3示出了本文所述化合物的示例性合成方案；
[0025]
图4示出了本文所述化合物的示例性合成方案；
[0026]
图5a-图5x示出了在本文公开的化合物的合成中中间体化合物的示例性合成方案；
[0027]
图6-图48示出了本文公开的各种示例性化合物的代表性合成方案。
[0028]
图49示出了本文所选化合物的活性数据表。
[0029]
不同附图中相同的参考符号指示相同的元件。
具体实施方式
[0030]
本公开涉及与cbl-b抑制剂结合并且对c-cbl表现出选择性或针对c-cbl具有抑制活性的化合物。本文还描述了制备此类化合物的方法，以及用于评估其效力和选择性以及代谢和渗透特性的测定。
[0031]
结构
[0032]
本公开包括式(i-a)化合物，
[0033][0034]
其中：
[0035]
q为可选地被一个或多个烷基、环烷基、芳基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基；
[0036]
y1和y2独立地为ch、cf或n；
[0037]
r3、r4独立地选自：h、卤素、烷基、cn、oh、烷氧基和卤代烷基，其中r3和r4中的至少一者为卤素；
[0038]
r5选自：h、卤基、cn或l
1a
–r10
，其中l
1a
为
–
c(l
1br11
)(r
12
)
–
、
–
n(l
1br11
)
–
、
–
c(＝o)n(l
1br11
)
–
、o、s、羰基或键，其中：
[0039]
l
1b
为亚烷基或键；并且
[0040]r10
、r
11
和r
12
独立地为h、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、环烷基、桥连双环基、稠合双环基、螺环基、烯基、环烯基、炔基、酰氨基烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且r
10
、r
11
和r
12
各自可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：卤基、cn、氨基、烷基氨基、烷基羰基、oh、氧代基、烷氧基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰胺基、烷基磺酰胺基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0041]
x为卤基、卤代烷基或环烷基；并且
[0042]
z为
–
l2nr7r8或
–
c(h)(nr7r8)r
6a
；
[0043]
其中：
[0044]
l2为
–
c(h)r
6a
–
、
–
c(＝o)
–
或键；
[0045]r6a
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；并且
[0046]
r7和r8独立地选自h、烷基、环烷基、螺环基、桥连双环基、羟烷基、杂环基和卤代烷基，
[0047]
其中，如果r7或r8中的任一者为烷基、环烷基或杂环基，则所述烷基、环烷基或杂环基基团可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、杂环基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氰基、羧烷基和卤代烷基；
[0048]
或者
[0049]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0050]
3元至8元饱和单环，
[0051]
其中所述饱和单环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0052]
前提条件是：
[0053]
当y1和y2两者均为ch，r5＝h，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时：
[0054]
如果r3＝r4＝f，并且l2为ch2，则取代的饱和单环不为3-氟-氮杂环丁烷-1-基；
[0055]
如果r3＝r4＝f，并且l2为ch(ch3)，则所述取代的饱和单环不为3-氟-吡咯烷-1-基，并且
[0056]
如果r3为f，r4为h，并且l2为ch2，则所述取代的饱和单环不为以下项中的一者：4-氟环己胺-1-基、环己胺-1-基和吡咯烷-1-基；
[0057]
或者
[0058]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0059]
3元至8元饱和螺环，
[0060]
其中所述饱和螺环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、环烷基、烷氧基、烷氧基烷基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0061]
前提条件是：
[0062]
当y1和y2两者均为ch，r3为f并且r4为h，r5＝h，l2为
–
c(h)r6–
，r6为h或甲基，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，取代的饱和螺环不为5-氮杂螺[2.4]庚-5-基；
[0063]
或者
[0064]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0065]
3元至8元饱和稠合双环，
[0066]
其中所述饱和稠合双环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0067]
或者
[0068]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0069]
3元至8元饱和桥连双环，
[0070]
其中所述饱和桥连双环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0071]
前提条件是：
[0072]
当y1和y2两者均为ch，r3为f并且r4为h，r5＝h，l2为ch2，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，取代的饱和桥连双环不为7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基、3-氟-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基；或8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基；
[0073]
或者z为
[0074]
其中：
[0075]
l3为
–
c(h)r
6b
–
、
–
n(r
6b
)
–
、o、
–
oc(h)(r
6b
)
–
、s或键；
[0076]r6b
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；
[0077]
j为选自单环、螺环、桥连双环和稠合双环的饱和3元至10元含胺环，或5元或6元杂芳族环，或3元至10元稠合杂芳族环系，并且其中：
[0078]
j可选地被一个或多个磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基或卤代烷基取代；并且
[0079]
r9＝h、烷基、氨基烷基、卤代烷基或羧烷基；
[0080]
否则
[0081]
z为h，
[0082]
或其对映体、非对映体或药用盐或溶剂合物。
[0083]
如下所述，还包括许多式(i-a)的实施方案，其中应理解的是，任何特定的实施方案可以另外包括任何一个或多个其他实施方案的特征，除非这些特征会发生冲突。
[0084]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r3为f并且r4为h。
[0085]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r5为h。
[0086]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中y1＝y2＝ch。
[0087]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中x＝cf3。
[0088]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0089]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r6为h或甲基。
[0090]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成选自以下项的饱和单环：氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌嗪-1-基、哌啶-1-基、吗啉-4-基、六氢嘧啶-1-基和1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基。
[0091]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me，并且r7和r8以及它们均键合的氮形成哌嗪-1-基环。
[0092]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me，并且r7和r8以及它们均键合的氮形成被一个或多个选自以下项的基团取代的哌嗪-1-基环：烷基、磺酰基、乙酰基、卤代烷基、环烷基和氧杂环丁烷基。
[0093]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成可选地被一个或多个选自以下项的基团取代的3元至8元饱和单环：甲基、氟甲基、羟乙基、氯甲基、羟基、丙基、异丙基、甲氧基、甲氧基甲基、二氟甲基、甲氧基乙基、乙烯基、甲磺酰基、2-氟乙基、乙酰基和1,1,1-三氟乙基。
[0094]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成可选地被一个或多个选自以下项的基团取代的氮杂环丁烷-1-基环：甲基、乙基、丙基、异丙基、2-羟乙基、氟甲基、氯甲基、羟甲基、甲氧基、乙烯基、羟基、甲氧基甲基和二氟甲基。
[0095]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中氮杂环丁烷-1-基环在3-位置处被两个选自甲基、乙基、丙基、异丙基、2-羟乙基、氟甲基、氯甲基、羟甲基、甲氧基、乙烯基、羟基、甲氧基甲基和二氟甲基的基团取代。
[0096]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成选自以下项的螺环：6-氧杂-1-氮杂螺[3.3]庚-1-基、2-氮杂螺[3.3]庚-2-基、5-氮杂螺[2.3]己烷、1,1-二氟-5-氮杂螺[2.3]己-5-基和6-硫杂-1-氮杂螺[3.3]庚-1-基-6,6-二氧化物。
[0097]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成稠合双环，即3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基。
[0098]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成桥连双环，即2-氮杂双环[2.1.1]己-2-基。
[0099]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r6为环丙基。
[0100]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为并且l2为亚甲基。
[0101]
如权利要求1所述的化合物，其中z为l2为o，j为1h-吡唑-4-基，并且r9＝h。
[0102]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为并且j为3-氮杂环丁炔基。
[0103]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为h。
[0104]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成可选地被一个或多个选自以下项的基团取代的氮杂环丁烷-1-基环：甲基、乙基、丙基、异丙基、2-羟乙基、氟甲基、氯甲基、羟甲基、甲氧基、乙烯基、羟基、甲氧基甲基和二氟甲基。在另一实施方案中，氮杂环丁烷-1-基环在3-位置处被两个选自甲基、乙基、丙基、异丙基、2-羟乙基、氟甲基、氯甲基、羟甲基、甲氧基、乙烯基、羟基、甲氧基甲基和二氟甲基的基团取代。
[0105]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成选自以下项的螺环：6-氧杂-1-氮杂螺[3.3]庚-1-基、2-氮杂螺[3.3]庚-2-基、5-氮杂螺[2.3]己烷、1,1-二氟-5-氮杂螺[2.3]己-5-基和6-硫杂-1-氮杂螺[3.3]庚-1-基-6,6-二氧化物。
[0106]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成稠合双环，即3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基。
[0107]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成桥连双环，即2-氮杂双环[2.1.1]己-2-基。
[0108]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中z为-ch2nhr7，其中r7为被烷基基团取代的环烷基。
[0109]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r7为1-甲基-环丁-1-基。
[0110]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)，其中r5为l
1a-r
10
。
[0111]
本公开包括式(i-b)化合物，
[0112][0113]
其中：
[0114]
q为可选地被一个或多个烷基、环烷基、芳基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基；
[0115]
y1和y2独立地为ch、cf或n；
[0116]
r1、r2、r3和r4各自独立地选自：h、卤基、烷基、环烷基、cn、oh、烷氧基和卤代烷基；
[0117]
其中r1、r2、r3和r4中的至少一者为卤素；
[0118]
r5选自：h、卤基、cn或l
1a
–r10
，其中l
1a
为
–
c(l
1br11
)(r
12
)
–
、
–
n(l
1br11
)
–
、
–
c(＝o)n(l
1br11
)
–
、o、s、羰基或键，其中：
[0119]
l
1b
为亚烷基或键；并且
[0120]r10
、r
11
和r
12
独立地为h、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、环烷基、桥连双环基、稠合双环基、螺环基、烯基、环烯基、炔基、酰氨基烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且r
10
、r
11
和r
12
各自可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：卤基、cn、氨基、烷基氨基、烷基羰基、oh、氧代基、烷氧基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰胺基、烷基磺酰胺基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0121]
x为卤基、卤代烷基或环烷基；并且
[0122]
z为
–
l2nr7r8或
–
c(h)(nr7r8)r
6a
；
[0123]
其中：
[0124]
l2为
–
c(h)r
6a
–
、
–
c(＝o)
–
或键；
[0125]r6a
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；并且
[0126]
r7和r8独立地选自h、烷基、环烷基、螺环基、桥连双环基、羟烷基、氨基烷基、杂环基和卤代烷基，
[0127]
其中，如果r7或r8中的任一者为烷基、环烷基或杂环基，则所述烷基、环烷基或杂环基基团可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、杂环基、羟烷基、氰基、羧烷基和卤代烷基；
[0128]
或者
[0129]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0130]
3元至8元饱和单环，
[0131]
其中所述饱和单环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基或卤代烷基；
[0132]
前提条件是：
[0133]
当y1和y2两者均为ch，r1＝f，r2＝甲基，r3＝r4＝f，r5＝h，l2为
–
ch2–
，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，取代的饱和单环不为3-氟-氮杂环丁烷-1-基、3-氰基-氮杂环丁烷-1-基、3-甲氧基-氮杂环丁烷-1-基、3-二氟甲基-氮杂环丁烷-1-基、3-氰基-吡咯烷-1-基、
3-氟-吡咯烷-1-基、3,4-二氟-吡咯烷-1-基、3,3-二氟-吡咯烷-1-基或3-甲基磺酰基-吡咯烷-1-基；
[0134]
当y1和y2两者均为ch，r1＝f，r2＝甲基，r3＝r4＝f，r5＝h，l2为
–
ch(ch3)
–
，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，所述取代的饱和单环不为3-氟-吡咯烷-1-基；并且
[0135]
当y1和y2两者均为ch，r1＝f，r2＝甲基，r3为f，r4为f，r5＝h，l2为键，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，所述取代的饱和单环不为以下项中的一者：哌嗪-1-基、4-甲基-哌嗪-1-基或2,4-二甲基-哌嗪-1-基；
[0136]
并且
[0137]
当y1和y2两者均为ch，r1＝f，r2＝甲基，r3为f，r4为f，r5＝h，l2为c(＝o)，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，所述取代的饱和单环不为以下项中的一者：3-羟基-吡咯烷-1-基或3-二氟甲基-氮杂环丁烷-1-基；
[0138]
或者
[0139]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0140]
3元至8元饱和螺环，
[0141]
其中所述饱和螺环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、环烷基、烷氧基、烷氧基烷基、羟烷基、氧代基、羧烷基或卤代烷基；
[0142]
或者
[0143]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0144]
3元至8元饱和稠合双环，
[0145]
其中所述饱和稠合双环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0146]
或者
[0147]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0148]
3元至8元饱和桥连双环，
[0149]
其中所述饱和桥连双环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0150]
前提条件是：
[0151]
当y1和y2两者均为ch，r1为f，r2为甲基，r3为f，r4为h，r5＝h，l2为键，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，取代的饱和桥连双环不为以下项中的一者：5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、2-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、3-甲基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-8-基或8-甲基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基；
[0152]
或者z为
[0153]
其中：
[0154]
l3为
–
c(h)r
6b
–
、
–
n(r
6b
)
–
、o、
–
oc(h)(r
6b
)
–
、s或键；
[0155]r6b
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；
[0156]
j为选自单环、稠合双环、桥连双环和螺环的饱和3元至10元含胺环，或5元或6元杂芳族环，或3元至10元稠合杂芳族环系，并且其中：
[0157]
j通过碳原子键合到l3；并且
[0158]
j可选地被一个或多个磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基或卤代烷基取代；并且
[0159]
r9＝h、烷基、环烷基、氨基烷基、卤代烷基或羧烷基；
[0160]
前提条件是，
[0161]
当l3为
–
n(me)
–
，y1和y2两者均为ch，r1为f，r2为甲基，r3为f，r4为f，r5＝h，x＝cf3，r9为h，并且q为2-甲基三唑-1-基时，j不为4-氟-吡咯烷-3-基；并且
[0162]
当l3为键，y1和y2两者均为ch，r1为f，r2为甲基，r3为f，r4为f，r5＝h，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，j不为3-氟-吡啶-5-基；
[0163]
否则z为h；
[0164]
并且
[0165]
前提条件是，当y1和y2两者均为ch，r2为甲基，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时：
[0166]
如果r3＝r4＝f，并且r1＝h，则z不为h；
[0167]
如果r3＝f，r4＝h，并且r1为f或h，则z不为h；并且
[0168]
如果r3和r4两者均为h，并且r1＝f，则z不为h。
[0169]
或其对映体、非对映体或药用盐。
[0170]
如下所述，还包括许多式(i-b)的实施方案，其中应理解的是，任何特定的实施方案可以另外包括任何一个或多个其他实施方案的特征，除非这些特征会发生冲突。
[0171]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中r1为f，r2为甲基，r3为f，并且r4为h。
[0172]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中r1为h或f，r2为f，并且r3＝r4＝h。
[0173]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中r5为h。
[0174]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中y1＝y2＝ch。
[0175]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中x＝cf3。
[0176]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0177]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me。
[0178]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成可选地被一个或多个选自以下项的基团取代的3元至8元饱和单环：甲基、氟甲基、羟乙基、氯甲基、羟基、丙基、异丙基、甲氧基、甲氧基甲基、二氟甲基、甲氧基乙基、乙烯基、甲磺酰基、2-氟乙基、乙酰基和1,1,1-三氟乙基。
[0179]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me，并且r7和r8以及它们均键合的氮形成被一个或多个选自以下项的基团取代的哌嗪-1-基环：烷基、磺酰基、乙酰基、卤代烷基、环烷基和氧杂环丁烷基。
[0180]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中z为-ch2nhr7，其中r7为被烷基基团取代的环烷基。
[0181]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中r7为1-甲基-环丁-1-基。
[0182]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-b)，其中r5为l
1a
–r10
。
[0183]
本公开包括式(i-c)化合物，
[0184][0185]
其中：
[0186]
q为可选地被一个或多个烷基、芳基、环烷基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基；
[0187]
y1和y2独立地为ch、cf或n；
[0188]
t1和t2各自独立地为选自以下项的基团：[
–
c(r1)(r2)
–
]n、
–o–
、
–
c(r1)(r2)
–o–
、》c＝o、
–
c(r1)(r2)
–
c(＝o)
–
、
–
c(r1)(r2)
–
s(＝o)2–
和》s(＝o)2，前提条件是t1和t2一起不为
–
ch2–o–
、
–o–o–
或
–o–
c(＝o)
–o–
；
[0189]
其中n＝0、1或2，并且r1和r2中的每一者独立地选自：h、卤基、烷基、烯基、氰基、羟基、烷氧基、环烷基、羟烷基和卤代烷基，前提条件是，当t1和t2一起为
–
ch2c(r1)(r2)ch2–
时，r1和r2都不为氰基；
[0190]
或者r1和r2与它们均键合的碳原子一起形成环烷基或杂环基环；
[0191]
r3和r4独立地选自：h和卤基、烷基、cn、oh、烷氧基和卤代烷基；
[0192]
r5选自：h、卤基、cn或l
1a
–r10
，其中l
1a
为
–
c(l
1br11
)(r
12
)
–
、
–
n(l
1br11
)
–
、
–
c(＝o)n(r
11
)
–
、o、s、羰基或键，其中：
[0193]
l
1b
为亚烷基或键；并且
[0194]r10
、r
11
和r
12
独立地为h、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、环烷基、桥连双环基、稠合双环基、螺环基、烯基、环烯基、炔基、酰氨基烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且r
10
、r
11
和r
12
各自可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：卤基、cn、氨基、烷基氨基、烷基羰基、oh、氧代基、烷氧基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰胺基、烷基磺酰胺基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0195]
x为卤基、卤代烷基或环烷基；并且
[0196]
z为
–
l2nr7r8或
–
c(h)(nr7r8)r
6a
；
[0197]
其中：
[0198]
l2为
–
c(h)r
6a
–
、
–
c(＝o)
–
或键；
[0199]r6a
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；并且
[0200]
r7和r8独立地选自h、烷基、螺环基、环烷基、桥连双环基、羟烷基、杂环基和卤代烷基，
[0201]
其中，如果r7或r8中的任一者为烷基、环烷基或杂环基，则所述烷基、环烷基或杂环基基团可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、杂环基、羟烷基、氰基、羧烷基和卤代烷基；
[0202]
或者
[0203]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0204]
3元至8元饱和单环，
[0205]
其中所述饱和单环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0206]
前提条件是：
[0207]
当y1和y2两者均为ch，r3＝r4＝f，t1和t2两者均为ch2，r5＝h，r6为甲基，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，取代的饱和单环不为3-氟-吡咯烷-1-基；
[0208]
或者
[0209]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0210]
3元至8元饱和螺环，
[0211]
其中所述饱和螺环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、环烷基、烷氧基、烷氧基烷基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0212]
前提条件是：
[0213]
当y1和y2两者均为ch，r3和r4两者均为h，t1为ch2或
–
(ch2)
–o–
，t2为(ch2)2，r5＝h，r6为h或甲基，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，取代的饱和螺环不为5-氮杂螺[2.4]庚-5-基；
[0214]
或者
[0215]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0216]
3元至8元饱和稠合双环，
[0217]
其中所述饱和稠合双环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0218]
或者
[0219]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0220]
3元至8元饱和桥连双环，
[0221]
其中所述饱和桥连双环可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0222]
或者z为
[0223]
其中：
[0224]
l3为
–
c(h)r
6b
–
、
–
n(r
6b
)
–
、o、
–
oc(h)(r
6b
)
–
、s或键；
[0225]r6b
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；
[0226]
j为选自单环、螺环、桥连双环或稠合双环的饱和3元至10元饱和含胺环，或5元或6元杂芳族环，或3元至10元稠合杂芳族环系，并且其中：
[0227]
j通过碳原子键合到l3；并且
[0228]
j可选地被一个或多个磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基或卤代烷基取代；并且
[0229]
r9＝h、烷基、氨基烷基、卤代烷基、环烷基或羧烷基；
[0230]
否则
[0231]
z为h，
[0232]
前提条件是：
[0233]
当y1和y2两者均为ch，t＝cf2或ch(ch2oh)或键，r3＝r4＝h，r5＝h，r6为h，x＝cf3，并且q为2-甲基三唑-1-基时，z不为h；
[0234]
或其对映体、非对映体或药用盐。
[0235]
如下所述，还包括许多式(i-c)的实施方案，其中应理解的是，任何特定的实施方案可以另外包括任何一个或多个其他实施方案的特征，除非这些特征会发生冲突。
[0236]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，进一步的前提条件是t1和t2一起不为
–
ch2–o–
ch2–
。
[0237]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中r5为h。
[0238]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中y1＝y2＝ch。
[0239]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中x＝cf3。
[0240]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0241]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me。
[0242]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成可选地被一个或多个选自以下项的基团取代的3元至8元饱和单环：甲基、氟甲基、羟乙基、氯甲基、羟基、丙基、异丙基、甲氧基、甲氧基甲基、二氟甲基、甲氧基乙基、乙烯基、甲磺酰基、2-氟乙基、乙酰基和1,1,1-三氟乙基。
[0243]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me，并且r7和r8以及它们均键合的氮形成被一个或多个选自以下项的基团取代的哌嗪-1-基环：烷基、磺酰基、乙酰基、卤代烷基、环烷基和氧杂环丁烷基。
[0244]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中z为-ch2nhr7，其中r7为被烷基基团取代的环烷基。
[0245]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中r7为1-甲基-环丁-1-基。
[0246]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-c)，其中r5为l
1a
–r10
。。
[0247]
一种式(i-d)化合物，
[0248][0249]
其中：
[0250]
q为可选地被一个或多个烷基、芳基、环烷基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基；
[0251]
y1和y2独立地为ch、cf或n；
[0252]
t为选自以下项的基团：[
–
c(r2)(r3)
–
]n、
–o–
、
–
c(r2)(r3)
–o–
、》c＝o和》s(＝o)2；
[0253]
其中n＝0、1或2，并且r2和r3中的每一者独立地选自：h、卤基、烷基、烯基、氰基、羟基、烷氧基、环烷基、羟烷基和卤代烷基；
[0254]
r1和r4独立地选自：h和卤基、烷基、cn、oh、烷氧基和卤代烷基；
[0255]
r5选自：h、卤基、cn或l
1a
–r10
，其中l
1a
为
–
c(l
1br11
)(r
12
)
–
、
–
n(l
1br11
)
–
、
–
c(＝o)n(l
1br11
)
–
、o、s、羰基或键，其中：
[0256]
l
1b
为亚烷基或键；并且
[0257]r10
、r
11
和r
12
独立地为h、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、环烷基、桥连双环基、稠合双环基、螺环基、烯基、环烯基、炔基、酰氨基烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且r
10
、r
11
和r
12
各自可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：卤基、cn、氨基、烷基氨基、烷基羰基、oh、氧代基、烷氧基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰胺基、烷基磺酰胺基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0258]
x为卤基、卤代烷基或环烷基；并且
[0259]
z为
–
l2nr7r8或
–
c(h)(nr7r8)r
6a
；
[0260]
其中：
[0261]
l2为
–
c(h)r
6a
–
、
–
c(＝o)
–
或键；
[0262]r6a
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；并且
[0263]
r7和r8独立地选自h、烷基、环烷基、螺环基、桥连双环基、羟烷基、杂环基和卤代烷基，
[0264]
其中，如果r7或r8中的任一者为烷基、环烷基或杂环基，则所述烷基、环烷基或杂环基基团可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、杂环基、羟烷基、氰基、羧烷基和卤代烷基；
[0265]
或者
[0266]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成：
[0267]
选自饱和单环、螺环、桥连双环或稠合双环的3元至10元环状基团，其中所述3元至10元环状基团可选地被一个或多个独立地选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0268]
前提条件是：
[0269]
当y1和y2两者均为ch，x＝cf3，r5为h，r6为h，并且q为2-甲基三唑-1-基时：
[0270]
如果t为ch2，则所述3元至10元环状基团不为3-氟-吡咯烷-1-基；
[0271]
或者z为
[0272]
其中：
[0273]
l3为
–
c(h)r6–
、
–
n(r6)
–
、o、
–
oc(h)(r
6b
)
–
、s或键；
[0274]r6b
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；
[0275]
j为选自单环、螺环、桥连双环和稠合双环的饱和3元至10元含胺环，或5元或6元杂芳族环，或3元至10元稠合杂芳族环系，并且其中：
[0276]
j通过碳原子键合到l3；并且
[0277]
j可选地被一个或多个磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基或卤代烷基取代；并且
[0278]
r9＝h、烷基、环烷基、氨基烷基、卤代烷基或羧烷基；
[0279]
否则
[0280]
z为h，
[0281]
前提条件是：
[0282]
当y1和y2两者均为ch，x＝cf3，r5为h，q为2-甲基三唑-1-基，并且t为ch(r3)，其中r2为h或甲基，或者t为[ch2]2时，z不为h；
[0283]
或其对映体、非对映体或药用盐。
[0284]
如下所述，还包括许多式(i-d)的实施方案，其中应理解的是，任何特定的实施方案可以另外包括任何一个或多个其他实施方案的特征，除非这些特征会发生冲突。
[0285]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中t为
–
ch2–
或-(ch2)2–
。
[0286]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0287]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中r5为h。
[0288]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中y1＝y2＝ch。
[0289]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中x＝cf3。
[0290]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0291]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me。
[0292]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中z为
–
c(h)r6nr7r8并且r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成可选地被一个或多个选自以下项的基团取代的3元至8元饱和单环：甲基、氟甲基、羟乙基、氯甲基、羟基、丙基、异丙基、甲氧基、甲氧基甲基、二氟甲基、甲氧基乙基、乙烯基、甲磺酰基、2-氟乙基、乙酰基和1,1,1-三氟乙基。
[0293]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中z为
–
l2nr7r8，并且l2为ch2或c(h)me，并且r7和r8以及它们均键合的氮形成被一个或多个选自以下项的基团取代的哌嗪-1-基环：烷基、磺酰基、乙酰基、卤代烷基、环烷基和氧杂环丁烷基。
[0294]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中z为-ch2nhr7，其中r7为被烷基基团取代的环烷基。
[0295]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中r7为1-甲基-环丁-1-基。
[0296]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-d)，其中r5为l
1a
–r10
。
[0297]
一种式(i-e)化合物，
[0298][0299]
其中：
[0300]
q为可选地被一个或多个烷基、芳基、环烷基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基基团；
[0301]
y1和y2独立地为ch、cf或n；
[0302]
r1、r2、r3、r4独立地选自：h、卤素、烷基、环烷基、cn、oh、烷氧基和卤代烷基；或者
[0303]
r1和r2与它们均键合的碳原子一起形成可选地被一个或多个独立地选自以下项的基团取代的3元至5元环烷基或杂环基：卤素、cn、oh、磺酰基、烷氧基、烷基、环烷基、羟烷基或卤代烷基；或者
[0304]
r2和r3与它们分别键合的两个碳原子一起形成可选地被一个或多个独立地选自以下项的基团取代的3元至6元环烷基、环烯基、杂环基、杂芳基环：卤素、oh、烷氧基、氰基、磺酰基、卤代烷基、羟烷基、烷基、环烷基或烷氧基烷基；
[0305]
r5选自：h、卤基、cn或l
1a
–
r6，其中l
1a
为
–
c(l
1b
r7)(r8)
–
、
–
n(l
1b
r7)
–
、
–
c(＝o)n(l
1b
r7)
–
、o、s、羰基或键，其中：
[0306]
l
1b
为亚烷基或键；并且
[0307]
r6、r7和r8独立地为h、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、环烷基、桥连双环基、稠合双环基、螺环基、烯基、环烯基、炔基、芳基、酰氨基烷基、杂芳基或杂环基，并且r6、r7和r8可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：卤基、cn、氨基、烷基氨基、烷基羰基、oh、氧代基、烷氧基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰胺基、烷基磺酰胺基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0308]
x为卤基、卤代烷基或环烷基；并且
[0309]
l2为
–
c(h)r9–
、
–
c(＝o)
–
或键，其中r9＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；
[0310]r12
、r
13
、r
14
、r
15
和r
16
各自独立地选自：h、磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、杂环基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基，其中，如果r
12
、r
13
、r
14
、r
15
或r
16
中的任一者为烷基、烯基或卤代烷基，则所述烷基、烯基或卤代烷基可选地被一个或多个环烷基或杂环基基团取代；或者
[0311]r12
、r
13
、r
14
、r
15
和r
16
中的任何一对与它们所键合的哌嗪环碳原子一起形成环烷基或杂环基环，其中所述环可选地被一个或多个卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基或杂环基基团取代；
[0312]
前提条件是，当y1和y2两者均为ch，r1＝f，r2＝甲基，r3＝r4＝f，r5＝h，r
13
＝r
14
＝r
15
＝h，x＝cf3，q为2-甲基三唑-1-基，并且l1为键时，则r
12
不为甲基，并且r
16
不为h或甲基，
[0313]
或其对映体、非对映体或药用盐。
[0314]
如下所述，还包括许多式(i-e)的实施方案，其中应理解的是，任何特定的实施方案可以另外包括任何一个或多个其他实施方案的特征，除非这些特征会发生冲突。
[0315]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r1、r2、r3和r4中的至少一者为卤素。
[0316]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0317]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中x为cf3。
[0318]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中y1和y2两者均为ch。
[0319]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r1和r2与它们均键合的碳原子一起形成氧杂环丁烷环。
[0320]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r1和r2与它们均键合的碳原子一起形成选自环丙基、环丁基或氧杂环丁烷的环。
[0321]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r2和r3与它们分别键合的两个碳原子一起形成环丙基或环丁基环。
[0322]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r5为h。
[0323]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中l2为ch2。
[0324]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r
12
、r
13
、r
14
、r
15
和r
16
中的一者为异丙基并且其他为h。
[0325]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中z为-ch2nhr7，其中r7为被烷基基团取代的环烷基。
[0326]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r7为1-甲基-环丁-1-基。
[0327]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-e)，其中r5为l
1a
–r10
。。
[0328]
一种式(i-f)化合物，
[0329][0330]
其中：
[0331]
q为可选地被一个或多个烷基、环烷基、芳基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基；
[0332]
y1和y2独立地为ch、cf或n；
[0333]
r1为烷基并且r2为h，或者r1和r2一起为
–
ch2och2–
；
[0334]
r3为h或烷基卤素；
[0335]
r5选自：h、卤基、cn或l
1a
–r10
，其中l
1a
为
–
c(l
1br11
)(r
12
)
–
、
–
n(l
1br11
)
–
、
–
c(＝o)n(l
1br11
)
–
、o、s、羰基或键，其中：
[0336]
l
1b
为亚烷基或键；并且
[0337]r10
、r
11
和r
12
独立地为h、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、环烷基、桥连双环基、稠合双环基、螺环基、烯基、环烯基、炔基、酰氨基烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且r
10
、r
11
和r
12
各自可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：卤基、cn、氨基、烷基氨基、烷基羰基、oh、氧代基、烷氧基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰胺基、烷基磺酰胺基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0338]
x为卤基、卤代烷基或环烷基；并且
[0339]
z为
–
l2nr7r8或
–
c(h)(nr7r8)r
6a
；
[0340]
其中：
[0341]
l2为
–
c(h)r
6a
–
、
–
c(＝o)
–
或键；
[0342]r6a
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；并且
[0343]
r7和r8独立地选自h、烷基、环烷基、螺环基、桥连双环基、羟烷基、氨基烷基、杂环基和卤代烷基，
[0344]
其中，如果r7或r8中的任一者为烷基、环烷基或杂环基，则所述烷基、环烷基或杂环基基团可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、杂环基、羟烷基、氰基、羧烷基和卤代烷基；
[0345]
或者
[0346]
r7和r8与它们均键合的氮原子一起形成可选地被一个或多个选自以下项的基团取代的5元饱和单环：磺酰基、卤基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、氨基烷基、羟烷基、羧烷基和卤代烷基；
[0347]
或者
[0348]
或者z为
[0349]
其中：
[0350]
l3为
–
c(h)r
6b
–
、
–
n(r
6b
)
–
、o、
–
oc(h)(r
6b
)
–
、s或键；
[0351]r6b
＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；
[0352]
j为选自单环、螺环、桥连双环和稠合双环的饱和3元至10元含胺环，或5元或6元杂芳族环，或3元至10元稠合杂芳族环系，并且其中：
[0353]
j通过碳原子键合到l3；并且
[0354]
j可选地被一个或多个磺酰基、卤基、羟基、氰基、烷氧基、烷基、环烷基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基或卤代烷基取代；并且
[0355]
r9＝h、烷基、氨基烷基、卤代烷基或羧烷基；
[0356]
或其对映体、非对映体或药用盐或溶剂合物。
[0357]
如下所述，还包括许多式(i-f)的实施方案，其中应理解的是，任何特定的实施方案可以另外包括任何一个或多个其他实施方案的特征，除非这些特征会发生冲突。
[0358]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中z为l3为键，r9为h，并且j为饱和单环。
[0359]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中j为5元饱和单环。
[0360]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中r3为h。
[0361]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中r5为h。
[0362]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中y1＝y2＝ch。
[0363]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中x＝cf3。
[0364]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0365]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中r7为h并且r8为烷基。
[0366]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中z为-ch2nhr7，其中r7为被烷基基团取代的环烷基。
[0367]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中r7为1-甲基-环丁-1-基。
[0368]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-f)，其中r5为l
1a
–r10
。
[0369]
一种式(i-g)化合物，
[0370][0371]
其中：
[0372]
q为可选地被一个或多个芳基、烷基、环烷基或卤代烷基基团取代的5元杂芳基基团；
[0373]
y1和y2独立地为ch、cf或n；
[0374]
r1、r2、r3、r4独立地选自：h、卤素、烷基、环烷基、cn、oh、烷氧基和卤代烷基；或者
[0375]
r1和r2与它们均键合的碳原子一起形成可选地被一个或多个独立地选自以下项的基团取代的3元至5元环烷基或杂环基环：卤素、cn、oh、磺酰基、烷氧基、烷基、环烷基、羟烷基或卤代烷基；
[0376]
r5选自：h、卤基、cn或l
1a
–
r6，其中l
1a
为
–
c(l
1b
r7)(r8)
–
、
–
n(l
1b
r7)
–
、
–
c(＝o)n(l
1b
r7)
–
、o、s、羰基或键，其中：
[0377]
l
1b
为亚烷基或键；并且
[0378]
r6、r7和r8独立地为h、烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、环烷基、桥连双环基、稠合双环基、螺环基、烯基、环烯基、炔基、芳基、酰氨基烷基、杂芳基或杂环基，并且r6、r7和r8可选地被一个或多个选自以下项的基团取代：卤基、cn、氨基、烷基氨基、烷基羰基、oh、氧代基、烷氧基、烷基、环烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、磺酰胺基、烷基磺酰胺基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0379]
x为卤基、卤代烷基或环烷基；
[0380]
l2为
–
c(h)r9–
、
–
c(＝o)
–
或键，其中r9＝h、烷基、环烷基或卤代烷基；并且
[0381]
z为可选地被一个或多个独立地选自以下项的取代基取代的3元至10元环系：h、磺酰基、卤基、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、杂环基、烷氧基烷基、烯基、羟烷基、氧代基、羧烷基和卤代烷基；
[0382]
或其对映体、非对映体或药用盐或溶剂合物。
[0383]
如下所述，还包括许多式(i-g)的实施方案，其中应理解的是，任何特定的实施方案可以另外包括任何一个或多个其他实施方案的特征，除非这些特征会发生冲突。
[0384]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中z为被烷基基团取代的单环。
[0385]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中r1、r2、r3和r4中的至少一者为卤素。
[0386]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中q为2-甲基三唑-1-基或咪唑基。
[0387]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中x为cf3。
[0388]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中y1和y2两者均为ch。
[0389]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中r1和r2与它们均键合的碳原子一起形成氧杂环丁烷环。
[0390]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中r1和r2与它们均键合的碳原子一起
形成选自环丙基、环丁基或氧杂环丁烷的环。
[0391]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中z为-ch2nhr7，其中r7为被烷基基团取代的环烷基。
[0392]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中r7为1-甲基-环丁-1-基。
[0393]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中r5为l
1a
–r10
。
[0394]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-g)，其中r5为h。
[0395]
在一些实施方案中，化合物具有式(i-a)、(i-b)、(i-c)、(i-d)、(i-e)、(i-f)或(i-g)或其任何前述实施方案，其中q为4-甲基-2h-1,2,3-三唑-2-基、4-甲基-1h-1,2,3-三唑-1-基、5-甲基-1h-1,2,3-三唑-1-基、5-甲基-1h-吡唑-1-基、3-甲基-1h-吡唑-1-基、1-甲基-1h-咪唑-2-基或4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基。
[0396]
本文明确指出的任何化合物也被认为在本发明的范围内，包括但不限于以下化合物及其药用盐、水合物或溶剂合物。以下列表中每页的字体方案(a)、b)、c)
…
等)是为了便于逐页查看。
[0397]
[0398]
[0399]
[0400]
[0401]
[0402]
[0403]
[0404]
[0405]
[0406]
[0407][0408]
[0409][0410]
[0411]
[0412][0413]
[0414]
[0415][0416]
[0417][0418]
[0419]
[0420]
[0421]
[0422]
[0423]
[0424]
[0425][0426]
本公开还包括一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的式(i-a)、(i-b)、(i-c)、(i-d)、(i-e)、(i-f)或(i-g)的化合物或其药用盐或溶剂合物。
[0427]
定义
[0428]
应当注意，术语“一个”或“一种”对象可以指一个或多个该对象。因此，术语“一个”(或一种)、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”可以在本文中互换使用。
[0429]
除非本文另外具体定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域技术人员分别理解的术语相同的含义。已努力确保所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但在阅读本公开时应考虑到一些实验误差和偏差。
[0430]
在整个说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则“包括”、“包含”、“含有”这些词是在非排他性意义上使用的。应当理解，本文描述的实施方案包括“由
……
组成”和/或“基本上由
……
组成”的实施方案并且是指专门定义的一些方面。
[0431]
如本文所用的术语“约”，当指的是数值时，是指包括从指定量起的变化，在一些实施方案中为
±
50％，在一些实施方案中为
±
20％，在一些实施方案中为
±
10％，在一些实施方案中为
±
5％，在一些实施方案中为
±
1％，在一些实施方案中为
±
0.5％，在一些实施方案中为
±
0.1％，因为此类变化适于执行所公开的方法或采用所公开的组合物。
[0432]
在提供数值范围的情况下并且除非上下文另有明确规定，否则应当理解，还公开了介于该范围的上限和下限之间的每个中间值(以下限单位的十分之一为基准)，以及所述范围内的任何其他所述值或中间值均涵盖在本发明内。这些小范围的上限和下限可独立地包括在该较小范围内，并且也涵盖在本发明之内，以所指定范围内任何明确排除的限值为准。当所述范围包括一个或两个极限时，排除那些所包括的极限中的一个或两个的范围也包括在本发明中。
[0433]
本文根据有机化学的常规显示原理来描绘化学结构：具体地，仅示出碳原子与非氢原子键合；未示出与碳原子键合的氢原子(除非需要指定立体化学)。相应地，当考虑在化
学式中占据特定位置的替代取代基或基团时，应假设存在足够数量的氢原子(如果另外未指定)，从而满足普通化合价。碳的普通化合价为4。
[0434]“偕”(geminal)是指连接至同一原子的两个部分之间的关系。例如，在部分
–
ch
2-cr
xry
–
中，r
x
和ry彼此为偕基团，并且r
x
可称为ry的偕r基团。
[0435]“邻位”是指连接至相邻原子的两个部分之间的关系。例如，在残基
–
chr
x-chry–
中，r
x
和ry是邻位基团，且r
x
可称为ry的邻位r基团。
[0436]
除非另外指明，否则“可选地取代的”是指基团可以是未取代的，或者其可以被一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个或5个)非氢原子或单价基团取代，使得取代基可以彼此相同或不同。在一个实施方案中，可选地取代的基团具有一个取代基。在另一个实施方案中，可选地取代的基团具有两个取代基。在另一个实施方案中，可选地取代的基团具有三个取代基。在另一个实施方案中，可选地取代的基团具有四个取代基。在一些实施方案中，可选地取代的基团具有1至2个、1至3个、1至4个或1至5个取代基。当基团包括本身可以接受多于一个取代基的原子(例如，环碳原子，或末端甲基基团)时，则适用于该基团的“可选地取代的”包括其中一个原子被两个或更多个适用的取代基取代的基团。
[0437]
杂原子是指除碳或氢以外的任何原子。在有机小分子中发现的典型杂原子选自：氮、氧、氟、磷、硫、氯和溴。应当理解，在杂原子被指定为环的可能成员的情况下(或在另一个二价上下文中)，则一价原子诸如卤素在这种情况下被排除。
[0438]
如本文所用，“烷基”是指通过从母体烷烃的一个碳原子上除去一个氢原子而得到的饱和直链(即，无支链)或支链一价烃官能团。作为基团的具有n个碳原子的烷基基团具有式c
nh2n 1
。具有给定碳原子数的烷基基团可以指定如下：c
n-烷基表示任何具有n个碳原子的烷基，或者c
n1
–
n2-烷基表示任何具有n1至n2个碳原子的烷基。因此，c1–
10
是指任何具有一至十个碳原子的烷基。本文感兴趣的特定的烷基基团为具有1至20个碳原子(“c
1-20-烷基”)的基团、具有1至12个碳原子(“c
1-12-烷基”)的基团、具有1至6个碳原子(“c
1-6-烷基”)的基团、具有2至6个碳原子(“c
2-6-烷基”)或具有1至4个碳原子(“c
1-4-烷基”)的基团。烷基基团的示例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基。应当理解，烷基基团可以在其结构中的任何碳原子处键合到另一个基团或部分：因此，例如，本文的定义考虑了丁-1-基(正丁基)和丁-2-基(仲丁基)。
[0439]
烷基氨基是指具有至少一个烷基取代基的氨基基团。二烷基氨基为烷基氨基的特例。
[0440]
如本文所用，“烯基”是指具有至少一个烯属不饱和位点，即，具有至少一个碳-碳双键(由式c＝c表示)情况并具有指定碳原子数的不饱和直链(即，无支链)或支链一价烃官能团。作为基团的具有n个碳原子和单个双键的烯基基团具有式c
nh2n
–1，并且是通过从母体烯烃的一个碳原子上除去一个氢原子而得到的。具有给定碳原子数的烯基基团可以指定如下：c
n-烯基表示任何具有n个碳原子的烯基，或者c
n1
–
n2-烯基表示任何具有n1至n2个碳原子的烯基。因此，c
2-10-烯基是指具有二至十个碳原子的烯基基团。烯基基团可以含有相对于给定的双键呈“顺式”或“反式”构型，或者“e”或“z”构型的组成碳原子。特定的烯基基团为具有2至20个碳原子(“c
2-20-烯基”)、具有2至8个碳原子(“c
2-8-烯基”)、具有2至6个碳原子(“c
2-6-烯基”)或具有2至4个碳原子(“c
2-4-烯基”)的基团。优选的烯基基团具有一个双键。其他烯基基团可以具有两个双键(并且可以称为二烯基)。在具有多于一个双键的烯基基团
中，一对双键可以被一个碳-碳单键分开，在这种情况下，这种排列称为“共轭”，或者它们可以被多于一个碳-碳单键分开。烯基基团的示例包括但不限于诸如乙烯基(ethenyl或vinyl)、丙-1-烯基、丙-2-烯基(或烯丙基)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、其同系物和异构体等的基团。
[0441]
如本文所用，“炔基”是指具有至少一个炔属不饱和位点，即，具有至少一个碳-碳三键(由式c≡c表示)情况并具有指定碳原子数的不饱和直链(即，无支链)或支链一价烃。作为基团的具有n个碳原子和单个三键的炔基基团具有式c
nh2n
–3，并且是通过从母体炔烃的一个碳原子上除去一个氢原子而得到的。具有给定碳原子数的炔基基团可以指定如下：c
n-炔基表示任何具有n个碳原子的炔基，或者c
n1
–
n2-炔基表示任何具有n1至n2个碳原子的炔基。特定的炔基基团为具有2至20个碳原子(“c
2-20-炔基”)、具有2至8个碳原子(“c
2-8-炔基”)、具有2至6个碳原子(“c
2-6-炔基”)、具有2至4个碳原子(“c
2-4-炔基”)的基团。炔基基团的示例包括但不限于诸如乙炔基(ethynyl或acetylenyl)、丙-1-炔基、丙-2-炔基(或炔丙基)、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、其同系物和异构体等的基团。
[0442]
如本文所用，“亚烷基”是指具有指定碳原子数的饱和直链(即，无支链)或支链二价烃基。作为基团的具有n个碳原子的亚烷基基团具有式
–cnh2n
–
。特定的亚烷基基团为具有1至6个碳原子(“c
1-6-亚烷基”)、1至5个碳原子(“c
1-5-亚烷基”)、具有1至4个碳原子(“c
1-4-亚烷基”)或2至3个碳原子(“c
2-3-亚烷基”)的基团。亚烷基的示例包括但不限于亚甲基(-ch
2-)、亚乙基(-ch
2-ch
2-)、亚丙基(-ch
2-ch
2-ch
2-)、亚丁基(-ch
2-ch
2-ch
2-ch
2-)、亚仲丁基(-ch(ch3)-ch
2-ch
2-)等。
[0443]
环状(含环)部分包含在环中键合在一起的原子，并且具有一个或多个除键合到一个或多个环原子的氢原子以外的取代基。环中的每个原子定义了多边形的一个顶点。表示为环基的环状基团是通过从一个环原子上除去一个氢原子而得到的。
[0444]
环状部分可以是碳环或杂环的。环状部分包括单环、稠合环系、螺环系和桥连环系。
[0445]
如果两个环原子在同一个环中彼此键合，则它们在环中彼此相邻。在具有4个或更多个环原子的环中，相邻的原子彼此键合，但不与同一环中的其他原子键合。在三元环中，每个原子必须与环中的原子彼此键合。两个相邻的环原子定义了环的一个“边”。
[0446]
两个或更多个环状部分可以以几种方式中的一种彼此接合以形成包含多于一个环的环系。双环环系为含有两个或更多个接合在一起的环的环系。
[0447]
如果两个环中的两个环原子彼此相邻并且为两个环所共有，则两个环彼此稠合。据说此类环共享一个“边”。
[0448]
螺环环系包含一对共享单个顶点的环。此类系统含有一个环结，在这个环结处两个环共享单个环原子。螺环环系可以含有一个或多个杂原子作为环原子。
[0449]
桥连环系含有至少一对环，其中两个或更多个不相邻的环原子由两个或更多个环共享。所讨论的两个不相邻的环原子称为“桥头”原子，并且这对桥头原子是三个不同环的成员，尽管最简单的此类环系通常称为“桥连双环”。含有桥连双环的碳环基团的示例为降冰片基和金刚烷基。桥连双环环系可以含有一个或多个杂原子作为环原子。
[0450]
链式环系含有两个彼此接合但不共享任何共同环原子的环：一个环为另一个环的取代基，反之亦然。联苯为链式环系的示例。
[0451]
环系可以含有彼此稠合或成链、螺接合或桥连的成对环，或者在三个或更多个环的情况下，以其组合方式接合。
[0452]
如本文所用，“碳环”是指具有指定环形(即，环)碳原子数(即，c
3-10
是指三至十个环形碳原子)的芳族饱和或不饱和环状一价烃基。碳环基团具有单个环(“单环”)或多于一个环(更一般地，“双环”、“三环”或多环)。两个或更多个碳环可以通过稠合、螺环、桥连或链式连接彼此接合，如本文其他地方进一步描述的。
[0453]
本文预期术语碳环涵盖具有一个或多个相邻的环原子对的基团，这些环原子对之间是双键，并且在存在多于一个此类双键的情况下，双键可以或可以不在环内形成共轭体系。因此，碳环可以根据它们是否完全饱和(“环烷基”)、至少部分不饱和(“环烯基”)或完全共轭(“芳族”或“芳基”)来更具体地命名。环烷基基团为完全饱和的基团并且是通过从母体环烷烃的一个碳原子上除去一个氢原子而得到的。特定的环烷基基团为具有3至12个环形碳原子(c
3-12-环烷基)的基团。优选的环烷基为具有3至8个环形碳原子(“c
3-8-环烷基”)或具有3至6个碳原子(“c
3-6-环烷基”)的单环烃。单环环烷基基团具有式c
nh2n-1
。环烷基基团的示例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。环烯基基团在相邻的环碳原子之间具有一个或多个双键。环烯基基团的示例包括1-环己-1-烯基和1-环己-3-烯基。
[0454]
如本文所用，“芳基”是指具有芳族单环(例如，苯基)或彼此稠合的多个芳族环(例如，萘基)的碳环基团。优选地，芳基基团包含6至20个碳原子，更优选6至12个碳原子。特别优选的芳基基团为具有6至14个环形碳原子(“c
6-14-芳基”)的基团。术语芳族在本文中的使用是因为其通常用于有机化学，除了少数理解的例外，这意味着环和环系，其中环形原子向一组离域分子轨道贡献总共(4n 2)个π电子，其中n为非零正整数。
[0455]
典型的芳基基团包括但不限于衍生自包含一个或多个芳族环的稠合环系，或共轭环系的基团，诸如但不限于醋蒽烯、苊烯、醋菲烯、蒽、薁、苯、晕苯、荧蒽、庚芬、并六苯、己芬、不对称引达省、对称引达省、茚、萘(并环己二烯)、并八苯、辛芬、辛搭烯、间二蒽嵌四并苯、并五苯、并环戊二烯、戊芬、苝、非那烯、菲、二萘品苯、七曜烯、芘、皮蒽、玉红省、四亚苯、苯并菲和联三萘。
[0456]
如本文所用，“杂环”或“杂环基”基团是指具有一个或多个环的包含至少一个碳原子和一个或多个杂原子的饱和或不饱和但非芳族的环状基团。通常，此类环具有1至14个环碳原子和1至6个可以彼此相同或不同的环杂原子。此类基团通常是通过从母体杂环的一个环原子上除去一个氢原子而得到的。因此，杂环基基团可以通过环碳原子或环杂原子诸如氮原子键合到支架上的位置。本文预期术语杂环基涵盖在相邻环原子之间具有一个或多个双键的基团，并且在存在多于一个此类双键的情况下，双键不在环内形成共轭体系。
[0457]
特别优选的杂环基基团为：具有1至13个环形碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、氧和硫的环形杂原子的3元至14元环；具有1至11个环形碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、氧和硫的环形杂原子的3元至12元环；具有1至9个环形碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、氧和硫的环形杂原子的3元至10元环；具有1至7个环形碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、氧和硫的环形杂原子的3元至8元环；以及具有1至5个环形碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、氧和硫的环形杂原子的3元至6元环。在一个变体中，杂环基包括具有1至2个、1至3个、1至4个、1至5个或1至6个环形碳原子和1至2个、1至3个或1至4个独立地选自氮、磷、氧和硫的环形杂原子的单环3元、4元、5元、6元或7元环。在另一变体中，杂环基包括具有1至12个环形
氯-3-氟苯基在二卤代芳基的范围内。其中每个氢均被卤素原子替代的烷基基团称为“全卤代烷基”。优选的全卤代烷基基团为三氟甲基(-cf3)。类似地，“全卤代烷氧基”是指这样的烷氧基基团，其中卤素替代了构成烷氧基基团的烷基部分的烃中的每个h。全卤代烷氧基基团的示例为三氟甲氧基(-ocf3)。
[0467]“羰基”是指基团c＝o。
[0468]“硫代羰基”是指基团c＝s。
[0469]“氧代基”是指部分＝o，即双键键合到除氧以外的第二个原子的氧原子。链或环中键合到氧代基部分的碳原子也称为羰基基团。链或环中的硫原子可以接受两个氧代基取代基。
[0470]“前药”是指需要在体内转化(通常是代谢转化)以释放活性药物的药物分子的药理学上无活性的衍生物。
[0471]“前体部分”是指保护基团的一种形式，当其用于掩蔽药物分子内的官能团时将药物转化为前药。通常，前体部分将通过在体内通过酶促或非酶促方式裂解的键连接到药物。理想地，前体部分在从前药裂解时迅速从体内清除。
[0472]“保护基团”是指当连接到分子中的反应基团时，掩蔽、降低或阻止该反应性的一组原子。保护基团的示例可以在green等人，"protective groups in organic chemistry",(wiley，第2版，1991)和harrison等人，"compendium of synthetic organic methods"，第1-8卷(john wiley和sons,1971-1996)中找到。代表性的氨基保护基团包括但不限于甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苄氧基羰基(“cbz”)、叔丁氧基羰基(“boc”)、三甲基甲硅烷基(“tms”)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺酰基(“ses”)、三苯甲基和取代的三苯甲基基团、烯丙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基(“fmoc”)、硝基-藜芦氧基羰基(“nvoc”)等。代表性的羟基保护基团包括但不限于羟基基团被酰化或烷基化的那些基团，诸如苄基和三苯甲基醚以及烷基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚和烯丙基醚。
[0473]
本文所述的式(i-a)、(i-b)、(i-c)、(i-d)、(i-e)、(i-f)和(i-g)(统称为“式(i-a)至(i-g)”)的化合物，或其盐或溶剂合物可以立体异构形式存在(例如，此类化合物含有一个或多个不对称碳原子)。各种立体异构体(诸如纯化的对映体和非对映体)及其混合物或对映体/非对映体富集的混合物包括在本文所公开的主题范围内。
[0474]
还应当理解，式(i-a)至(i-g)的化合物或盐可以以该式中所示以外的互变异构形式存在，这些也包括在本文所公开主题的范围内。
[0475]
本文所公开的主题还包括本文所述的化合物(即，具有本文所示化学式的化合物)的同位素标记的形式，但事实上，一个或多个组成原子被原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数和/或以自然界中通常未发现的丰度的原子所取代。可以以不同于此类同位素的天然分布的水平掺入到本文所述的化合物及其药用盐的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
17
o、
18
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
36
cl、
123
i和
125
i。
[0476]
本文所公开主题还包括式(i-a)至(i-g)的化合物的前药、代谢物和药用盐。式(i-a)至(i-g)的化合物的代谢物包括通过以下方法而产生的化合物：该方法包括将式(i-a)至(i-g)的化合物与哺乳动物接触一段足以产生其代谢产物的时间。
[0477]
在一些实施方案中，本发明化合物的盐为药用盐。“药用盐”是那些保留了游离(非
盐)化合物的至少一些生物活性并可以作为药物或药品施用于受试者的盐。此类盐例如包括：(1)酸加成盐；(2)当酸性质子被金属离子替代时形成的盐；或(3)酸性质子与有机碱配位。药用盐可以在生产过程中原位制备，或通过将纯化的本发明化合物以其游离酸或游离碱的形式分别与合适的有机或无机碱或有机或无机酸单独反应，并在随后的纯化过程中分离出如此形成的盐来制备。
[0478]
如果式(i-a)至(i-g)的化合物为碱，则期望的药用盐可以通过本领域中可获得的任何合适的方法制备为酸加成盐，例如，用无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸和其他类似性质的酸，或用有机酸诸如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、甘醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)(诸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羟基酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳香酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如对甲苯磺酸或乙磺酸)和其他类似性质的酸来处理游离碱。
[0479]
如果式(i-a)至(i-g)的化合物为酸，则存在的一个或多个酸性质子可以被金属离子，例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子替代。然后期望的药用盐可以通过任何合适的方法制备，例如，用无机或有机碱诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等处理游离酸。合适的盐的示例包括但不限于从氨基酸(诸如甘氨酸和精氨酸)、氨和环胺(诸如哌啶、吗啉和哌嗪)、醇胺(诸如乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺)衍生的有机盐，以及从钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂衍生的无机盐。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。
[0480]
本文的化合物也可以以溶剂合物的形式存在，诸如与相应量的溶剂分子以可以是或可以不是化学计量的比率结晶。在优选的实施方案中，溶剂为水，在这种情况下溶剂合物为水合物。在优选的实施方案中，一种或多种溶剂分子以相对于化合物分子的化学计量比存在。
[0481]
式(i-a)至(i-g)的化合物也可以呈“前药”的形式，其包括具有可在体内代谢的部分的化合物。通常，前药在体内通过酯酶或其他机制代谢以在患者体内形成活性药物。前药的示例及其用途在本领域中是公知的(参见，例如，berge等人，(1977)“pharmaceutical salts”,j.pharm.sci.,66:1-19)。前药可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或通过将纯化的化合物以其游离酸形式或羟基与合适的酯化剂单独反应来制备。羟基基团可以通过用羧酸处理转化为酯。前药基团的示例包括被取代的和未被取代的、支链或无支链的低级烷基酯部分(例如，丙酸酯)、低级烯基酯、二-低级烷基-氨基低级烷基酯(例如，二甲氨基乙基酯)、酰基氨基低级烷基酯(例如，乙酰氧基甲基酯)、酰氧基低级烷基酯(例如，新戊酰氧甲基酯)、芳基酯(苯基酯)、芳基低级烷基酯(例如，苄基酯)、被取代的(例如，被甲基、卤代或甲氧基取代基取代)芳基和芳基低级烷基酯、酰胺、低级烷基酰胺、二-低级烷基酰胺以及羟基酰胺。还包括通过其他机制在体内转化为活性形式的前药。在各方面，本发明的化合物为本文任何式的前药。
[0482]
还应当理解，本文所公开主题包括本文所述的特定类别(例如，盐形式、互变异构体、立体异构形式)的组合和子集。
[0483]
术语“治疗(treat/treatment)”是指治疗性处理，其中目的是减缓、减少或减弱不期望的生理变化或病症，诸如关节炎或癌症的发展或扩散。为了本公开的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于可检测或不可检测的一种或多种症状缓解、疾病程度降低、疾
病状态稳定(即不恶化)、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或减轻以及缓解(无论是部分还是全部)。与未接受治疗的患者的预期生存期相比，“治疗”还可能意味着生存期延长。需要治疗的那些人包括患有病状或病症的那些人，并且还包括仅经历病症或疾病的早期阶段的那些人，其中一种或多种典型症状可能尚未显现。
[0484]
短语“治疗有效量”是指足以产生所需治疗效果的本发明化合物或其盐的量。此类量足以(i)治疗特定疾病、病状或病症，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病状或病症的一种或多种症状(诸如生化、组织学和/或行为学)，(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作，或(iv)降低疾病、病状或病症的严重程度或持续时间，稳定其严重程度，或消除其一种或多种症状。治疗用途的有益的或期望的结果包括例如，减少疾病所引起的一种或多种症状，包括其并发症和在疾病发展过程中出现的中间病理表型；提高疾病患者的生活质量；减少治疗疾病所需的其他药物的剂量；增强另一种药物的效果；延迟疾病的进展；和/或延长患者的生存期。在癌症的情况下，药物的治疗有效量可以减少癌细胞数；减小肿瘤大小或检查其生长速率；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地停止)癌细胞浸润周围器官；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解癌症相关的一种或多种症状。在某种程度上，药物可阻止生长和/或杀死既存癌细胞，它可以抑制细胞生长和/或具有细胞毒性。对于癌症治疗，例如，可以通过评估疾病进展时间(ttp)和/或确定缓解率(rr)来衡量疗效。在各种实施方案中，该量足以改善、缓解、减轻和/或延迟癌症症状中的一种或多种。
[0485]
术语“癌症”是指或描述哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长和侵袭性为特征的生理状况，其中癌细胞能够局部浸润和/或转移到非邻接部位。如本文所用，“癌症细胞”、“癌细胞”或“肿瘤细胞”是指以这种不受调节的细胞生长和浸润特性为特征的细胞。“肿瘤”包含多于一个癌细胞。癌症可以进一步分为液体或实体类型。如本文所用，术语“癌症”通常涵盖所有类型的癌症，具体视上下文而定。癌症的示例包括但不限于癌、黑素瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体示例包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“nsclc”))、肺腺癌和肺鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠道癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝癌(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、直肠癌，结直肠癌、食管癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾脏或肾癌(kidney or renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、肛门癌、阴茎癌、尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)、髓母细胞瘤以及头颈癌。
[0486]“化疗剂”是指用于治疗癌症化学化合物或生物制剂。化疗剂可以是免疫治疗剂。如本文所用，“免疫治疗剂”为增强免疫系统以帮助特异性或非特异性地对抗癌症的化合物。免疫疗法包括单克隆抗体和增强免疫系统的非特异性免疫疗法，
[0487]
如本文所用，“联合疗法”是包括两种或更多种不同化合物的同时(simultaneously/contemporaneously)施用的疗法。通常，两种或更多种不同化合物中的每一种具有不同的作用机制。因此，在一个方面，提供了包含本文所详述的化合物和另一种化合物的联合疗法。在一些变体中，联合疗法可选地包括一种或多种药用的载体或赋形剂、非药用活性化合物、和/或惰性物质。联合疗法可以在单个递送载体诸如片剂中包含两种更多种化合物，或者可以在单独的制剂中包含剂量，诸如不同的片剂，或片剂和可注射溶液。
[0488]
如本文所用，术语“有效量”是指本发明的化合物的量结合其功效和毒性参数，应在给定的施用形式中有效。如本技术领域中所理解的，有效量可以呈一种或多种剂量，即，为了达到期望的治疗终点，可能需要单剂量或多剂量。可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他药剂结合可以获得或达到期望的或有益结果，则可以考虑给予有效量的单一药剂。由于化合物的联合作用(例如，加成或协同作用)，可以可选地降低共给化合物中任何化合物的合适剂量。
[0489]“预防有效量”是指当给易患癌症和/或可能发展成疾病或病症的受试者施用化合物或其药用盐时，施用量足以预防或降低疾病或病症的一种或多种未来症状的严重程度的量。对于预防用途，有益的或预期的结果包括诸如消除或降低风险；减轻未来疾病的严重程度；或延迟疾病发作(例如，延迟疾病的生化、组织学和/或行为学症状、其并发症以及在疾病发展过程中出现的中间病理表型)。
[0490]
可以理解的是，可以在辅助环境(adjuvant setting)中给予受试者有效量的如本文公开的化合物或其药用盐，包括预防有效量，辅助环境是指受试者有疾病或病症的病史，并且通常(但不一定)已对疗法有反应的临床环境，该疗法包括但不限于手术(例如手术切除)、放疗和化疗。然而，由于受试者或受试者家族的疾病或病症的病史，这些受试者被认为有发展成该疾病或病症的的风险。“辅助环境”中的治疗或施用是指后续的治疗模式。
[0491]
如本文所用，“单位剂型”是指物理上离散的单位，适合作为单位剂量，每个单位含有经计算以与所需药物载体或赋形剂结合产生所需治疗效果的预定数量的活性成分。单位剂型可包含单一化合物或组合疗法。
[0492]
如本文所用，术语“控释”是指含有活性药物成分的制剂或其级分，其中药物的释放不是立即的。因此，对于“控释”制剂，向受试者施用不会导致药物立即释放到受试者的循环中。该术语包括设计成在较长时间内逐渐释放药物化合物的长效制剂(depot formulation)。控释制剂可包括多种药物递送系统，一般涉及将药物化合物与载体、聚合物或具有期望释放特性(例如，ph依赖性或非ph依赖性溶解度、不同程度的水溶性等)的其他化合物混合，并根据期望的递送途径(例如，包衣胶囊、植入式贮器、含有可生物降解胶囊的可注射溶液等)配制混合物。
[0493]
如本文所用，所谓“药用的”或“药理学上可接受的”是指在生物学上或其他方面没有不良性的材料，例如，该材料可并入到向患者施用的药物组合物中，而不会引起任何显著的不良生物学效应或以有害的方式与组合物中所含的任何其他成分相互作用。药用的载体或赋形剂最好已经满足毒理学和制造测试的要求标准，且/或包括在由美国食品和药物管理局编制和更新的非活性成分指南(inactive ingredient guide)上。
[0494]
如本文所用的术语“赋形剂”是指可用于生产药物或药品的惰性或非活性物质，例如含有本发明化合物作为活性成分的片剂。赋形剂一词可涵盖各种物质，包括但不限于用作粘结剂、崩解剂、包衣、压缩/封装助剂、乳膏或乳液、润滑剂、用于肠胃外施用的溶液、用于咀嚼片的材料、甜味剂或调味剂、悬浮剂/胶凝剂、或湿法制粒剂的任何物质。粘结剂包括例如卡波姆、聚维酮或黄原胶。包衣包括例如醋酸邻苯二甲酸纤维素、乙基纤维素、结冷胶、麦芽糖糊精、肠溶包衣。压缩/封装助剂包括例如碳酸钙、右旋糖、果糖dc(dc是指“可直接压缩”)、蜂蜜dc、乳糖(无水物或一水合物；可选地与阿斯巴甜、纤维素或微晶纤维素组合)、淀粉dc、蔗糖。崩解剂包括例如交联羧甲基纤维素钠、结冷胶、淀粉羟乙酸钠。霜剂或洗剂包括
例如麦芽糖糊精、角叉菜胶。润滑剂包括例如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酰富马酸钠。用于咀嚼片的材料包括例如右旋糖、果糖dc、乳糖(一水合物，可选地与阿斯巴甜或纤维素组合)。悬浮剂/胶凝剂包括例如角叉菜胶、淀粉羟乙酸钠、黄原胶。甜味剂包括例如阿斯巴甜、右旋糖、果糖dc、山梨糖醇、蔗糖dc等；并且湿法制粒剂包括例如碳酸钙、麦芽糖糊精、微晶纤维素等。在一些情况下，术语“赋形剂”和“载体”可以互换使用。
[0495]
术语“受试者”或“患者”是指人类，无论是成人、少年还是婴儿，但也可以涵盖其他高等动物，诸如哺乳动物，在这种情况下，该术语可以包括但不限于灵长类动物、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠。
[0496]
根据式(i-a)至(i-g)的代表性内酰胺(异吲哚啉-1-酮)化合物在表1中示出。实例中提供了属于式i-a至i-g的其他化合物。应当理解，在适用的情况下，各种对映体和非对映体包括在下表中。还应当理解，包含特定分子的单个特定对映体或非对映体并不排除其配对对映体或其另一种立体异构体包含在本公开内容中。本文化合物的编号(诸如在表1的第一列中)，包括特定数字或数字序列的使用或省略，是任意的。
[0497]
表1包含异吲哚啉-1-酮和其他支架的内酰胺
[0498]
[0499]
[0500]
[0501]
[0502]
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[0552]
[0553]
[0554]
[0555]
[0556]
[0557]
pharmaceutical sciences(1980)第16版，osol,a.编辑)以冻干制剂、研磨粉末或水溶液的形式进行混合。可通过在环境温度下以适当的ph值和期望的纯度与生理上可接受的赋形剂或载体(即，在所采用的剂量和浓度下对受体无毒的赋形剂或载体)混合以进行配制。制剂的ph主要取决于化合物的具体用途和浓度，但是可在约3至约8的范围内。在ph 5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施方案。
[0566]
式(i-a)至(i-g)的化合物可以是无菌的。特别地，待用于体内施用的制剂通常是无菌的。此类灭菌通过无菌过滤膜过滤很容易实现。
[0567]
式(i-a)至(i-g)的化合物通常可以作为固体组合物、冻干制剂或作为水溶液储存。
[0568]
包含式(i-a)至(i-g)的化合物的药物组合物可按符合良好医疗实践的方式，即用量、浓度、时间表、疗程、媒介物和施用途径来配制、给药和施用。在这种情况下需要考虑的因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病状、病症的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。待施用的化合物的“治疗有效量”将受此类考虑因素的约束，并且是预防、改善或治疗凝血因子介导的病症所需的最小量。在一些实施方案中，该量低于对宿主有毒性或使宿主更易出血的量。
[0569]
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在使用的剂量和浓度下对受体无毒，并且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如edta；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如tweentm、pluronicstm或聚乙二醇(peg)。活性药物成分可以包裹于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如，分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中，被包裹于胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米粒子和纳米胶囊)中或粗滴乳液中。此类技术公开于remington's pharmaceutical sciences第16版，osol,a.编辑(1980)。
[0570]
可以制备式(i-a)至(i-g)化合物的缓释制备物。缓释制备物的合适示例包括含有式(i-a)至(i-g)的化合物的固态疏水聚合物的半透性基质，这些基质是例如膜或微胶囊等成型制品的形式。缓释基质的示例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸、l-谷氨酸和γ-乙基-l-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，诸如lupron depot
tm
(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)以及聚-d-(-)-3-羟基丁酸。
[0571]
适合口服施用的式(i-a)至(i-g)的化合物的制剂可制成离散的单位，诸如丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂，每个单位均包含预定量的式(i-a)至(i-g)的化合物。
[0572]
可通过在合适的机器中压缩以自由流动形式(诸如粉末或颗粒)可选地与粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合的活性成分而制备压缩片剂。模制片剂可通过在合适的机器中塑模用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物而制
成。所述片剂可以可选地被包衣或刻痕，并可选地经配制使得可从中缓释或控释活性成分。
[0573]
可制备供口服使用的片剂、含片、含水或含油悬浮剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊或软胶囊例如明胶胶囊、糖浆或酏剂。用于口服使用的式(i-a)至(i-g)的化合物的制剂可以根据本领域已知的任何用于制造药物组合物的方法制备，并且此类组合物可以含有一种或多种剂，包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以提供适口的制剂。包含与适合于制备片剂的无毒药用赋形剂混合的活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，诸如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，诸如淀粉、明胶或阿拉伯树胶；以及润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可以是未包衣的，或者可以通过包括微胶囊化在内的已知技术包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸附，从而在较长时段内提供持续作用。例如，可采用延时材料，诸如单硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯单独使用或与蜡一起使用。
[0574]
为了治疗眼睛或其他外部组织(例如口腔和皮肤)，该制剂优选以局部软膏或霜剂的形式施用，其含有例如0.075％w/w至20％w/w含量的活性成分。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水溶性软膏基质一起使用。另选地，活性成分可以用水包油乳膏基质配制成乳膏。
[0575]
如果需要，乳膏基质的水相可包括多元醇，即，具有两个或更多个羟基的醇，诸如丙二醇、丁烷1,3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括peg 400)、及其混合物。外用制剂可理想地包括增强活性成分通过皮肤或其他受影响区域的吸收或渗透的化合物。此类皮肤渗透促进剂的示例包括二甲基亚砜和相关类似物。
[0576]
乳剂的油性相可由已知成分以已知方式构成。虽然该相可以仅包含乳化剂，但也可以包含至少一种乳化剂及脂肪或油或者脂肪和油两者的混合物。与亲脂性乳化剂一起包含的亲水性乳化剂可作为稳定剂。具有或不具有稳定剂的乳化剂一起构成所谓的乳化蜡，并且蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，形成霜剂制剂的油性分散相。适合在配方中使用的乳化剂和乳剂稳定剂包括60、80、鲸蜡硬脂醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
[0577]
式(i-a)至(i-g)化合物的水性悬浮液含有与适于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性材料。这样的赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯胶，以及分散剂或湿润剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如，十七烷乙烯氧基鲸醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪的偏酯和己糖醇酐的缩合产物(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水悬浮液还可含有一种或多种防腐剂，诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，诸如蔗糖或糖精。
[0578]
式(i-a)至(i-g)的化合物的药物组合物可为无菌注射制剂的形式，诸如无菌注射水性或油质悬浮液。该悬浮液可根据已知技术使用上面已经提到的那些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可以是无菌注射液或悬浮液，其处于非毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(诸如1,3-丁二醇)中。无菌可注射制剂还可制备为冻干粉末。可采用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油传统上可用作溶剂或悬浮介质。对于这一目的，可采用任何温和的固定油，包括合成的单甘油
酯或二甘油酯。此外，脂肪酸诸如油酸可同样用于制备可注射物。
[0579]
可与赋形剂或载体材料结合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所处理的宿主和特定的施用方式而变化。例如，旨在用于口服施用于人类的缓释制剂可含有大约1mg至1000mg与适当且实用的量的赋形剂或载体材料复配的活性材料，该量可占总组合物(重量:重量)的约5％至约95％不等。可以制备药物组合物以提供易于测量的施用量。例如，用于静脉内输注的水溶液可以每毫升溶液包含约3μg至500μg的活性成分，以便可以约30ml/hr的速率输注合适的体积。
[0580]
适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，从而使制剂与预期接受者的血液等渗，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。
[0581]
适于局部施用于眼睛的制剂还包括滴眼液，其中活性成分溶解或悬浮在合适的赋形剂或载体中，特别是在用于活性成分的水性溶剂中。活性成分优选以约0.5％w/w至20％w/w，例如约0.5％w/w至10％w/w，例如约1.5％w/w的浓度存在于此类制剂中。
[0582]
适于在口腔内局部施用的制剂包括在调味基料(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)中包含活性成分的锭剂；在惰性基料(例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的含片；以及在合适的液体载体中包含活性成分的漱口水。
[0583]
用于直肠施用的制剂可以以含有例如可可脂或水杨酸盐的合适基质的栓剂形式呈现。
[0584]
适于肺内或鼻腔施用的制剂具有例如在0.1微米至500微米的范围内的粒径(包括以0.5微米、1微米、30微米、35微米等增量在0.1微米至500微米的范围内的粒径)，可通过鼻腔快速吸入或通过嘴部吸入达到肺泡囊。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适于气雾剂或干粉剂施用的制剂可按常规方法制备，并可与其他治疗剂，诸如用于治疗或预防下述病症的前述化合物一起递送。
[0585]
适于阴道施用的制剂可以呈现为阴道栓、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂，除活性成分外还含有本技术领域中已知的适当的赋形剂或载体。
[0586]
所述制剂可包装在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿瓶和小瓶，并且可在冷冻干燥(冻干)状态下储存，只需在即将使用前加入无菌液体赋形剂或载体，例如水，以用于注射。临时注射溶液和悬浮液由前述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有如本文上文所述的每日剂量或单位每日亚剂量的，或其适当分数的活性成分的那些。
[0587]
本主题进一步提供了兽用组合物，其包含至少一种如上定义的活性成分以及兽用赋形剂或载体。兽用赋形剂或载体为可用于施用组合物的材料，并且可以是固体、液体或气体材料，其在兽医领域是惰性的或可接受的且与所述活性成分相容。这些兽用组合物可以肠胃外地、口服地或通过任何其他预期途径施用。
[0588]
在特定实施方案中，包含当前公开的化合物的药物组合物还包含化疗剂。在其中一些实施方案中，化疗剂为免疫治疗剂。
[0589]
试剂盒
[0590]
进一步提供用于实施本文详述的方法的试剂盒，该试剂盒包含一种或多种本文所述的化合物或包含本文所述的化合物的药物组合物。试剂盒可以采用本文所公开的任何化
合物。在一个变体中，试剂盒采用本文所述的化合物或其药用盐。试剂盒可用于本文所述用途中的任何一种或多种用途，并且相应地，可包含用于治疗诸如癌症的病症的使用说明书。在一些实施方案中，试剂盒包含用于治疗癌症的使用说明书。
[0591]
试剂盒一般包括合适的包装。该试剂盒可包括一个或多个包含本文所述任何化合物的容器。每种组分(如果有一个以上的组分)可以包装在单独的容器中，或者在交叉反应性和保质期允许的情况下，一些组分可以组合在一个容器中。试剂盒的一种或多种组分可以是无菌的且/或可以装在无菌容器内。
[0592]
试剂盒可以是单位剂型、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。例如，可以提供包含足够剂量(例如，治疗有效量)的本文所公开的化合物和/或对病症(例如，癌症)有用的第二药学活性化合物的试剂盒，以在长时间段诸如1周、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间中的任何时间段内，对个体进行有效治疗。试剂盒还可包括多个单位剂量的化合物和使用说明书，并可以以足以在药房(例如医院药房和配制药房(compounding pharmacy))中储存和使用的数量进行包装。
[0593]
试剂盒可以可选地包括一套说明书，一般为书面说明书，尽管含有说明书的电子存储介质(例如磁盘或光盘)也是可以接受的，其中涉及本发明方法的组分的使用。试剂盒附附的说明书一般包括关于组分及将其施用于受试者的信息。
[0594]
使用方法
[0595]
当前公开的化合物可用于抑制cbl-b的活性。另外，许多化合物具有比c-cbl更大的抑制作用。
[0596]
在一个实施方案中，本文公开的主题涉及抑制cbl-b的方法，该方法包括使含有活性cbl-b蛋白的一个或多个细胞与有效量的式(i-a)至(i-g)的化合物或本文所述的药物组合物接触。所谓“接触”是指使化合物足够接近分离的cbl-b酶或表达cbl-b的细胞(例如，t细胞、b细胞、树突状细胞)，使得该化合物能够结合cbl-b并抑制其活性。通过向受试者施用该化合物，该化合物可以在体外或体内与cbl-b接触。
[0597]
在一实施方案中，本文所公开的主题涉及一种用于增强有需要的受试者体内的免疫应答的方法，其中该方法包括向所述受试者施用有效量的式(i-a)至(i-g))的化合物、或本文所述的药物组合物。在本实施方案的某些方面，受试者中的t细胞相对于施用该化合物或药物组合物之前具有增强的引发、增强的活化、增强的迁移、增强的增殖、提高的存活率和增强的细胞溶解活性中的至少一种。在本实施方案的某些方面，t细胞活化的特征在于相对于施用该化合物或药物组合物之前，y-ifn cds t细胞的频率升高、y-ifn cd4 t细胞的频率升高或t细胞产生il-2或颗粒酶b的水平提高。在本实施方案的某些方面，t细胞的数量相对于施用该化合物或药物组合物之前有所升高。在本实施方案的某些方面，t细胞为抗原特异性cds t细胞。在本实施方案的某些方面，t细胞为抗原特异性cd4 t细胞。在本实施方案的某些方面，受试者中的抗原呈递细胞相对于施用该化合物或药物组合物之前具有增强的成熟和活化作用。在本实施方案的某些方面，抗原呈递细胞为树突状细胞。在本实施方案的某些方面，抗原呈递细胞的成熟特征在于cd83 树突状细胞的频率增加。在本实施方案的某些方面，抗原呈递细胞的活化特征在于树突状细胞上cd80和cd86的表达升高。在一些方面，式(i-a)至(i-g)的化合物、或其变体、或其药物组合物提供对肿瘤或病毒的免疫应答(即疫苗)的常规引发，以提高/产生抗病毒/肿瘤免疫力。
[0598]
在另一个实施方案中，本文所公开的主题涉及一种用于治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的式(i-a)至(i-g)的化合物、或如本文进一步描述的其药物组合物。应当理解，该化合物通过抑制cbl-b起作用，其方式导致活化的t细胞能够杀死癌细胞，而不管它们在体内的来源。在本实施方案的某些方面，所述癌症包括选自由以下项组成的组的至少一种癌症：结直肠癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤和肾细胞癌。在本实施方案的某些方面，所述癌症具有升高的t细胞浸润水平。在本实施方案的某些方面，受试者的癌症细胞相对于施用该化合物或组合物之前，选择性地具有升高的mhc i类抗原表达。
[0599]
在本文所述的方法中，该方法还可包括向所述受试者施用治疗剂或化疗剂。例如，此类药剂可以是pd-l1/pd-1的抑制剂。在本实施方案的某些方面，将治疗剂或化疗剂与该化合物或组合物同时施用于受试者。在本实施方案的某些方面，在施用该化合物或组合物之前向受试者施用治疗剂或化疗剂。在本实施方案的某些方面，在施用该化合物或组合物之后向受试者施用治疗剂或化疗剂。
[0600]
如本文所用，“增强免疫应答”是指对抗原的任何免疫原性应答的改善。对抗原的免疫原性应答的改善的非限制性示例包括树突状细胞的成熟或迁移增强、t细胞(例如，cd4 t细胞、cds t细胞)的活化增强、t细胞(例如，cd4t细胞、cds t细胞)增殖增强、b细胞增殖增强、t细胞和/或b细胞的存活率提高、抗原呈递细胞(例如，树突状细胞)的抗原呈递改善、抗原清除改善、增加t细胞产生的细胞因子(例如，白细胞介素-2)、增加对前列腺素e2诱导的免疫抑制的抵抗力以及增强cds t细胞的引发和/或细胞溶解活性。
[0601]
在一些实施方案中，受试者的cds t细胞相对于施用式(i-a)至(i-g)的化合物、或其药用盐、前药、代谢物或衍生物之前具有增强的引发、活化、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施方案中，cds t细胞引发特征在于cds t细胞中的cd44表达升高和/或细胞溶解活性增强。在一些实施方案中，cds t细胞活化特征在于y-ifn cds t细胞的频率升高。在一些实施方案中，cds t细胞为抗原特异性t细胞。
[0602]
在一些实施方案中，受试者的cd4 t细胞相对于施用式(i-a)至(i-g)的化合物、或其药用盐、前药、代谢物或衍生物之前具有增强的引发、活化、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施方案中，cd4 t细胞引发特征在于cd4 t细胞中的cd44表达升高和/或细胞溶解活性增强。在一些实施方案中，cd4 t细胞活化特征在于y-ifn cd4 t细胞的频率升高。在一些实施方案中，cd4 t细胞为抗原特异性t细胞。
[0603]
因此，当前公开的式(i-a)至(i-g)的化合物、或其药用盐、前药、代谢物或衍生物在治疗t细胞功能障碍性病症中是有用的。“t细胞功能障碍性病症”是指以对抗原刺激的应答性降低为特征的t细胞相关的病症或病状。
[0604]
因此，当前公开的化合物可用于治疗期望增强免疫原性的病状，例如增加用于治疗癌症的肿瘤免疫原性。
[0605]“免疫原性”是指特定物质引发免疫应答的能力。肿瘤是免疫原性的，并且提高肿瘤免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。病毒也可以是免疫原性的，并且增强/活化免疫原性可有助于通过免疫应答清除病毒颗粒。
[0606]“肿瘤免疫”是指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。因此，作为治疗概念，当此类逃避行为减弱时，肿瘤免疫得到“治疗”，并且肿瘤被免疫系统识别并且攻击。肿瘤识别的示例
包括肿瘤结合(tumor binding)、肿瘤收缩和肿瘤清除。
[0607]
在治疗患者的过程中，本文的化合物可以与一种或多种化疗剂联合使用。“化疗剂”是用于治疗癌症的化学化合物或生物制剂。化疗剂的示例包括烷基化剂，诸如噻替派和环磷酰胺烷基磺酸酯类，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，诸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺类，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；多聚乙酰(acetogenins)(特别是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)，)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙素；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康cpt-11(伊立替康(irinotecan)，)、乙酰基喜树碱、东莨菪内酯和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；培美曲塞；卡利司他丁(callystatin)；cc-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻素(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；尾海兔素(dolastatin)；倍癌霉素(包括合成类似物，kw-2189和cbl-tml)；五加素(eleutherobin)；水鬼蕉碱；tlk-286；cdp323，口服α4整联蛋白抑制剂；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素(spongistatin)；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、氮芥氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲洛磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔类抗生素(例如，卡奇霉素(calicheamicin)，特别是卡奇霉素γll和卡奇霉素ωll(参见，例如，nicolaou等人，angew.chem intl.ed.engl.,33:183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素a(dynemicin a)；埃斯佩拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、链黑菌素、链脲菌素、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，诸如甲氨蝶呤、吉西他滨替加氟卡培他滨埃博霉素和5-氟尿嘧啶(5-fu)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖孢苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨和氟尿苷；抗肾上腺素类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群；依达曲沙；地佛法明(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elfornithine)；醋酸羟吡咔唑(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素类化合物，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitraceine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼；甲苄肼(procarbazine)；多糖络合物(jhs natural products,eugene,or)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢
菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2
”‑
三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(trichothecene)(特别是t-2毒素、疣孢菌素a(verracurin a)、杆孢菌素a(roridin a)和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(长春地辛()；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；格塞图辛(gacytosine)；阿糖胞苷(arabinoside)(“ara-c”)；三胺硫磷；紫杉烷类，例如紫杉醇紫杉醇的白蛋白工程纳米颗粒制剂和(abraxane
tm
)和多西他赛苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物,诸如顺铂和卡铂；长春花碱铂；依托泊苷(vp-16)；异磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱奥沙利铂(oxaliplatin)；亚叶酸(leucovovin)；长春瑞滨诺消灵(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素；氨蝶呤；伊班膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；类视色素(retinoids)，例如视黄酸；上述任何化疗剂的药用盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种化疗剂的组合，诸如chop(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和folfox(奥沙利铂(eloxatin
tm
)联合5-fu和亚叶酸的治疗方案的缩写)。
[0608]
可以在涉及本文的cbl-b抑制剂化合物的治疗方案中部署的化疗剂的其他示例包括抗激素剂，其用来调节、减少、阻断或抑制可促进癌症的生长激素的作用，并且通常采用系统性或全身治疗的形式。它们可能是激素本身。示例包括：抗雌激素药和选择性雌激素受体调节剂(serm)，包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬(keoxifene)、lyll 7018、奥那司酮和托瑞米芬抗孕酮药物；雌激素受体下调剂(erd)；雌激素受体拮抗剂，诸如氟维司群对于卵巢抑制或关闭有作用的药物，例如促黄体素释放激素(lhrh)拮抗剂，诸如醋酸亮丙瑞林(和)、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和曲普瑞林(tripterelin)；抗雄激素药，诸如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；以及可抑制芳香酶进而调节肾上腺中雌激素产生的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑类、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮依西美坦福美司坦(formestanie)、法曲唑(fadrozole)、伏氯唑来曲唑和阿那曲唑此外，化疗剂的此类定义还包括二磷盐酸类，诸如氯膦酸盐(例如，或)、依替膦酸盐ne-58095、唑来磷酸/唑来膦酸盐阿仑膦酸盐帕米膦酸盐替鲁膦酸盐或利塞膦酸盐以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸类，特别是那些抑制牵涉到异常细胞增殖的信号通路中的基因表达的反义寡核苷酸，例如，pkc-α、raf、h-ras和表皮生长因子受体(egf-r)；疫苗，诸如疫苗和基因治疗疫苗，例如疫苗、疫
苗和疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如，)；抗雌激素，例如氟维司群；egfr抑制剂，诸如厄洛替尼或西妥昔单抗(cetuximab)；抗vegf抑制剂，诸如贝伐单抗(bevacizumab)；伊立替康(arinotecan)；rmrh(例如，)；17aag(热休克蛋白(hsp)90毒素的格尔德霉素衍生物)，以及上述任何一者的药用盐、酸或衍生物。
[0609]“化疗剂”的定义中还包括：调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素药和选择性雌激素受体调节剂(serm)，包括例如他莫昔芬(包括nol v枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬、lyll 7018、奥那司酮和(枸橼酸托瑞米芬(toremifine citrate))；抑制芳香酶进而调节肾上腺中雌激素产生的芳香酶抑制剂，诸如，例如4(5)-咪唑类、氨鲁米特、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦；pfizer)、福美司坦(formestanie)、法曲唑(fadrozole)、(伏氯唑)、(来曲唑，novartis)和(阿那曲唑；astrazeneca)；抗雄激素药，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环胞嘧啶核苷类似物)；蛋白激酶抑制剂；脂质激酶抑制剂；反义寡核苷酸，特别是抑制细胞异常增殖中牵涉的信号传导通路中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如，例如pkc-α、ralf和h-ras；核酶，诸如vegf表达抑制剂(例如)和her2表达抑制剂；疫苗诸如基因治疗疫苗，例如例如和和ril-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如rmrh；抗血管生成剂，诸如贝伐单抗(avgenentech)；以及上述任何化疗剂的药用盐、酸和衍生物。
[0610]
在一些实施方案中，化疗剂为免疫治疗剂。如本文所用，“免疫治疗剂”为增强免疫系统以帮助特异性或非特异性地对抗癌症的化合物。免疫治疗剂包括单克隆抗体和增强免疫系统的非特异性免疫疗法，诸如细胞因子、白细胞介素(例如，il-2、il-7、il-12、il-15、il-21)、干扰素(例如，ifn-a、ifn-～、ifn-y)、gmcsf、沙利度胺(thalidomide)(celgene)、来那度胺(celgene)、泊马度胺(pomalidomide)(celgene)、咪喹莫特(valeant)。可用作化疗剂的单克隆抗体的非限制性示例包括曲妥单抗(trastuzumab)(genentech)、贝伐单抗(avgenentech)、西妥昔单抗(bristol-myers squibb)、帕尼单抗(panitumumab)(amgen)、伊匹单抗(ipilimumab)(bristol-myers squibb)、利妥昔单抗(rituximab)(genentech)、阿仑单抗(alemtuzumab)(genzyme)、奥法妥木单抗(ofatumumab)(genmab)、吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)(wyeth)、维布妥昔单抗(brentuximab vedotin)(seattle genetics)、90y-标记的替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(biogen idec)、131i-标记的托西莫单抗(tositumomab)(glaxosmithkline)、恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine)(
genentech)、贝林妥欧单抗(blinatumomab)(amgen)、帕妥珠单抗(pertuzumab)(genentech)、奥妥珠单抗(obinutuzumab)(genentech)、纳武利尤单抗(nivolumab)(bristol-myers squibb)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)(merck)、匹地利珠单抗(pidilizumab)(curetech)、替瑞利尤单抗(tiragolumab)(roche/genentech，在who药物信息(药用物质国际非专有名称)，拟议inn:列表117，第31卷，第2号，2017年6月9日(第343页)中描述)、mpdl3280a(阿替利珠单抗(atezolizumab)，roche/genentech)、mdx-1105(在wo2007/005874中描述)和medi4736(度伐利尤单抗(durvalumab)，medarex)。另一种有用的免疫治疗剂为amp-224(在wo2010/027827和wo2011/066342中描述)。
[0611]
在一些实施方案中，化合物以介于约0.001μg/kg至约1,000mg/kg之间，包括但不限于约0.001μg/kg、约0.01μg/kg、约0.05μg/kg、约0.1μg/kg、约0.5μg/kg、约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg、约100μg/kg、约250μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约25mg/kg、约50mg/kg、约100mg/kg和约200mg/kg的剂量施用于受试者。
[0612]
示例性合成方法
[0613]
式(i-a)至(i-g)的化合物可以通过一个或多个通用合成方案a至e单独合成。熟练的有机化学家应当理解，也可以设计其他合成途径并且本文所述的合成方法既不是排他性的也不是限制性的。在实例中可以找到将方案a至e中的一种或多种应用于本文特定化合物的例子。
[0614]
方案a(图1)示出了合成式i-a、i-b、i-c的化合物的第一种方法。在方案a中，y1和y2如本文其他地方所述；x和z如本文其他地方所述；r1、r2和r5如本文其他地方所述。r'为h或甲基，并且y3为n或ch。
[0615]
醛a1与芳基锂的反应，当a2用nbuli处理时产生，得到中间体a3。随后，a3转化成苯胺a4。随后进行a4的氟化反应，产生中间体a5。a5与苄基溴a6的反应产生化合物a7。
[0616]
方案b，图2示出了合成属于式i-a、i-b、i-c的化合物的第二种方法。在方案b中，y1和y2如本文其他地方所述；x和z如本文其他地方所述；r1、r2和r5如本文其他地方所述。r'为h或甲基，并且y3为n或ch。
[0617]
在方案b中，可以使中间体a3氧化，得到酮b1。用氟化试剂处理b1得到二氟中间体b2，随后将其转化为苯胺b3。b3与苄基溴的反应产生b4。
[0618]
方案c，图3示出了合成式i-a、i-b、i-c的化合物的第三种方法。在方案c中，y1和y2如本文其他地方所述；x、z如本文其他地方所述；r1、r2和r5如本文其他地方所述。r'为h或甲基，并且y3为n或ch。
[0619]
在方案c中，也可以将中间体a3脱氧，得到中间体c1，其可以转化为苯胺c2。中间体c2与苄基溴a6的反应产生化合物c3。
[0620]
方案d，图4示出了合成式i-a、i-b、i-c、i-d和i-e的化合物的第四种方法。在方案d中，y1和y2如本文其他地方所述；x、x1、z、z1和z2如本文其他地方所述；r1、r2和r5如本文其他地方所述。r
′
为h或甲基，并且y3为n或ch。
[0621]
在方案d中，中间体d1可以与苄基溴d2反应，得到中间体d3。br中间体d3随后可以通过过渡金属催化的偶联反应或光氧化还原反应转化成化合物d5。
[0622]
以下实例仅以说明而非限制的方式提供。
[0623]
实例
[0624]
本发明的各种化合物的合成可以通过利用一种或多种中间体来完成，如实例1至15中所公开的。此类中间体与方案a至d中的一种或多种结合使用的方式对于寻求合成本文公开的化合物或式(i-a)至(i-g)所涵盖的化合物的本领域技术人员来说是明显的，即使在本文列举的实例之一中没有明确使用。
[0625]
实例1：中间体a(5-溴-2-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯)
[0626]
中间体a可以根据图6a的方案1来合成。
[0627][0628]
步骤a-1涉及2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的合成。向2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸(10.0g，49.0mmol)在甲醇(196ml)的溶液中添加硫酸(5.0ml，93.1mmol)并且将所得混合物加热至65℃持续23h。将反应物冷却至室温，浓缩，用水(250ml)/饱和碳酸氢钠水溶液(250ml)稀释并用etoac(3x200ml)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(10.3g，97％收率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.91(d，j＝7.8hz，1h)，7.76(d，j＝7.8hz，1h)，7.33(t，j＝7.9hz，1h)，3.92(s，3h)，2.64(q，j＝1.4hz，3h)。
[0629]
步骤a-2涉及5-溴-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的合成。向2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(10.3g，47.3mmol)在乙酸(65ml)的溶液中添加70％hno3水溶液(21.1ml，473mmol)和溴(2.67ml，52.0mmol)，随后使用加料漏斗滴加2,5m硝酸银水溶液(24.6ml，61.5mmol)。然后将混合物在室温下搅拌17h。然后将反应混合物倒在冰上，用1n naoh(200ml)稀释并用etoac(3x100ml)萃取。将有机物合并，用水(3x100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗混合物用etoac(200ml)稀释，并用饱和nahco3(5x100ml)和饱和na2co3(2x100ml)洗涤以除去acoh。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到5-溴-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(14.4g，100％收率)。该产物无需进一步纯化即可用于下一步。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.06(d，j＝2.0hz，1h)，7.88(d，j＝1.9hz，1h)，3.93(s，3h)，2.58(q，j＝1.5hz，3h)。
[0630]
步骤a-3涉及制备5-溴-2-(溴甲基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯。将5-溴-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(9.87g，33.2mmol)、n-溴代琥珀酰亚胺(17.7g，99.7mmol)和过氧化苯甲酰(3.22g，13.3mmol)在四氯化碳(111ml)中的混合物加热至75℃并搅拌20h。将混合物冷却至室温，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(100％庚烷)纯化，得到5-溴-2-(溴甲基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯(11.29g，90％收率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.18(d，j＝2.1hz，1h)，7.94(d，j＝2.1hz，1h)，3.99(s，3h)。
[0631]
实例2：中间体b(6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-环丙基嘧啶-4-甲酸)
[0632]
中间体b可以根据图5b的方案2来合成。
[0633][0634]
在步骤b-1中，如下制备6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-环丙基嘧啶-4-甲酸乙酯。向2-环丙基-6-甲酰基嘧啶-4-甲酸乙酯(300mg，1.36mmol)的甲醇(6.8ml)溶液中添加5-氮杂螺[2.4]庚烷盐酸盐(310mg，2.32mmol)和乙酸钠(340mg，4.09mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(858mg，4.09mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。将反应物用饱和碳酸氢钠水溶液(25ml)稀释并用dcm(3x25ml)萃取。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到无需进一步纯化即可使用的6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-环丙基嘧啶-4-甲酸乙酯。
[0635]
在步骤b-2中，如下制备6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-环丙基嘧啶-4-甲酸。向先前在甲醇(10ml)中获得的6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-环丙基嘧啶-4-甲酸乙酯中添加1m氢氧化锂(10ml，10.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌50min。将反应物用1m hcl稀释直至达到ph 7，并且将混合物浓缩至约2ml总体积。将残余物通过c18硅胶色谱法(0-60％乙腈/碳酸氢铵，ph＝10)纯化，得到6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-环丙基嘧啶-4-甲酸(246mg，66％)，为白色固体。lcms(esi)m/z：274.2[m h] 。1h nmr(400mhz，cd3od)7.66(s，1h)，3.75(s，2h)，2.85(t，j＝6.9hz，2h)，2.61(s，2h)，2.37-2.18(m，1h)，1.85(t，j＝6.9hz，2h)，1.27-1.13(m，2h)，1.12-0.96(m，2h)，0.65-0.45(m，4h)。
[0636]
实例3：中间体c(2-环丙基-6-((3-氟-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)嘧啶-4-甲酸)
[0637]
中间体c可以根据图5c的方案3来合成。
[0638][0639]
在步骤c-1中，如下制备2-环丙基-6-((3-氟-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)嘧啶-4-甲酸乙酯。向2-环丙基-6-甲酰基嘧啶-4-甲酸乙酯(300mg，1.36mmol)的甲醇(6.8ml)溶液中添加3-氟-3-甲基氮杂环丁烷盐酸盐(288mg，2.32mmol)和三乙胺(0.32ml，2.32mmol)。将反应混合物在微波中在100℃下搅拌1min并冷却至室温。添加氰基硼氢化钠(171mg，2.72mmol)并且将反应物在微波中在100℃下搅拌2h。将反应混合物直接用于下一步。
[0640]
在步骤c-2中，如下制备2-环丙基-6-((3-氟-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)嘧啶-4-甲酸。将含有先前获得的2-环丙基-6-((3-氟-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)嘧啶-4-甲酸乙酯的混合物用甲醇(4ml)稀释，并且添加1m氢氧化锂(12ml，12.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌50min。将反应物用1m hcl稀释直至ph 7，浓缩至约为2ml总体积。将残余物通过c18硅胶色谱法(0-70％乙腈/碳酸氢铵溶液，ph＝10)纯化，得到2-环丙基-6-((3-氟-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)嘧啶-4-甲酸(90mg，25％)，为黄色固体。lcms(esi)m/z：266.1[m h] 。1h nmr(400mhz，cd3od)7.57(s，1h)，3.79(s，2h)，3.59-3.37(m，4h)，2.33-2.17(m，1h)，1.62(t，j＝26.3hz，3h)，1.23-1.13(m，2h)，1.08-1.00(m，2h)。
[0641]
实例4：中间体d(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯胺)
[0642]
中间体d可以根据图5d的方案4来合成。
[0643][0644]
在步骤d-1中，如下制备1-(3-溴苯基)环丙烷甲腈。将2-(3-溴苯基)乙腈(6.00g，30.6mmol)、1-溴-2-氯乙烷(3.82ml，45.9mmol)和苄基三乙基氯化铵(139mg，0.61mmol)在6n氢氧化钠水溶液(38.3ml，223mmol)中的混合物在50℃下搅拌18h。将反应混合物用etoac(200ml)和水(200ml)稀释。分离各层，将水相用etoac(200ml)萃取，将合并的有机相用1n hcl(100ml)洗涤，用1n碳酸钾水溶液(100ml)洗涤，用盐水(100ml)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到1-(3-溴苯基)环丙烷甲腈(6.57g，97％收率)，为暗褐色固体。1h nmr(400mhz,cdcl3)7.44-7.40(m,2h),7.27-7.20(m,2h),1.77-1.73(m,2h),1.43-1.39(m,2h)。
[0645]
在步骤d-2中，如下制备1-(3-溴苯基)环丙烷甲醛。在-78℃下，将1.0m dibal-h的己烷溶液(51.6ml,51.6mmol)缓慢添加到1-(3-溴苯基)环丙烷甲腈(7.64g,34.4mmol)在乙醚(115ml)的溶液中。将所得混合物在相同温度下搅拌2h。将反应物用50ml的10％hcl水溶液小心地淬灭，并使其升温至室温。将反应混合物用etoac(200ml)和水(200ml)稀释。分离各层，将水相用etoac(200ml)萃取，将合并的有机相用饱和碳酸氢钠(100ml)洗涤，用水(100ml)洗涤，用盐水(100ml)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到1-(3-溴苯基)环丙烷甲醛(7.62g,98％收率)，为橙色油状物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)13.48(s,1h),9.91(s,1h),8.77
–
8.75(m,1h),8.09
–
8.05(m,2h),7.63(t,j＝8.0hz,1h),6.54(s,1h)。
[0646]
在步骤d-3中，如下制备(1-(3-溴苯基)环丙基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇。在-50℃下，将2.64m正丁基锂的己烷溶液(12.7ml,33.6mmol)滴加到4-甲基-1,2,4-三唑(2.79g,33.6mmol)在无水dme(600ml)的溶液中。将所得混合物在-50℃下搅拌1h，然后滴加1-(3-溴苯基)环丙烷甲醛(6.88g,30.6mmol)在dme(25ml)中的溶液。使反应物在1h内逐渐升温至0℃。将反应物用水(100ml)淬灭，并且减压蒸发dme。将残余物用4:1 chcl3/ipa(200ml)稀释。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa(4x200ml)萃取，将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(2-12％meoh/dcm)纯化，得到(1-(3-溴苯基)环丙基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(4.82g,51％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:308.2/310.2[m h]
(br模式)。1h nmr(400mhz,cdcl3)7.81(s,1h),7.37
–
7.33(m,2h),7.11
–
7.04(m,2h),5.83(s,1h),4.70(s,1h),3.07(s,3h),1.22
–
1.16(m,1h),1.15
–
1.10(m,1h),0.93
–
0.87(m,1h),0.84
–
0.78(m,1h)。
[0647]
在步骤d-4中，如下制备(1-(3-氨基苯基)环丙基)(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇。在氮气下，在微波小瓶中，将氧化铜(i)(278mg，1.95mmol)添加到(1-(3-溴苯基)环丙基)(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇(1.00g，3.25mmol)和浓氨水(6.0ml)在乙腈(6.5ml)的混合物中。将小瓶密封，并且将反应物在100℃下搅拌18h。将反应物用4∶1 chcl3/ipa(50ml)、水(25ml)和浓氨水(25ml)稀释。分离各层，将水相用4∶1 chcl3/ipa(10x50ml)萃取，将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过c18硅胶色
(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-醇(6.20g,56％收率)。lcms(esi)m/z:296.1/298.2[m h]
(br模式)。
[0655]
在步骤e-4中，如下制备2-(3-溴苯基)-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-酮。在室温下，将dmp(17.8g,42mmol)一次性添加到2-(3-溴苯基)-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-醇(6.22g,21.0mmol)在dcm(100ml)的溶液中。将所得混合物在相同温度下搅拌20h。将反应物用水(100ml)淬灭，并用4:1chcl3/ipa(100ml)稀释。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa(3x100ml)萃取，将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-100％etoac/dcm)纯化，得到2-(3-溴苯基)-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-酮(5.20g，84％收率)。lcms(esi)m/z:294.2/296.1[m h]
(br模式)。
[0656]
在步骤e-5中，如下制备3-(2-(3-溴苯基)-1,1-二氟丙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。将dast(25ml,189mmol)和2-(3-溴苯基)-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-酮(2.70g,9.18mmol)的混合物在60℃下搅拌60h。将反应物冷却至0℃，用饱和碳酸氢钠水溶液小心地淬灭直至达到ph 8，并用dcm(100ml)稀释。分离各层，将水相用dcm(2x100ml)萃取，将合并的有机相用盐水(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-100％etoac/dcm)纯化，得到3-(2-(3-溴苯基)-1,1-二氟丙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(900mg,31％收率)。lcms(esi)m/z:316.1/318.12[m h]
(br模式)。
[0657]
在步骤e-6中，如下制备3-(1,1-二氟-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-2-基)苯胺。在氮气下，在密封管中，将氧化铜(i)(462mg,3.23mmol)添加到3-(2-(3-溴苯基)-1,1-二氟丙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(1.70g,5.38mmol)和浓氨水(35ml)在乙腈(15ml)的混合物中。将管密封，并且将反应物在100℃下搅拌18h。将反应物用4∶1 chcl3/ipa(100ml)、水(50ml)和浓氨水(50ml)稀释。分离各层，将水相用4∶1 chcl3/ipa(4x100ml)萃取，将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到3-(1，1-二氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯胺(1.20g，88％收率)。lcms(esi)m/z：253.3[m h]
。
[0658]
实例6：中间体f(3-(1-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯胺)
[0659]
中间体f可以根据图5f的方案6来合成。
[0660][0661]
在步骤f-1中，如下制备3-(2-(3-溴苯基)-1-氟丙基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑。在0℃下，向2-(3-溴苯基)-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-1-醇(3.13g，10.6mmol)(先前在中间体e的合成中制备)在dcm(151ml)的溶液中滴加deoxo-fluor(50％w/w在甲苯中)(10.2ml，23.3mmol)(监测内部温度＜5℃)。使反应物升温至室温并搅拌1h。将反应物冷却至0℃并通过缓慢添加水(100ml)淬灭。将反应混合物用dcm(3x100ml)萃取，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥。将残余物通过硅胶色谱法(0-5％meoh/dcm)纯化，得到3-(2-(3-溴苯基)-1-氟丙基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑(2.09g，66％收率)。lcms(esi)m/z：298.2/300.1[m h]
(br模式)。
[0662]
在步骤f-2中，如下制备3-(1-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯胺。在氮气下，在密封管中，将氧化铜(i)(602mg，4.21mmol)添加到3-(2-(3-溴苯基)-1-氟
丙基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑(2.09g，7.00mmol)和浓氨水(35ml)在乙腈(14ml)的混合物中。将管密封，并且将反应物在100℃下搅拌18h。将反应物用4∶1 chcl3/ipa(100ml)、水(50ml)和浓氨水(50ml)稀释。分离各层，将水相用4∶1 chcl3/ipa(5x100ml)萃取，将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到3-(1-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯胺(1.82g，100％收率)。lcms(esi)m/z：235.3[m h]
。
[0663]
实例7：中间体g((s)-3-(2-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯胺)
[0664]
中间体g可以根据图5g的方案7来合成。
[0665][0666]
在步骤g-1中，如下制备(r)-2-(3-溴苯基)-2-氟丙-1-醇。在室温下，将碳酸氢钠(840mg，10.0mmol)和n-氟苯磺酰亚胺(3.15g，10.0mmol)依次添加到2-(3-溴苯基)丙醛(2.13g，10.0mmol)、n-[(1r，2r)-2-氨基环己基]-2，6-二苯基-苯甲酰胺(741mg，2.00mmol)和三氟乙酸(154ul，2.00mmol)在thf(30ml)的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌4h，用meoh(100ml)稀释并冷却至0℃。在10min内分3批添加硼氢化钠(3.78g，100mmol)，使反应物升温至室温并搅拌90min。将反应物用饱和氯化铵水溶液(50ml)淬灭，用乙酸乙酯(250ml)稀释，并且将所得混合物搅拌30min。分离各层，并且将水相用etoac(4x100ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-60％etoac/庚烷)纯化，得到(r)-2-(3-溴苯基)-2-氟丙-1-醇(1.89g，81％收率)，为无色油状物。1h nmr(400mhz，cdcl3)7.58-7.52(m，1h)，7.48-7.42(m，1h)，7.31-7.23(m，2h)，3.86-3.68(m，2h)，1.67(d，j＝22.6hz，3h)。％ee被确定为80％(分析柱：chiralpak ia，250mm x 4.6mm id，5μm；流动相：5∶95 etoh∶己烷(0.1％dea)；等度流速：1ml/min，(压力为54.4巴)；柱温：约26℃；运行时间：18min；波长：220nm；rt峰#1＝rt1＝8.3min(一半高度处的宽度＝w1＝0.1469min)；rt峰#2＝rt2＝14.6min(一半高度处的宽度＝w2＝0.2974min))。
[0667]
在步骤g-2中，如下制备(r)-2-(3-溴苯基)-2-氟丙醛。在室温下，将dmp(3.78g,8.92mmol)一次性添加到(r)-2-(3-溴苯基)-2-氟丙-1-醇(1.89g,8.11mmol)在dcm(25ml)的溶液中。将所得混合物在相同温度下搅拌1h。将反应物通过硅胶垫(用100ml dcm洗脱)过滤，并且将滤液减压浓缩，得到(r)-2-(3-溴苯基)-2-氟丙醛(1.72g,92％收率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)9.70(d,j＝4.7hz,1h),7.58(t,j＝1.8hz,1h),7.50(dt,j＝7.3,1.5hz,1h),7.31(ddd,j＝14.2,9.6,4.8hz,2h),1.77(d,j＝22.7hz,3h)。
[0668]
在步骤g-3中，如下制备(2r)-2-(3-溴苯基)-2-氟-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-醇。在-50℃下，将2.5m正丁基锂的己烷溶液(1.90ml,4.76mmol)滴加到4-甲基-1,2,4-三唑(396mg,4.76mmol)在无水dme(60ml)的溶液中。将所得混合物在-50℃下搅拌1h，然后滴加(r)-2-(3-溴苯基)-2-氟丙醛(1.00g,4.33mmol)在dme(5ml)中的溶液。使反应物在1h内逐渐升温至0℃。将反应物用水(25ml)淬灭，并且减压蒸发dme。将残余物用4:1 chcl3/ipa(50ml)稀释。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa(4x50ml)萃取，将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-15％meoh/dcm)纯化，得到(2r)-2-(3-溴苯基)-2-氟-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-醇(675mg,50％收率)。
lcms(esi)m/z:314.0/316.0[m h]
(br模式)。
[0669]
在步骤g-4中，如下制备o-((2r)-2-(3-溴苯基)-2-氟-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙基)1h-咪唑-1-硫代甲酸酯。在20℃下，将1,1'-硫代羰基二咪唑(82ul,0.61mmol)缓慢添加到(2r)-2-(3-溴苯基)-2-氟-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-1-醇(160mg,0.51mmol)和dmap(3.1mg,0.030mmol)在无水dcm(3ml)的溶液中。将所得混合物在20℃下搅拌1h。将反应物通过硅胶色谱法(0-10％meoh/dcm)直接纯化，得到o-((2r)-2-(3-溴苯基)-2-氟-1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙基)1h-咪唑-1-硫代甲酸酯(200mg，93％收率)。lcms(esi)m/z：424.0/426.0(br模式)。
[0670]
在步骤g-5中，如下制备(s)-3-(2-(3-溴苯基)-2-氟丙基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑。将o-((2r)-2-(3-溴苯基)-2-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙基)1h-咪唑-1-硫代甲酸酯(260mg，0.61mmol)、三丁基氢化锡(1.65ml，6.13mmol和aibn(15.1mg，0.090mmol)在无水甲苯(10ml)中的混合物在80℃下搅拌1h。向反应混合物中添加氟化钾(2g)和硅胶(20g)，并且将所得混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-20％meoh/dcm)直接纯化，得到(s)-3-(2-(3-溴苯基)-2-氟丙基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑(98mg，54％收率)。lcms(esi)m/z：298.0/300.0(br模式)。
[0671]
在步骤g-6中，如下制备(s)-3-(2-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯胺。在氮气下，在耐压烧瓶中，将氧化铜(i)(28.22mg，0.2000mmol)添加到4-甲基-3-[(2s)-2-(3-溴苯基)-2-氟-丙基]-1，2，4-三唑(98mg，0.3300mmol)在浓nh3水溶液(5ml)/mecn(2ml)的溶液中。将烧瓶密封，并且将反应物在110℃下搅拌5h。lcms显示在存在消除副产物的情况下完全转化。将反应物用etoac/水(20ml/5ml)稀释。分离有机层，将水相用etoac(4
×
20ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗品通过快速柱色谱法(硅胶，用tea预处理，0％meoh/dcm(0.5％tea)至15％meoh/dcm(0.5％tea))纯化，得到4-甲基-3-[(2s)-2-(3-溴苯基)-2-氟-丙基]-1，2，4-三唑(98mg，99％收率)。lcms(esi)[m h]
＝235.2。
[0672]
实例8：中间体h(6-溴-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)
[0673]
中间体h可以根据图5h的方案8来合成。
[0674][0675]
在单个步骤中，如下制备中间体h。将3-[3-[氟-(4-甲基-1，2，4-三唑-3-基)甲基]氧杂环丁烷-3-基]苯胺(2.00g，7.63mmol)和5-溴-2-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(中间体a；2.87g，7.63mmol)在乙腈(63.5ml)和水(31.8ml)中的混合物冷却至0℃，然后滴加硝酸银(1.68g，9.91mmol)在水(32ml)中的溶液。将反应物在室温下搅拌18h。添加饱和碳酸氢钠溶液，直到ph达到ph～8。然后将混合物用乙腈(5.0ml)稀释，通过短硅藻土垫过滤，用9∶1的ch2cl2/meoh混合物(500ml)洗涤滤饼。将滤饼用更多的ch2cl2(700ml)洗涤，然后用纯meoh洗涤，直到tlc指示没有更多的产物从硅藻土滤饼中洗脱(约500ml)。将挥发物蒸发，并且将水层用ch2cl2(3x100ml)萃取。将有机相合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减
压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-7％甲醇/ch2cl2)纯化，得到6-溴-2-[3-[3-[氟-(4-甲基-1，2，4-三唑-3-基)甲基]氧杂环丁烷-3-基]苯基]-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(1.89g，47％收率)。lcms(esi)m/z：524.9/526.9(br模式)[m h]
。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.20(d，j＝1.2hz，1h)，8.08(br s，1h)，7.98(dd，j＝1.6，0.7hz，1h)，7.61(d，j＝7.5hz，1h)，7.43-7.36(m，2h)，6.83(d，j＝7.8hz，1h)，6.46(d，j＝46.0hz，1h)，5.33-5.18(m，5h)，5.02-4.80(m，3h)，3.08(d，j＝1.5hz，3h)。
[0676]
实例9：中间体i(2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛)
[0677]
中间体i可以根据图5i的方案9来合成。
[0678][0679]
在单个步骤中，如下制备中间体i。按照针对中间体h描述的程序，获得2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛，为橙色固体。lcms(esi)m/z：475.2[m h] 。醛试剂可以如pct公布wo2019/14005中所述进行制备。
[0680]
实例10：中间体j(2-(3-(1，2-二氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛)
[0681]
中间体j可以根据图5j的方案10来合成。
[0682][0683]
在单个步骤中，如下制备中间体j。按照针对中间体h描述的程序，获得2-(3-(1，2-二氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛，为灰白色固体。lcms(esi)m/z：465.0[m h]
。
[0684]
实例11：中间体k(2-(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛)
[0685]
中间体k可以根据图5k的方案11来合成。
[0686][0687]
在单个步骤中，如下制备中间体k。按照针对中间体h描述的程序，获得2-(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛，为黄色固体。lcms(esi)m/z：459.1[m h] 。
[0688]
实例12：中间体l(2-(3-(1，1-二氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛)
[0689]
中间体l可以根据图5l的方案12来合成。
[0690][0691]
在单个步骤中，如下制备中间体l。按照针对中间体h描述的程序，获得2-(3-(1，1-二氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛。lcms(esi)m/z：465.1[m h] 。
[0692]
实例13：中间体m(2-(3-(1-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛)
[0693]
中间体m可以根据图5m的方案13来合成。
[0694][0695]
在单个步骤1中，如下制备中间体m。按照针对中间体h描述的程序，2-(3-(1-氟-1-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)丙-2-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛。lcms(esi)m/z：447.1[m h] 。
[0696]
实例14：中间体n((
±
)-2-(3-(3，3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛)
[0697]
中间体n可以根据图5n的方案14来合成。
[0698][0699]
在步骤n-1中，如下制备1-(3-溴苯基)-3,3-二甲氧基环丁烷甲腈。在0℃下，向氢化钠(60％,5.1g,127.5mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(100ml)的混合物中添加2-(3-溴苯基)乙腈(9.9ml,51.0mmol；cas号：539-82-2)，将混合物在0℃下搅拌30分钟。然后在0℃下添加1,3-二溴-2,2-二甲氧基丙烷(10.7g,40.8mmol；cas号：22094-18-4)。将混合物在60℃下搅拌48h并冷却至室温，然后将混合物倒入水(100ml)中并用乙酸乙酯(2x150ml)萃取。将合并的相用水(2x100ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法
3.32(m,2h),3.00-2.73(m,5h)。lcms[m h]
＝359.8。
[0704]
在步骤n-6中，如下制备3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。在氮气下，在0℃下，向(1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(1g,2.8mmol)在二氯甲烷(30ml)的溶液中添加n,n-二乙基氨基三氟化硫(dast)(1.1ml,8.4mmol)。将混合物在0℃下搅拌5h，然后通过添加饱和nahco3水溶液(10ml)淬灭。将所得混合物用二氯甲烷(3x20ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到直接用于下一步的粗产物3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(1g,99.4％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝361.8。
[0705]
在步骤n-7中，如下制备3-(3,3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺。向密封管中添加3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(0.5g,1.4mmol)、氧化铜(i)(99.3mg,0.7mmol)、氢氧化氨(10ml,275.3mmol)和乙腈(15ml)。将混合物在100℃下搅拌16h。将反应混合物过滤并浓缩，得到直接用于下一步的粗品3-(3,3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺(400mg，97.2％收率)，为淡蓝色固体。lcms：[m h]
＝296.9。
[0706]
在步骤n-8中，如下制备2-(3-(3，3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛。在0℃下，向2-(溴甲基)-5-甲酰基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(219.4mg，0.7mmol)和3-(3，3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺(200.0mg，0.7mmol)在乙腈(6ml)的混合物中添加硝酸银(126.1mg，0.7mmol)在水(2ml)中的溶液。将混合物在25℃下搅拌16h并在真空下浓缩。将残余物用甲醇(10ml)溶解，通过硅藻土垫过滤，并用含10％甲醇的二氯甲烷(10ml)冲洗。在真空下浓缩滤液。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至6％)纯化，得到2-2-(3-(3，3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(200mg，58.3％收率)，为黄色固体。
[0707]
实例15：中间体p(3-((1-(3-溴苯基)-3，3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑)
[0708]
中间体p可以根据图5p的方案15来合成。
[0709][0710]
在步骤p-1中，使用可以如中间体n的步骤所示制备的起始材料，如下制备1-(3-溴苯基)-3，3-二氟环丁烷甲醛。在-78℃下，将含1.0m dibal-h的己烷(27.6ml，27.56mmol)缓慢添加到1-(3-溴苯基)-3，3-二氟环丁烷甲腈(5g，18.38mmol)在乙醚(61.3ml)的溶液中。将所得混合物在相同温度下搅拌2h。将反应物用28ml的10％hcl水溶液小心地淬灭，并使其升温至室温。将反应混合物用etoac和水稀释。分离各层，将水相用etoac(1x)萃取，将合并的有机相用饱和nahco3水溶液、水洗涤，然后用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁烷甲醛(4.7g,93％收率)，为橙色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ9.53(s,1h),7.49(ddd,j＝8.0,1.8,1.0hz,1h),7.34(t,j＝1.9hz,1h),7.29(d,j
＝7.9hz,1h),7.12(ddd,j＝7.8,1.7,1.0hz,1h),3.42
–
3.31(m,2h),3.00
–
2.88(m,2h)
[0711]
在步骤p-2中，如下制备(1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇。在-50℃下，将2.51m n-buli m在己烷中的溶液(7.49ml,18.79mmol)(滴定)滴加到4-甲基-1,2,4-三唑(1.561g,18.79mmol)在无水dme(250ml)的溶液中。将所得混合物在-50℃下搅拌1h，然后滴加1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁烷甲醛(4.7g,17.09mmol)在dme(20ml 5ml用于洗涤)中的溶液。使反应物在1h内逐渐升温至0℃，并用水淬灭，用chcl3/ipa 4:1混合物稀释。分离各层，并且将水相用chcl3/ipa 4:1混合物(4x)萃取。将合并的有机相浓缩。将残余物研磨到40ml的1:1dcm/庚烷中，并且通过过滤收集固体，得到(1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(2.79g,46％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:358.0,359.9[m h]
[0712]
在步骤p-3中，如下制备3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。将(1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(2.64g,7.37mmol)、亚硫酰氯(26.7ml,368.53mmol)和dmf(285.3μl,3.69mmol)的混合物在60℃下搅拌30分钟。将反应物减压浓缩，并且将残余物与1:1dce/甲苯(2x)共蒸发，得到作为中间体的3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)氯甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。将氯中间体用含锌粉(72.9mg,1.12mmol)的乙酸(1.4ml)处理，并且将所得混合物在60℃下搅拌60h。将反应物经硅藻土过滤，用4:1的chcl3/ipa混合物冲洗，并且浓缩滤液。将残余物用饱和k2co3水溶液和4:1 chcl3/ipa稀释。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa(2x)萃取，将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(1-10％meoh/dcm)纯化，得到3-((1-(3-溴苯基)-3，3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑(2.07g，82％收率)，为淡黄色固体。lcms(esi)m/z：342.0，344.0[m h]
[0713]
实例16：中间体q(6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)
[0714]
中间体q可以根据图5q的方案16来合成。
[0715][0716]
在步骤q-1中，如下制备2-(溴甲基)-5-(羟甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。在0℃下，向2-(溴甲基)-5-甲酰基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(5.00g，15.38mmol)在甲醇(61.5ml)的溶液中分批且缓慢添加硼氢化钠(640.1mg，16.92mmol)。将反应物在0℃下搅拌15分钟，然后添加饱和nahco3水溶液。使反应物升温至室温并搅拌10分钟。将反应物用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到2-(溴甲基)-5-(羟甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(5.00g，99％收率)。粗产物将像在下一步骤中那样使用，并且假设收率为定量的。
[0717]
在步骤q-2中，如下制备6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向2-(溴甲基)-5-(羟甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(5.00g，15.29mmol)中添加7m氨的meoh溶液(76.4ml，535.02mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。将反应混合物浓缩，得到粗品6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(3.50g，99％收率)。无需进一步纯化即可用于下一步。lcms(esi)m/z：232.3[m h]
[0718]
实例17：中间体r((1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯)
[0719]
中间体r可以根据图5r的方案17a和17b来合成。
[0720][0721]
方案17a
[0722]
在步骤r-1中，如下制备6-(氯甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(3.50g,15.14mmol)在dcm(75.7ml)的溶液中添加亚硫酰氯(2.75ml,37.85mmol)。将反应物在室温下搅拌2天。将反应物冷却至0℃并添加几滴meoh。10分钟后，将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用dcm萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到6-(氯甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(3.705g,98％收率)。产物以粗品原样用于下一步。lcms(esi)m/z:250.4[m h]
[0723]
在步骤r-2中，如下制备6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向1-甲基环丁胺盐酸盐(2.253g,18.53mmol)在mecn(37.1ml)的溶液中添加碳酸铯(9.719g,29.65mmol)。将反应物在60℃下搅拌5分钟，然后添加6-(氯甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(1.850g,7.41mmol)。将反应物在60℃下搅拌16h。将反应物冷却至室温，并添加水，用etoac萃取，将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-10％meoh/dcm)纯化，得到6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(1.230g,56％收率)。lcms(esi)m/z:299.4[m h]
。
[0724]
在步骤r-3中，如下制备(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯。向6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(0.64g,2.15mmol)和二碳酸二叔丁酯(0.54ml,2.36mmol)在dcm(7.2ml)的溶液中添加三乙胺(0.45ml,3.22mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-5％meoh/dcm)纯化，得到(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(745mg，87％收率)。lcms(esi)m/z：397.4[m h]
[0725]
实例18：中间体r((1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯；途径2)
[0726]
中间体r可以根据图5r的方案17b中示出的第二种途径来合成。
[0727][0728]
在步骤r-4中，如下制备2-(溴甲基)-5-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。向2-(溴甲基)-5-甲酰基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(中间体a；12.0g，36.9mmol)和(1-甲基环丁基)氯化铵(4.49g，36.9mmol)在dce(100ml)的搅拌溶液中添加三
乙胺(5.15ml，36.9mmol)，随后在20分钟内分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(23.47g，110.74mmol)。将悬浮液在室温下搅拌16h，然后通过添加饱和nahco3水溶液淬灭，并用dcm(3x150ml)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到2-(溴甲基)-5-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(16.2g，111％收率)，为琥珀色油状物且无需进一步纯化即可用于下一步。
[0729]
在步骤r-5中，如下制备2-(溴甲基)-5-(((叔丁氧基羰基)(1-甲基环丁基)氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。向2-(溴甲基)-5-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(16.5g，31.4mmol)在thf(150ml)的溶液中添加三乙胺(13.1ml，94.2mmol)，随后添加二碳酸二叔丁酯(10.8ml，47.09mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。添加饱和nahco3水溶液(150ml)，并且将产物用etoac(3x250ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到2-(溴甲基)-5-(((叔丁氧基羰基)(1-甲基环丁基)氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(18.2g，117％收率)。无需进一步纯化即可用于下一步。
[0730]
在步骤r-6中，如下制备(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯。将2-(溴甲基)-5-(((叔丁氧基羰基)(1-甲基环丁基)氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(18g，16.4mmol)在7m氨的meoh溶液(100ml，700mmol)中的溶液在室温下搅拌16h。将反应物浓缩，并且将残余物通过硅胶色谱法(0-100％etoac/庚烷)纯化。获得的产物不够干净，通过c18硅胶色谱法(40-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.7)进行第二次纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.55g，39％收率)。lcms(esi)m/z：299.2[m h]
。
[0731]
实例19：中间体s((s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)
[0732]
中间体s可以根据图5s的方案18来合成。
[0733][0734]
在步骤s-1中，如下制备(s)-2-(溴甲基)-5-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。在10分钟内，向2-(溴甲基)-5-甲酰基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(550mg，1.61mmol)、(3s)-3-异丙基-1-甲基-哌嗪(229.3mg，1.61mmol)在dce(15ml)的搅拌溶液中分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.025g，4.84mmol)，然后将悬浮液在室温下搅拌20h。将反应混合物通过添加饱和nahco3水溶液淬灭并用chcl3∶ipa(9∶1)(3x)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到无需任何纯化即可用于下一步的(s)-2-(溴甲基)-5-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(728mg，100％收率)。lcms(esi)m/z：451.0，452.9[m h]
[0735]
在步骤s-2中，如下制备(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。将(s)-2-(溴甲基)-5-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(728mg，1.61mmol)在含7m氨的meoh(10ml，70mmol)中的溶液在室温下搅拌3h。将反应物浓缩并且将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph
＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(120mg，21％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z：356.2[m h]
[0736]
实例20：中间体t((s)-3-异丙基-4-((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯)
[0737]
中间体t可以根据图5t的方案19来合成。
[0738][0739]
在步骤t-1中，如下制备(s)-4-(4-(溴甲基)-3-(甲氧基羰基)-5-(三氟甲基)苄基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。在20分钟内，向2-(溴甲基)-5-甲酰基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(4.2g，12.92mmol)和(3s)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.95g，12.92mmol)在dce(64.6ml)的搅拌溶液中分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(8.21g，38.76mmol)，然后将悬浮液在室温下搅拌16h。将反应物通过添加饱和nahco3水溶液淬灭并用dcm(3x)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到(s)-4-(4-(溴甲基)-3-(甲氧基羰基)-5-(三氟甲基)苄基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，假设为定量的并按原样用于下一步。lcms(esi)m/z：536.9，538.9[m h]
[0740]
在步骤t-2中，如下制备(s)-3-异丙基-4-((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。将(s)-4-(4-(溴甲基)-3-(甲氧基羰基)-5-(三氟甲基)苄基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.94g，12.92mmol)在7m氨的meoh溶液(36.9ml，258.4mmol)中的溶液在室温下搅拌16h。将反应物浓缩，并且将残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到(s)-3-异丙基-4-((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.66g，两步收率29％)，为白色固体。lcms(esi)m/z：442.0[m h]
[0741]
实例21：中间体u((1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁基)(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇)
[0742]
中间体u可以根据图5u的方案20来合成。
[0743][0744]
在步骤u-1中，如下制备1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁烷甲腈。将2，4，6-三氯吡啶(5g，27.41mmol)和环丁烷甲腈(2.54ml，28.78mmol)溶解在thf(54.8ml)中并冷却至-78℃。在10分钟内，滴加1m lihmds的thf溶液(30.2ml，30.15mmol)。移除冷却浴，并且使反应混合物升温至室温并搅拌2h。将反应物通过添加饱和nh4cl水溶液淬灭，用dcm(3x)萃取，将合并的有机层用盐水洗涤并经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-50％
etoac/庚烷)纯化，得到1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁烷甲腈(4.5g，72％收率)。lcms(esi)m/z：227.3，229.1[m h]
1
h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.33(s，2h)，2.94-2.77(m，2h)，2.67-2.40(m，3h)，2.24-2.05(m，1h)
[0745]
在步骤u-2中，如下制备1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁烷甲醛。在-78℃下，将1m dibal-h的甲苯溶液(21.8ml，21.8mmol)缓慢添加到1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁烷甲腈(4.5g，19.82mmol)在甲苯(116.7ml)的溶液中。将所得混合物在-78℃下搅拌1h。将反应物通过添加饱和nh4cl水溶液淬灭，用dcm(3x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-50％etoac/庚烷)纯化，得到1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁烷甲醛(2.5g，55％收率)。lcms(esi)m/z：230.1，232.1[m h]
1
h nmr(400mhz，cdcl3)δ9.61(s，1h)，7.04(s，2h)，2.76(m，2h)，2.43(m，2h)，2.21-1.91(m，2h)。
[0746]
在步骤u-3中，如下制备(1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁基)(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇。在-50℃下，将2.5m n-buli的己烷溶液(5.0ml，12.52mmol)添加到4-甲基-1，2，4-三唑(1.04g，12.52mmol)在dme(120ml)的溶液中，并且将反应物在-50℃下搅拌1h。滴加含1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁烷甲醛(2.4g，10.43mmol)的dme(30ml)，并使反应物缓慢升温至室温。在室温下1h后，将反应物用饱和nh4cl水溶液淬灭，并用4∶1的chcl3/ipa混合物(3x500ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过硅胶色谱法(0-15％meoh/dcm)纯化，得到(1-(2，6-二氯吡啶-4-基)环丁基)(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇(0.820g，25％收率)。lcms(esi)m/z：313.1，315.2[m h]
[0747]
实例22：中间体v(2，6-二氯-4-(1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶)
[0748]
中间体v可以根据图5v的方案21来合成。
[0749][0750]
在步骤v-1中，如下制备2,6-二氯-4-(1-(氯(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶。将(1-(2,6-二氯吡啶-4-基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(9.58g,30.59mmol)悬浮在dcm(305.9ml)中，然后添加亚硫酰氯(4.4ml,61.18mmol)和催化量的dmf(约5滴)。将溶液在室温下搅拌3.5h，然后用水淬灭并用4:1的chcl3:ipa混合物(4x)萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗混合物通过用etoac研磨来纯化，并且将固体通过过滤收集，用少量etoac洗涤，然后用庚烷洗涤，并在高真空下干燥，得到2,6-二氯-4-(1-(氯(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(7.16g,71％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:331.0,333.0,335.0[m h]
。
[0751]
在步骤v-2中，如下制备2,6-二氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶。将2,6-二氯-4-(1-(氯(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(7.16g,21.59mmol)悬浮在乙酸(72ml)中并且添加锌(2.12g,32.39mmol)。将混合物在55℃下剧烈搅拌1h，然后冷却至室温并且蒸发大部分乙酸。将过量的锌通过添加1n hcl溶液淬
灭，然后搅拌并超声处理几分钟。将溶液用5n naoh溶液碱化，并用4:1的chcl3:ipa混合物稀释，分离各层，并且将有机物用1n naoh溶液(2x)洗涤。将所有水层合并，并用chcl3:ipa(5x)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到无需进一步纯化即可用于下一步的2,6-二氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(6.51g,101％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:297.0,299.0[m h]
1
h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.26(s，1h)，7.26(s，2h)，3.30(s，2h)，3.27(s，3h)，2.45-2.32(m，4h)，2.15-2.02(m，1h)，1.86-1.75(m，1h)。
[0752]
实例23：中间体w(3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺)
[0753]
中间体w可以根据图5w的方案22来合成。
[0754][0755]
在微波小瓶中，在氮气下，将氧化铜(i)(250.9mg，1.75mmol)添加到3-((1-(3-溴苯基)-3，3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑(1g，2.92mmol)和浓nh3水溶液(6.ml)在mecn(5.8ml)的混合物中。密封小瓶，并且将反应物在100℃下搅拌16h。将反应物冷却至室温，并通过硅藻土垫过滤，并用meoh和水洗涤。将滤液用4∶1 chcl3/ipa和盐水稀释。分离各层，将水相用4∶1 chcl3/ipa(3x50ml)萃取，并且将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-50％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺(653mg，80％收率)，为绿色固体。lcms(esi)m/z：279.3[m h]
。
[0756]
实例24：中间体x(4-(二氟甲基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮)
[0757]
中间体x可以根据图5x的方案23来合成。
[0758][0759]
在步骤x-1中，如下合成1-溴-3-(二氟甲基)-2-甲基苯。在0℃下向3-溴-2-甲基-苯甲醛(3.500g,17.58mmol)在dcm(5ml)的溶液中添加dast(9.3ml,70.34mmol)。将反应物搅拌2天。将反应物用水稀释并用dcm萃取。将合并的有机层用饱和nahco3水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-20％etoac/庚烷)纯化，得到1-溴-3-(二氟甲基)-2-甲基-苯(3.36g,86％收率)。
[0760]
在步骤x-2中，如下合成3-(二氟甲基)-2-甲基苯甲酸。向烧瓶中装入1-溴-3-(二氟甲基)-2-甲基-苯(3.54mg,16.02mmol)、乙酸钯(719.1mg,3.2mmol)、xantphos(926.7mg,1.6mmol)和草酸(2.18ml,24.02mmol)。用氮气吹扫后，添加含有dipea(4.2ml,24.02mmol)和乙酸酐(2.3ml,24.02mmol)的脱气dmf(53.4ml)，并将反应物加热至100℃持续16h。将反应混合物用1m naoh溶液(2x)萃取。将水相用etoac(2x)洗涤，并用浓hcl酸化。将水相用
etoac萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到原样用于下一步的粗品3-(二氟甲基)-2-甲基-苯甲酸(1.2g,40％收率)。lcms(esi)m/z:185.0[m-h]-。
[0761]
在步骤x-3中，如下合成3-(二氟甲基)-2-甲基苯甲酸甲酯。在0℃下，向3-(二氟甲基)-2-甲基-苯甲酸(1.2g,6.45mmol)在dmf(12.9ml)的溶液中添加碳酸钾(2.672g,19.34mmol)。10分钟后，添加碘甲烷(802.6μl,12.89mmol)并且将反应物在室温下搅拌16h。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到3-(二氟甲基)-2-甲基-苯甲酸甲酯(1.28g,99％收率)。残余物以粗品原样用于下一步。
[0762]
在步骤x-4中，如下合成5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲基苯甲酸甲酯。向3-(二氟甲基)-2-甲基-苯甲酸甲酯(1.28g,6.39mmol)在乙酸(8.9ml)的溶液中添加70％hno3水溶液(2.9ml,63.94mmol)和溴(360.3μl,7.03mmol)，随后使用加料漏斗滴加2.5m agno3水溶液(3.33ml,8.31mmol)。然后将混合物在室温下搅拌16h。然后将反应混合物倒在冰上，用饱和na2co3水溶液稀释，并用etoac(3x)萃取。将有机物合并，用水(3x)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗品通过硅胶色谱法(0-20％etoac/庚烷)纯化，得到5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲基-苯甲酸甲酯(1.435g,80％收率)。
[0763]
在步骤x-5中，如下合成3-(二氟甲基)-5-(甲氧基羰基)-4-甲基苯甲酸。向烧瓶中装入5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲基-苯甲酸甲酯(1.430g,5.12mmol)、乙酸钯(230.1g,1.02mmol)、xantphos(296.5mg,0.51mmol)和草酸(699μl,7.69mmol)。用氮气吹扫后，添加含有dipea(1.34ml,7.69mmol)和乙酸酐(725.2μl,7.69mmol)的脱气dmf(25.6ml)，并将反应物加热至100℃持续16h。将反应混合物用饱和na2co3水溶液(2x)萃取，并用etoac(2x)洗涤。将水相用浓hcl酸化，用etoac萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗残余物通过c18硅胶色谱法(15-45％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化，仅收集最干净的级分，冷冻并冻干，得到3-(二氟甲基)-5-甲氧基羰基-4-甲基-苯甲酸(833mg,67％收率)。lcms(esi)m/z:243.0[m-h]-。
[0764]
在步骤x-6中，如下合成4-(溴甲基)-3-(二氟甲基)-5-(甲氧基羰基)苯甲酸。向3-(二氟甲基)-5-甲氧基羰基-4-甲基-苯甲酸(830mg,3.4mmol)在四氯化碳(22.7ml)的溶液中添加n-溴琥珀酰亚胺(907.5mg,5.1mmol)和过氧化苯甲酰(247mg,1.02mmol)。将反应物在80℃下搅拌16h。将反应物用饱和na2co3水溶液萃取，并且将合并的水相用dcm洗涤。将水溶液用3n hcl溶液酸化，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到4-(溴甲基)-3-(二氟甲基)-5-(甲氧基羰基)苯甲酸(1.029g,94％收率)。残余物同样用于下一步。lcms(esi)m/z:321.0[m h]
。
[0765]
在步骤x-7中，如下合成2-(溴甲基)-3-(二氟甲基)-5-(羟甲基)苯甲酸甲酯。在0℃下，向4-(溴甲基)-3-(二氟甲基)-5-甲氧基羰基-苯甲酸(300mg，0.93mmol)在thf(3.7ml)的溶液中添加1m硼烷的thf溶液(3.3ml，3.25mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过硅胶色谱法(0-30％etoac/庚烷)纯化，得到2-(溴甲基)-3-(二氟甲基)-5-(羟甲基)苯甲酸甲酯(211.1mg，74％收率)1h nmr(400mhz，cdcl3)δ8.05(s，1h)，7.80(s，1h)，7.06(t，j＝54.8hz，1h)，5.06(s，2h)，4.79(s，2h)，3.97(s，j＝0.8hz，3h)。
[0766]
在步骤x-8中，如下合成4-(二氟甲基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮。向2-(溴甲
基)-3-(二氟甲基)-5-(羟甲基)苯甲酸甲酯(485mg，1.57mmol)中添加7m氨的meoh溶液(10.1ml，70.61mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。完成后，浓缩反应混合物。添加最少量的水，并且将水溶液用me-thf萃取几次，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到同样用于下一步的粗产物。lcms(esi)m/z：214.2[m h]
。
[0767]
实例30至80描述了根据本发明的各种示例性异吲哚啉-1-酮化合物的合成。在制备非对映体或对映体化合物的混合物的一些情况下，立体化学仅被任意指定给一种或另一种化合物。
[0768]
实例25：化合物9和10
[0769]
彼此为立体异构体的化合物9和10可以根据图6的方案24合成。
[0770][0771]
向2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(中间体i，方案9，图6i，300.0mg，0.65mmol)在甲醇(9ml)的溶液中添加2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷草酸酯(370.8mg,1.96mmol)和三乙胺(0.25ml,1.83mmol)。将混合物在微波照射下在100℃下加热1分钟并冷却至室温。然后向混合物中添加氰基硼氢化钠(43.7mg,0.70mmol)，并在微波照射下在80℃下再加热45分钟。将反应物用1m hcl溶液淬灭，并且通过添加饱和nahco3溶液将所得溶液调节至ph＝7。将所得溶液用二氯甲烷(3x20ml)萃取。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过制备型tlc(溶剂梯度：10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到6-((2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(60.0mg,17％收率)，为无色油状物。lcms[m h]
＝558.1。
[0772]
上述外消旋物(60.0mg,0.11mmol)通过手性sfc(柱＝daicel chiralcel od-h；柱尺寸＝250mm
×
30mm
×
5μm；检测波长＝220nm；流速＝60ml/min；运行时间＝4.5min；柱温＝25℃)用0.1％氢氧化铵-45％乙醇-二氧化碳)进一步纯化，得到化合物9和10，其特征如下。
[0773]
(r)-6-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1，保留时间＝2.122min)(2.6mg,4％收率)，为白色固体(9)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4):δ8.28(s,1h),8.01(s,1h),7.91(s,1h),7.80(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.52(t,j＝2.0hz,1h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),6.93(d,j＝8.0hz,1h),6.31(d,j＝45.6hz,1h),5.48(d,j＝6.8hz,1h),5.31(d,j＝6.8hz,1h),5.22(dd,j＝1.6,6.4hz,1h),5.10(br.s,2h),5.02(dd,j＝4.4,6.4hz,1h),4.76(s,4h),3.84(s,2h),3.56(s,4h),3.12(s,3h)。
[0774]
(s)-6-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2，保留时间＝2.926min)(3.5mg,6％收率)，为白色固体(10)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4):δ8.28(s,1h),8.01(s,1h),7.91(s,1h),7.80(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.52(t,j＝2.0hz,1h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),6.93(d,j＝8.0hz,1h),6.31(d,j＝45.6hz,1h),5.48(d,j＝6.8hz,1h),5.31
基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(60.0mg,65.2％收率)，为黄色油状物。lcms[m h]
＝584.1。
[0789]
向3-(2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(48.8mg,0.08mmol)在二氯甲烷(3ml)的混合物中添加三氟乙酸(0.15ml,0.08mmol)，将混合物在18℃下搅拌3h并减压浓缩至干。将残余物通过rp-hplc(水(0.2％甲酸)-acn6％至36％)纯化，得到6-(氮杂环丁烷-2-基)-2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯(化合物13)，(3.04mg,6.6％收率)，为黄色固体。1h nmr(400mhz,甲醇-d4):δ8.46(br s,1h),8.25(s,1h),8.20(s,1h),8.15(s,1h),7.80-7.76(m,1h),7.47-7.38(m,2h)6.82(d,j＝8.0hz,1h),5.81(t,j＝8.8hz,1h),5.17(s,2h),5.14-5.07(m,4h),4.31-4.23(m,1h),3.99-3.92(m,1h),3.68(s,2h),3.11-3.05(m,1h),2.94-2.87(m,4h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
:484.1.
[0790]
实例29：化合物14
[0791]
化合物14可以根据图10的方案28来合成。
[0792][0793]
如下制备第一中间体3-(3-溴苯基)-3-氧代丙酸乙酯。在0℃下，向3-溴苯乙酮(15.0g，75.36mmol)在甲苯(150ml)的溶液中添加氢化钠(60％，12.0g，301.45mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h，并且添加碳酸二乙酯(45.7ml，376.81mmol)。将反应混合物在120℃下加热20h并冷却。将混合物用水淬灭，并通过添加1m hcl溶液调节至ph＝7。将所得溶液用乙酸乙酯(3x500ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度1％至2％)纯化，得到3-(3-溴苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(12.0g，59％收率)，为无色油状物。
[0794]
如下制备第二中间体3-(3-溴苯基)-3-羟基丙酸乙酯。在25℃下，向3-(3-溴-苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(8.50g，31.35mmol)在乙醇(100ml)的溶液中添加硼氢化钠(3.60g，94.06mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h，并通过添加水(200ml)淬灭。将溶液用乙酸乙酯(3
×
200ml)萃取。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至3％)纯化，得到3-(3-溴苯基)-3-羟基-丙酸乙酯(4.00g，47％收率)，为无色油状物。
[0795]
如下制备第三中间体3-(3-溴苯基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酸乙酯。向[3-(3-溴苯基)-3-羟基-丙酸乙酯(4.00g，14.65mmol)在二氯甲烷(70ml)的溶液中添加咪唑(1.50g，21.97mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(2.90g，19.04mmol)。将所得溶液在20℃下搅拌2h并用水(200ml)稀释。然后将混合物用二氯甲烷(3x200ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至2.5％)纯化，得到3-(3-溴苯基)-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸乙酯(4.20g,74％收率)]，为无色油状物。
[0796]
如下制备第四中间体3-(3-溴苯基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰肼。向3-(3-溴苯基)-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸乙酯(4.20g,10.84mmol)在甲醇(50ml)的溶液中添加一水合肼(9.9ml,171.88mmol)。将混合物在80℃下加热12h并减压浓缩，得到粗品3-(3-溴苯基)-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酰肼(4.00g,98％收率)，为白色固体。lcms[m h]
＝375.0。
[0797]
如下制备第五中间体2-(3-(3-溴苯基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰基)-n-甲基肼硫代甲酰胺。在25℃下，向3-(3-溴苯基)-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酰肼(4.00g,10.71mmol)在四氢呋喃(75ml)的混合物中添加异硫氰酸甲酯(1.60g,21.43mmol)。将混合物在25℃下搅拌4h并减压浓缩，得到粗品1-[[3-(3-溴苯基)-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酰基]氨基]-3-甲基-硫脲(4.00g,84％收率)，为白色固体。lcms[m h] ＝448.0。
[0798]
如下制备第六中间体5-(2-(3-溴苯基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-硫醇。将1-[[3-(3-溴苯基)-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酰基]氨基]-3-甲基-硫脲(4.0g,8.96mmol)在1m氢氧化钠(42.0ml,42.0mmol)中的混合物在25℃下搅拌1h，并通过添加1m hcl调节至ph＝5。过滤收集形成的固体并干燥，得到粗品5-[2-(3-溴苯基)-2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-乙基]-4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-硫醇(3.6g,95％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝428.0。
[0799]
如下制备第七中间体3-(2-(3-溴苯基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。向5-[2-(3-溴苯基)-2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-乙基]-4-甲基-1,2,4-三唑-3-硫醇(3.60g,8.52mmol)在水(9ml)和乙腈(9ml)的溶液中添加亚硝酸钠(5.90g,85.19mmol)，随后在0℃下滴加1m硝酸(41.0ml,41.00mmol)。添加后，将混合物在20℃下再搅拌1h并通过添加饱和nahco3水溶液(100ml)淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至5％)纯化，得到3-(2-(3-溴苯基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(3.3g,99％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝398.1。
[0800]
如下制备第八中间体1-(3-溴苯基)-2-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)乙醇。在20℃下，向[1-(3-溴苯基)-2-(4-甲基-1,2,4-三唑-3-基)乙氧基]-叔丁基-二甲基-硅烷(3.3g,8.45mmol)在四氢呋喃(80ml)的混合物中添加四丁基氟化铵(1m在四氢呋喃中，12.68ml,12.68mmol)。将混合物搅拌1h并用水(100ml)稀释。将所得混合物用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。将合并的有机层用盐水(2x55ml)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至100％)纯化，得到1-(3-溴苯基)-2-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)乙醇(2.30g,96％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝282.1。
[0801]
如下制备第九中间体2-(3-(1-羟基-2-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)乙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。将碳酸铯(346.5mg,1.06mmol)、1-(3-溴苯基)-2-(4-甲基-1,2,4-三唑-3-基)乙醇(100.0mg,0.35mmol)、碘化铜(i)(13.5mg,0.07mmol)、4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(89.1mg,0.44mmol)和n1,n
2-二甲基乙烷-1,2-二胺(6.3mg,0.07mmol)在1,4-二噁烷(5ml)中的混合物在氮气保护下在110℃下加热12h。冷却后，将反应物用水
(15ml)稀释并用乙酸乙酯(3x15ml)萃取。将合并的有机层用盐水(2x15ml)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过制备型tlc(溶剂梯度：10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到2-[3-[1-羟基-2-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)乙基]苯基]-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(28.0mg，20％收率)，为棕色固体。lcms[m h]
＝403.1。
[0802]
在18℃下，向第九中间体2-[3-[1-羟基-2-(4-甲基-1，2，4-三唑-3-基)乙基]苯基]-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(27.0mg，0.07mmol)在二氯甲烷(1ml)的混合物中添加dast(16.2mg，0.10mmol)。将混合物搅拌1h，并通过添加饱和nahco3水溶液(5ml)淬灭。将溶液用二氯甲烷(3x5ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过rp-hplc(水(0.05％nh3h2o 10mm nh4hco3)-acn 27％至57％)纯化，得到2-[3-[1-氟-2-(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)乙基]苯基]-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(化合物14)(2.8mg，10％收率)，为淡黄色固体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)：δ8.34(s，1h)，8.11(d，j＝8.0hz，1h)，8.00-7.90(m，3h)，7.80-7.78(m，1h)，7.53-7.49(m，1h)，7.28-7.26(m，1h)，6.03-5.88(m，1h)，5.20(s，2h)，3.63(s，3h)，3.58-3.44(m，2h)。lcms[m h]
或[m-h]-：405.1.
[0803]
实例30：化合物15
[0804]
化合物15可以根据图11的方案29来合成。
[0805][0806]
如下制备第一中间体2-(2-(3-硝基苯基)-1，3-二硫杂环戊烷-2-基)乙酸乙酯。将3-(3-硝基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(2.0g，8.43mmol)、乙烷-1，2-二硫醇(2.8g，30.15mmol)和对甲苯磺酸(290.4mg，1.69mmol)在甲苯(40.0ml)中的溶液在120℃下搅拌3小时。将混合物浓缩，并且将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至2.5％)纯化，得到2-[2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基]乙酸乙酯(1.0g,37.8％收率)，为淡黄色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.64(s,1h),8.11-8.08(m,2h),7.49(t,j＝8hz,1h),4.02-4.00(m,2h),3.55(s,2h),3.45-3.32(m,4h),1.14(t,j＝7.2hz,3h)。
[0807]
如下制备第二中间体2-(2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)乙酰肼。向2-[2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基]乙酸乙酯(1.0g,3.19mmol)在甲醇(20.0ml)的溶液中添加一水合肼(3.0ml,52.0mmol)，然后将反应混合物在80℃下加热12h。将混合物浓缩，得到粗品2-[2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基]乙酰肼(900.0mg,94.2％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝300.1。
[0808]
如下制备第三中间体n-甲基-2-(2-(2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)乙酰基)肼-1-硫代甲酰胺。在25℃下，向2-[2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基]乙酰肼(900.0mg,3.01mmol)在四氢呋喃(25.0ml)的混合物中添加异硫氰酸甲酯(439.6mg,6.01mmol)，并搅拌4小时。将混合物浓缩，得到粗品n-甲基-2-(2-(2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)乙酰基)肼硫代甲酰胺(1.0g,89.3％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝
373.0。
[0809]
如下制备第四中间体4-甲基-5-((2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-硫醇。将n-甲基-2-(2-(2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)乙酰基)肼硫代甲酰胺(1.0g,2.68mmol)在1m氢氧化钠(12.0ml,12mmol)中的混合物在25℃下搅拌1h，并用水(40.0ml)稀释，然后通过添加1m hcl溶液调节至ph＝5。通过过滤收集形成的固体并干燥，得到粗品4-甲基-5-((2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-硫醇(760.0mg,79.9％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝355.0。
[0810]
如下制备第五中间体4-甲基-3-((2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)甲基)-4h-1,2,4-三唑。向4-甲基-5-((2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-硫醇(740.0mg,2.09mmol)在水(2.0ml)和乙腈(4.0ml)的溶液中添加亚硝酸钠(1.40g,20.88mmol)，随后在0℃下滴加1m硝酸(20.9ml,20.90mmol)。添加后，将混合物在20℃下再搅拌1h并通过添加饱和nahco3水溶液(20ml)淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3x80ml)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至5％)纯化，得到4-甲基-3-((2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)甲基)-4h-1,2,4-三唑(430.0mg,63.9％收率)，为黄色固体。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.63-8.61(m,1h),8.14-8.11(m,1h),8.04
–
7.99(m,1h),7.48(t,j＝8.0hz,1h),3.83(s,2h),3.49(s,3h),3.41-3.38(m,2h),3.32-3.29(m,2h)。
[0811]
如下制备第六中间体3-(2,2-二氟-2-(3-硝基苯基)乙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。将1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(532.1mg,1.86mmol)在无水二氯甲烷(5.0ml)中的溶液冷却至-70℃。在低于-65℃的温度下滴加氟化氢吡啶(0.48ml,3.72mmol,70％hf)，并将混合物在-70℃下搅拌30min。滴加4-甲基-3-((2-(3-硝基苯基)-1,3-二硫杂环戊烷-2-基)甲基)-4h-1,2,4-三唑(150.0mg,0.47mmol)在二氯甲烷(1.0ml)中的溶液，并将混合物在-70℃下搅拌1h。将混合物倒入含有39％nahso3(10.0ml)溶液的2m氢氧化钠(10.0ml)中。将水层用二氯甲烷(2
×
10ml)萃取，将有机相合并，并用盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至5％)纯化，得到3-(2,2-二氟-2-(3-硝基苯基)乙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(70mg,56.1％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝269.1。
[0812]
如下制备第七中间体3-(1,1-二氟-2-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)乙基)苯胺。向3-(2,2-二氟-2-(3-硝基苯基)乙基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(70.0mg,0.26mmol)在甲醇(3.0ml)的混合物中添加pd/c(27.8mg,0.03mmol)(10％在碳上)，将混合物在h2(45psi)下在20℃下搅拌12小时。将混合物过滤，并且将滤液减压浓缩，得到3-(1,1-二氟-2-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)乙基)苯胺(50.0mg,80.4％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝239.1。
[0813]
最后，在0℃下，向2-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(wo 2019148005,62.4mg,0.21mmol)和3-(1,1-二氟-2-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)乙基)苯胺(50.0mg,0.21mmol)在乙腈(2.2ml)和水(0.7ml)的混合物中添加硝酸银(53.5mg,0.31mmol)溶液，将混合物在25℃下搅拌16h并过滤。在减压条件下浓缩滤液。将残余物通过rp-hplc(水(0.05％nh3h2o 10mm nh4hco3)-acn 40％至70％)纯化，得到2-(3-(1,1-二氟-2-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)乙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(化合物15)(15.68mg,17.5％收率)，为黄色油状物。1h nmr(400mhz,甲醇-d4):δ8.43(s,1h),8.13-8.09(m,2h),
7.99(d,j＝7.6hz,2h),7.79(d,j＝7.6hz,1h),7.56(t,j＝8hz,1h),7.34(d,j＝8.0hz,1h),5.21(s,2h)3.89(t,j＝15.2hz,2h),3.64(s,3h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
:423.1.
[0814]
实例31：化合物17
[0815]
化合物17，2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮可以根据图12的方案30来合成。
[0816][0817]
如下制备中间体2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛。在0℃下，向2-(溴甲基)-5-甲酰基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(如wo 2019/148005中合成；385.5mg,1.19mmol)和3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺(330.0mg,1.19mmol)在乙腈(6ml)和水(3ml)的混合物中添加硝酸银(241.7mg,1.42mmol)在水(0.2ml)中的溶液，将混合物在25℃下搅拌16h并过滤。在减压条件下浓缩滤液。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(500.0mg,86％收率)，为黄色油状物。lcms[m h]
＝491.2。
[0818]
向3-甲基氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(50.4mg,0.41mmol)和三乙胺(41.3mg,0.41mmol)在甲醇(5ml)的溶液中添加纯化的中间体2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(50.0mg,0.10mmol)。将混合物在微波照射下在100℃下加热1分钟并冷却至室温。然后向混合物中添加氰基硼氢化钠(11.5mg,0.18mmol)，并在微波照射下在80℃下再加热45分钟。将反应物用1m hcl溶液淬灭，并且通过添加饱和nahco3溶液将所得溶液调节至ph＝7。将混合物用二氯甲烷(3x10ml)萃取。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过rp-hplc(22-52％乙腈/0.05％nh4oh/水)纯化，得到2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(化合物17)(13.2mg,22％收率)，为白色固体，其特征如下。1h nmr(400mhz,甲醇-d4):δ8.18(s,1h),8.03(s,1h),7.92(s,1h),7.76-7.73(m,1h),7.48(s,1h),7.40(t,j＝8.0hz,1h),6.84(d,j＝7.6hz,1h),5.09(s,2h)，3.87(s，2h)，3.37-3.34(m，4h)，3.31-3.24(m，2h)，3.15(d，j＝8.4hz，2h)，3.06-3.02(m，2h)，2.78(s，3h)，1.49(s，3h)。lcms[m h]
或[m-h]-：562.1.
[0819]
实例32：化合物27和化合物28
[0820]
化合物27和28可以根据图13的方案31来合成。
[0821][0822]
向微波小瓶中装入含2-(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(中间体k，方案11，80mg，0.175mmol)和5-氮杂螺[2.4]庚烷盐酸盐(70mg，0.524mmol)的甲醇(1.75ml)。添加三乙胺(71μl，0.506mmol)并且将反应物在微波烘箱中在100℃下加热1min。将反应物冷却至室温并置于氮气下，然后添加氰基硼氢化钠(45mg，0.716mmol)。将反应物在微波烘箱中在100℃下加热30分钟。添加几滴1n hcl，并且将反应混合物用饱和碳酸氢钠(2ml)碱化。将产物用含40％iproh的chcl3(3x2ml)萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵，ph＝4)纯化。在手性分离(sfc：柱：lux cel-4，10x250mm 5um，模式：等度，流动相：60％ipa，40％超临界co2，流速：10ml/min，背压：150巴，柱温：40℃，运行时间(min)：10)后，获得期望的产物并表征如下。
[0823]
(r)-6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(12mg，58％收率)(27)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.36(s，1h)，7.96(d，j＝19.0hz，2h)，7.87-7.70(m，2h)，7.35(t，j＝7.9hz，1h)，7.10(d，j＝7.8hz，1h)，5.78(d，j＝44.5hz，1h)，5.11(q，j＝17.2hz，2h)，3.80(s，2h)，3.22(s，3h)，2.70(t，j＝6.8hz，2h)，2.45(s，2h)，1.77(t，j＝6.8hz，2h)，1.28-1.16(m，2h)，1.12-0.96(m，2h)，0.50(d，j＝3.8hz，4h)。lcms[m h]
或[m-h]-：540.3.
[0824]
(s)-6-(5-氮杂螺[2.4]庚-5-基甲基)-2-(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(12mg，58％收率)。(28)1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.36(s，1h)，7.97(d，j＝19.3hz，2h)，7.84(d，j＝9.6hz，1h)，7.75(s，1h)，7.35(t，j＝7.9hz，1h)，7.10(d，j＝7.7hz，1h)，5.79(d，j＝44.5hz，1h)，5.22-5.02(m，2h)，3.80(s，2h)，3.22(s，1h)，2.70(t，j＝6.8hz，2h)，2.45(s，2h)，1.77(t，j＝6.9hz，2h)，1.23(s，2h)，1.10-0.94(m，2h)，0.50(d，j＝3.8hz，4h)。lcms[m h]
或[m-h]-：540.3.
[0825]
实例33：化合物29和化合物30
[0826]
化合物29和30可以根据图14的方案32来合成。
[0827][0828]
使用与实例37类似的化学方法来制备化合物29和30。在手性分离(sfc：柱：lux cel-4，10x250mm 5um；模式：等度；流动相：60％meoh-0.1％nh4oh，40％超临界co2；流速：10ml/min；背压：150巴；柱温：40℃；运行时间：7min，rt1＝3.81min，rt2＝5.66min)，获得期
望的产物并表征如下。
[0829]
(s)-2-(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-6-((3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(29)(14mg，12％收率)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.36(s，1h)，7.98-7.71(m，4h)，7.34(t，j＝8.0hz，1h)，7.09(d，j＝7.8hz，1h)，5.78(d，j＝44.5hz，1h)，5.19-5.03(m，2h)，3.79(s，2h)，3.23-3.17(m，5h)，2.96(d，j＝7.5hz，2h)，1.38(s，3h)，1.27-1.18(m，2h)，1.12-0.99(m，2h)。lcms[m h]
或[m-h]-：530.3.
[0830]
(r)-2-(3-(1-(氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-6-((3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(22mg，19％收率)。(30)1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.36(s，1h)，7.97-7.68(m，4h)，7.34(t，j＝7.9hz，1h)，7.09(d，j＝7.7hz，1h)，5.78(d，j＝44.5hz，1h)，5.18-5.00(m，2h)，3.79(s，2h)，3.24-3.17(m，5h)，2.96(d，j＝7.5hz，2h)，1.38(s，3h)，1.28-1.10(m，2h)，1.10-1.01(m，2h)。lcms[m h]
或[m-h]-：530.3.
[0831]
实例34：化合物31、化合物32、化合物33和化合物34
[0832]
化合物31、32、33和34(立体异构体)可以根据图15的方案33来合成。
[0833][0834]
向微波小瓶中装入含2-[3-[1，2-二氟-1-甲基-2-(4-甲基-1，2，4-三唑-3-基)乙基]苯基]-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(中间体j，方案10，图6j，67.0mg，0.14mmol)和3-氟-3-甲基-氮杂环丁烷盐酸盐(91.7mg，0.74mmol)的甲醇(1.44ml)。添加三乙胺(0.10ml，0.71mmol)并且将反应物在微波烘箱中在100℃下加热1min。将反应物冷却至室温并置于氮气下，然后添加氰基硼氢化钠(16.3mg，0.26mmol)。将反应物在微波烘箱中在100℃下加热30分钟。添加几滴1n hcl，并且将反应混合物用饱和nahco3(2ml)碱化。将产物用含40％iproh的chcl3(3x2ml)萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵，ph＝4)纯化。在手性分离[第一遍：分析型柱：chiralpak ib，250mm x 4.6mm id，5μm；流动相：10:10:80meoh:etoh:己烷；等度流速：0.8ml/min，(压力为44.5巴)；柱温：约26℃；运行时间：20min.]第二遍：[分析型柱：chiralpak ia，250mm x 4.6mm id，5μm；流动相：15:15:70 meoh:etoh:己烷；等度流速：0.8ml/min，(压力为57巴)；柱温：约26℃；运行时间：25min.]后，获得期望的产物。
6-(((r)-3-甲氧基吡咯烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(20mg，15％收率)，(47)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.35(s，1h)，7.98(s，1h)，7.96-7.90(m，2h)，7.56(s，1h)，7.38(t，j＝8.0hz，1h)，6.97(d，j＝7.7hz，1h)，6.28(d，j＝45.8hz，1h)，5.37(d，j＝6.7hz，1h)，5.22(d，j＝6.1hz，1h)，5.18-5.03(m，3h)，4.83(dd，j＝6.0，4.0hz，1h)，3.96-3.85(m，1h)，3.83-3.70(m，2h)，3.18(s，3h)，3.16(s，3h)，2.69(dd，j＝10.0，6.2hz，1h)，2.61(dd，j＝14.9，7.8hz，1h)，2.46-2.39(m，1h)，2.07-1.95(m，1h)，1.74-1.62(m，1h)。lcms[m h]
或[m-h]-：560.3.
[0844]
2-(3-(3-((s)-氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((r)-3-甲氧基吡咯烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(24mg，18％收率)，(48)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.35(s，1h)，7.98(s，1h)，7.96-7.90(m，2h)，7.55(s，1h)，7.38(t，j＝8.0hz，1h)，6.97(d，j＝7.8hz，1h)，6.28(d，j＝45.8hz，1h)，5.37(d，j＝6.6hz，1h)，5.21(d，j＝6.1hz，1h)，5.18-5.03(m，3h)，4.83(dd，j＝6.0，4.1hz，1h)，3.99-3.84(m，1h)，3.85-3.72(m，2h)，3.18(s，3h)，3.16(s，3h)，2.69(dd，j＝10.0，6.2hz，1h)，2.61(dd，j＝15.0，7.8hz，2h)，2.46-2.37(m，1h)，2.12-1.93(m，1h)，1.76-1.62(m，1h)。lcms[m h]
或[m-h]-：560.3.
[0845]
实例36：化合物49
[0846]
化合物49可以根据图16的方案34来合成。
[0847][0848]
如下合成第一中间体2-(3-(1-(羟基(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。将(1-(3-氨基苯基)环丙基)(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇(方案4的中间体，图6d；460mg,1.88mmol)和2-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(559mg,1.88mmol)在乙腈(15ml)和水(7.5ml)中的混合物冷却至0℃，然后滴加硝酸银(416mg,2.45mmol)在水(7.5ml)中的溶液。将反应物在室温下搅拌18h。添加饱和碳酸钠溶液，直到ph达到约9。将混合物用甲醇(25ml)稀释，经硅藻土(用300ml meoh洗涤)过滤，并且浓缩滤液以除去甲醇。将含水残余物用4:1 chcl3/meoh(50ml)稀释并分离各层。将有机相用4:1 chcl3/meoh(4x50ml)萃取。将有机相合并，用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(2-10％甲醇/ch2cl2)纯化，得到2-(3-(1-(羟基(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(402mg,50％)。lcms(esi)m/z:429.1[m h]
。
[0849]
如下制备第二中间体2-(3-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-羰基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。在室温下，将dmp(796mg,1.88mmol)一次性添加到2-(3-(1-(羟基(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(402mg,0.938mmol)在dcm(19ml)的溶液中。将所得混合物在相同温度下搅拌20h。将反应物用饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和硫代硫酸钠水溶液(5ml)淬灭并搅拌5min。将反应物用4:1 chcl3/ipa(20ml)稀释。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa(3x20ml)萃取，将合并的有
机相经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到2-(3-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-羰基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(412mg,100％收率)。lcms(esi)m/z:427.2[m h]
。
[0850]
在最后一步中，如下获得化合物49。在0℃下，将含50％(双-(2-甲氧基乙基)氨基)三氟化硫的phme(1.56ml,3.52mmol)添加到2-(3-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-羰基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(100mg,0.230mmol)中。使反应物升温至室温，并在55℃下搅拌24h。将反应物在0℃下用饱和碳酸钾水溶液小心地淬灭，直到达到ph 8。将混合物用4:1 chcl3/ipa(25ml)稀释。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa(2x25ml)萃取，将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型hplc纯化，得到不够纯的产物。
[0851]
将产物通过快速柱色谱法(0-4％梯度的meoh/dcm)进一步纯化，得到2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丙基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(21mg,20％)，(49)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.50(s,1h),8.08(d,j＝7.6hz,1h),8.05(d,j＝7.7hz,1h),7.90(s,1h),7.85
–
7.78(m,2h),7.37(t,j＝7.9hz,1h),7.17(d,j＝7.6hz,1h),5.15(s,2h),3.38(s,3h),1.43(dd,j＝5.1,6.8hz,2h),1.18
–
1.13(m,2h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝449.2。
[0852]
实例37：化合物50
[0853]
化合物50，(
±
)-2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(吡咯烷-3-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯可以根据图17的方案35来合成。
[0854][0855]
如下制备第一中间体3-(3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。向叔丁基-溴-1-吡咯烷甲酸酯(268.0mg,1.07mmol)、6-溴-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(200.0mg,0.71mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(20ml)的混合物中添加氢氧化锂(42.7mg,1.79mmol)、ir[df(cf3)ppy]2(dtbbpy)pf6(8.0mg,0.01mmol)、三(三甲基甲硅烷基)硅烷(213.1mg,0.86mmol)。然后在20℃下，在手套箱中，将氯化镍(ii)乙二醇二甲醚络合物(15.7mg,0.07mmol)和4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶(28.7mg,0.11mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(2ml)中的溶液添加到混合物溶液中。将反应混合物在lumidox screen kit下在20℃下搅拌16h。将反应混合物用水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(3x20ml)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物通过rp-hplc(水(0.2％甲酸)-acn 43％至73％)纯化，得到3-(3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(82mg,31％收率)，为白色固体。lcms[m h-56]
＝315.0。
[0856]
如下制备第二中间体3-(2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。在氮气
下，将3-[[3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基]甲基]-4-甲基-1,2,4-三唑(如wo2019148005中所示合成；61.0mg,0.20mmol)、3-[3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(80.6mg,0.22mmol)、碳酸铯(193.48mg,0.59mmol)、(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]甲磺酸钯(ii)(49.7mg,0.06mmol)在1,4-二噁烷(3ml)中的混合物在110℃下搅拌16h。冷却后，将反应混合物过滤。在减压条件下浓缩滤液。将残余物通过制备型tlc(流动相：12％甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到3-(2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(72mg,61％收率)，为淡黄色固体。lcms[m h] ＝598.0。
[0857]
然后如下获得化合物50。向3-[2-[3-[3-[(4-甲基-1,2,4-三唑-3-基)甲基]氧杂环丁烷-3-基]苯基]-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(72mg,0.12mmol)在二氯甲烷(5ml)的混合物中添加三氟乙酸(0.5ml,0.50mmol)，将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物用nh4oh(1ml)淬灭，并减压浓缩至干。将残余物通过rp-hplc(水(0.2％甲酸)-acn 7％至37％)纯化，得到2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(吡咯烷-3-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯(18mg,27.5％收率)，为白色固体(50)，外消旋物。1h nmr(400mhz,甲醇-d4):δ8.39(br s,1h),8.16(s,1h),8.05(s,1h),7.95(s,1h),7.74(dd,j＝1.2,7.6hz,1h),7.40(t,j＝7.6hz,1h),7.35(t,j＝1.6hz,1h),6.78(d,j＝7.2hz,1h),5.08-5.03(m,6h),4.60(br s,1h),3.83-3.74(m,2h),3.64-3.58(m,3h),3.45-3.37(m,1h),2.88(s,3h),2.59-2.54(m,1h),2.23-2.12(m,1h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝498.1。
[0858]
实例38：化合物51和52
[0859]
化合物51和52可以根据图18的方案36来合成。
[0860]
向2-(3-(3,3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(中间体o，方案15，图6o；100.0mg,0.2mmol)和3-甲基氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(48.6mg,0.4mmol)在甲醇(3ml)的溶液中添加三乙胺(32.9μl,0.2mmol)。将混合物在微波照射下在100℃下搅拌1分钟。然后向混合物中添加氰基硼氢化钠(24.7mg,0.4mmol)，并在微波照射下在80℃下再加热45分钟。将反应混合物用1m hcl水溶液(2ml)淬灭，并用饱和nahco3水溶液调节至ph＝6～7。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物通过rp-hplc(35％至65％acn/(0.05％nh3h2o 10mm nh4hco3/水中))纯化，得到2-(3-(3,3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(24mg,21.1％收率)，为白色固体。
[0861]
上述外消旋物(24mg,0.04mmol)通过手性sfc(柱＝daicel chiralcel od；柱尺寸＝250mm
×
30mm
×
10μm；检测波长＝220nm；流速＝70ml/min；运行时间＝4.0min；柱温＝25℃)用0.1％氢氧化铵-30％乙醇-二氧化碳)进一步纯化，得到化合物51和52，其特征如下。
[0862]
(r)-2-(3-(3,3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1，保留时间＝1.391min)(8.92mg,44.2％收率)，为白色固体，(51)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.22(s,1h),8.00(s,1h),7.90(s,1h),7.75(dd,j＝1.6,8.4hz,1h),7.57(br s,1h),7.40(t,j＝8.0hz,1h),6.96(d,j＝8.0hz,1h),6.04(d,j＝44.8hz,1h),5.07(s,2h),3.86(s,2h),
3.62-3.44(m,2h),3.34(d,j＝8.8hz,2h),3.20-3.05(m,4h),2.90(s,3h),1.45(s,3h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝580.1。
[0863]
(s)-2-(3-(3,3-二氟-1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2，保留时间＝1.579min)(3mg,15％收率)，为白色固体，(52)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.23(s,1h),8.00(s,1h),7.90(s,1h),7.75(dd,j＝1.2,8.4hz,1h),7.57(br s,1h),7.40(t,j＝8.0hz,1h),6.96(d,j＝7.6hz,1h),6.04(d,j＝44hz,1h),5.07(s,2h),3.85(s,2h),3.63-3.47(m,2h),3.34(d,j＝8.0hz,2h),3.17-3.05(m,4h),2.91(s,3h),1.46(s,3h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝580.1。
[0864]
实例39：化合物53和54
[0865]
化合物53和54可以根据图19的方案37来合成。
[0866][0867]
如下制备中间体2,6-(环丙基(羟基)甲基)-2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。在-78℃下，向(r)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛的混合物(中间体i，方案9，图6i；200.0mg,0.42mmol)在四氢呋喃(3.5ml)的混合物中添加环丙基溴化镁(0.5m在四氢呋喃中，1.69ml,0.84mmol)。添加后，将所得混合物在-78℃下搅拌2h，并通过添加饱和nh4cl水溶液(10ml)淬灭。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释，用盐水(30ml)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至25％)纯化，得到6-(环丙基(羟基)甲基)-2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(200.0mg,91.9％收率)，为黄色油状物。lcms：[m h]
＝517.0。
[0868]
如下获得第二中间体(r)-6-(环丙烷羰基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向2-碘氧基苯甲酸(542.2mg,1.94mmol)在乙酸乙酯(3ml)的搅拌溶液中添加6-(环丙基(羟基)甲基)-2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(200.0mg,0.39mmol)。将反应物在75℃下搅拌5h并过滤。浓缩滤液，得到直接用于下一步的粗品(r)-6-(环丙烷羰基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(120mg,60.2％收率)，为白色固体。lcms：[m h]
＝515.0。
[0869]
向(r)-6-(环丙烷羰基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(70.0mg,0.14mmol)和乙酸铵(104.9mg,1.36mmol)在甲醇(2ml)的溶液中添加氰基硼氢化钠(21.4mg,0.34mmol)。将混合物加热至70℃并搅拌12h。将反应物用1m hcl溶液淬灭，并通过添加饱和nahco3溶液调节至ph＝7。将
所得溶液用二氯甲烷(3x20ml)萃取。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将所得残余物通过rp-hplc(35％至60％acn/(0.05％nh3h2o 10mm nh4hco3/水))纯化，得到6-(氨基(环丙基)甲基)-2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟-甲基)异吲哚啉-1-酮(21mg,29％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝516.3。
[0870]
将上述外消旋物通过手性sfc(柱＝(ss)whelk-01；柱尺寸＝250mm
×
30mm
×
5μm；检测波长＝220nm，流速＝80ml/min；运行时间＝7min；柱温＝40℃)用0.1％氢氧化铵-35％乙醇-二氧化碳)进一步纯化，得到化合物53和54。
[0871]
6-((s)-氨基(环丙基)甲基)-2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1，保留时间＝3.445min)(3.46mg,15.6％收率)，为白色固体，(53)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.15(br s,1h),8.01(s,1h),7.91(s,1h),7.64(d,j＝8.0hz,1h),7.47(br s,1h),7.38(t,j＝8.0hz,1h),6.78(d,j＝7.6hz,1h),6.47(d,j＝46.0hz,1h),5.34-5.28(m,2h),5.25-5.23(m,1h),5.02-4.91(m,3h),3.42-3.39(m,1h),3.03(d,j＝1.6hz,3h),1.13-1.09(m,1h),0.72-0.68(m,1h),0.58-0.55(m,1h),0.46-0.42(m,1h),0.42-0.34(m,1h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝516.1。
[0872]
6-((r)-氨基(环丙基)甲基)-2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2，保留时间＝4.513min)(4.46mg,19.1％收率)，为白色固体，(54)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.19(br s,1h),8.01(s,1h),7.93(s,1h),7.63(d,j＝7.6hz,1h),7.47(br s,1h),7.38(t,j＝8.0hz,1h),6.79(d,j＝7.6hz,1h),6.47(d,j＝46hz,1h),5.34-5.28(m,2h),5.25-5.23(m,1h),5.02-4.90(m,3h),3.47-3.42(m,1h),3.03(d,j＝1.6hz,3h),1.19-1.17(m,1h),0.75-0.69(m,1h),0.61-0.55(m,1h),0.50-0.47(m,1h),0.41-0.35(m,1h)).lcms[m h]
或[m-h]
–
＝516.0。
[0873]
实例40：化合物55
[0874]
化合物55可以根据图20的方案38来合成。
[0875][0876]
如下制备第一中间体(r)-6-((5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲基)-2-(6-氯-4-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-2-基)-吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向(r)-2,6-二氯-4-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-2-基)吡啶(317.2mg,1.17mmol)和6-((5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(如wo2019148005中所示合成，在实例ab，第344页；330.0mg,1.06mmol)在1,4-二噁烷(15ml)的混合物中添加乙酸钯(ii)(47.7mg,0.21mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(123.1mg,0.21mmol)和磷酸钾(451.5mg,2.13mmol)。将混合物在氮气下在100℃下搅拌16h。冷却至室温后，将反应物减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到(r)-6-((5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲基)-2-(6-氯-4-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)
丙-2-基)-吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(350mg,60.4％收率)，为淡黄色油状物。lcms：[m h]
＝545.1。
[0877]
将(r)-6-((5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲基)-2-(6-氯-4-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-2-基)吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(130.0mg,0.24mmol)、异丙胺(0.04ml,0.48mmol)、(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]甲磺酸钯(ii)(27.9mg,0.04mmol)、碳酸铯(233.16mg,0.72mmol)在甲苯(3ml)中的混合物在氮气下在110℃下搅拌16h并减压浓缩至干，得到化合物55。
[0878]
将残余物通过rp-hplc(29％至59％acn/0.2％甲酸/水)纯化，得到(r)-6-((5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲基)-2-(6-(异丙基氨基)-4-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-2-基)吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯(13.8mg,9.2％收率)，为黄色固体，(55)，其特征如下。lcms：[m h]
＝568.1。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.35(s,1h),8.06(s,1h),7.99(s,1h),7.98(s,1h),7.79(s,1h),5.96(s,1h),5.25-5.07(m,2h),3.98(s,2h),3.89-3.83(m,1h),3.48(s,3h),3.37-3.32(m,1h),3.07-2.97(m,4h),2.72(s,2h),1.94-1.90(m,2h),1.41(d,j＝6.4hz,3h),1.25-1.22(m,6h),0.62(s,4h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝568.1。
[0879]
实例41：化合物56
[0880]
化合物56可以根据图21的方案39来合成。
[0881][0882]
将(r)-6-((5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲基)-2-(6-氯-4-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-2-基)吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(实例40中的第一中间体)(100.0mg,0.18mmol)、乙醇(0.12ml,1.83mmol)、甲磺酸基(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(27.9mg,0.04mmol)、碳酸铯(179.3mg,0.55mmol)在甲苯(1ml)中的混合物在微波照射下在110℃下搅拌1h，冷却至室温后，将反应混合物减压浓缩至干。
[0883]
将残余物通过rp-hplc(22％至52％acn/0.2％甲酸/水)纯化，得到(r)-6-((5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲基)-2-(6-乙氧基-4-(1-(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙-2-基)吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯(17.78mg,16.6％收率)，为黄色固体，(56)。lcms：[m h]
＝555.2。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(s,1h),8.09(s,1h),8.06(s,1h),8.02(s,2h),6.41(s,1h),5.27-5.15(m,2h),4.35(q,j＝7.2hz,2h),4.08(s,2h),3.54(s,3h),3.48-3.40(m,1h),3.12-3.05(m,4h),2.81(s,2h),1.97-1.93(m,2h),1.46-1.40(m,6h),0.64(s,4h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝555.2。
[0884]
实例42：化合物57和58
[0885]
化合物57和58可以根据图22的方案40来合成。
[0886][0887]
如下制备第一中间体3-((2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。向小瓶中装入6-溴-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体h，100mg,0.190mmol)、2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸(123mg,0.571mmol)、ir[df(cf3)ppy]2(dtbbpy)pf6(10.7mg,0.0095mmol)、氯化镍(ii)乙二醇二甲醚络合物(2.1mg,0.0095mmol)、4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶(2.6mg,0.0095mmol)和碳酸铯(125mg,0.381mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的dmso(10ml)。将氮气鼓入反应混合物中持续10min，并且将小瓶密封。将反应物在蓝色led光照射(100％强度)下搅拌2h。将反应混合物用etoac(50ml)和水(50ml)稀释，并且分离各层。将水相用etoac(50ml)萃取，将合并的有机相用水洗涤，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-10％甲醇/ch2cl2)纯化，得到3-((2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(22mg,19％)。lcms(esi)m/z:616.3[m h]
。
[0888]
在室温下，将三氟乙酸(0.40ml)添加到3-((2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(31mg,0.0097mmol)在dcm(4.0ml)的溶液中。将所得混合物搅拌1h，然后添加三乙胺(1ml)。将所得混合物减压浓缩。将残余物通过c18硅胶色谱法(10-60％乙腈/甲酸铵，ph＝3.8)纯化。在手性分离(sfc：柱：lux cel-4，10x250mm 5um，模式：等度，流动相：60％meoh 0.1％nh4oh，40％超临界co2，流速：10ml/min，背压：150巴，柱温：40℃，运行时间(min)：14)后，获得期望的产物并表征如下。
[0889]
(r)-6-(氮杂环丁烷-3-基甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(5mg,26％收率)，(57)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)8.32(s,1h),7.95-7.82(m,3h),7.52(s,1h),7.35(t,j＝8.0hz,1h),6.94(d,j＝7.8hz,1h),6.25(d,j＝45.8hz,1h),5.34(d,j＝6.8hz,1h),5.19(d,j＝6.2hz,1h),5.07(dd,j＝15.7,8.5hz,3h),4.84-4.76(m,1h),3.43-3.38(m,2h),3.15(s,3h),3.04(d,j＝7.8hz,2h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝516.4。
[0890]
(s)-6-(氮杂环丁烷-3-基甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(5mg,26％收率)，(58)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)8.32(s,1h),7.95-7.82(m,3h),7.52(s,1h),7.35(t,j＝8.0hz,1h),6.94(d,j＝7.8hz,1h),6.25(d,j＝45.8hz,1h),5.34(d,j＝6.8hz,1h),5.19(d,j＝6.2hz,1h),5.07(dd,j＝15.7,8.5hz,3h),4.84-4.76(m,1h),3.43-3.38(m,2h),3.15(s,3h),3.04(d,j＝7.8hz,2h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝516.4。
[0891]
实例43：化合物59
[0892]
化合物59可以根据图23的方案41来合成。
[0893][0894]
如下制备第一中间体3-甲酰基-2-甲基苯甲酸甲酯。在室温下，向3-氰基-2-甲基苯甲酸甲酯(500mg,2.85mmol)、水(3ml)、吡啶(6ml)和乙酸(3ml)的混合物中添加次磷酸钠一水合物(2.37g,22.8mmol)，随后添加-镍(147mg,1.71mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用etoac(50ml)和水(50ml)稀释并且分离各层。将水相用etoac(50ml)萃取，将合并的有机相用1n hcl洗涤，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发，得到3-甲酰基-2-甲基苯甲酸甲酯(500mg,98％)。
[0895]
如下制备第二中间体3-(二氟甲基)-2-甲基苯甲酸甲酯。在0℃下向3-甲酰基-2-甲基-苯甲酸甲酯(250mg,1.40mmol)在dcm(5.6ml)的溶液中添加dast(0.93ml,7.02mmol)。将反应物在室温下搅拌2天。将反应混合物用dcm(10ml)和水(10ml)稀释并且分离各层。将水相用dcm(10ml)萃取，将合并的有机相用饱和nahco3水溶液洗涤，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-40％etoac/庚烷)纯化，得到3-(二氟甲基)-2-甲基苯甲酸甲酯(83mg,30％)。
[0896]
如下制备第三中间体2-(溴甲基)-3-(二氟甲基)苯甲酸甲酯。向3-(二氟甲基)-2-甲基-苯甲酸甲酯(80mg,0.400mmol)在四氯化碳(2.0ml)的溶液中添加n-溴代琥珀酰亚胺(78mg,0.440mmol)。将反应物加热至85℃持续5分钟，然后添加aibn(20mg,0.120mmol)。将反应物在85℃下搅拌4h并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-5％etoac/庚烷)纯化，得到2-(溴甲基)-3-(二氟甲基)苯甲酸甲酯(97mg,87％)。
[0897]
最后，为了形成化合物59，将3-[3-[(r)-氟-(4-甲基-1,2,4-三唑-3-基)甲基]氧杂环丁烷-3-基]苯胺(如wo2019/148005中合成，90mg,0.343mmol)和2-(溴甲基)-3-(二氟甲基)苯甲酸甲酯(96mg,0.343mmol)在乙腈(2.3ml)和水(1.1ml)中的混合物冷却至0℃，然后滴加硝酸银(76mg,0.446mmol)在水(0.5ml)中的溶液。将反应物在室温下搅拌48h。添加饱和碳酸氢钠溶液，直到ph达到约8，并且将反应物用4:1 chcl3/ipa混合物(10ml)稀释。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa混合物(3x10ml)萃取，并且将合并的有机相用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。将残余物通过c18硅胶色谱法(15-50％乙腈/10mm碳酸氢铵，ph＝10)纯化，得到(r)-4-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮(30mg,20％)，(59)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.35(s,1h),7.93(t,j＝8.4hz,2h),7.87(d,j＝7.4hz,1h),7.71(t,j＝7.6hz,1h),7.58(s,1h),7.39
–
7.34(m,1h),7.29(t,j＝55.0hz,1h),6.95(d,j＝7.7hz,1h),6.28(d,j＝45.9hz,1h),5.37(d,j＝6.6hz,1h),5.21(d,j＝6.0hz,1h),5.16
–
5.01(m,3h),4.83(dd,j＝5.7,4.2hz,1h),3.19(s,3h)。lcms[m h]
或[m-h]
–
＝429.2。
[0898]
实例44：化合物187
[0899]
化合物187可以根据图24的方案42来合成。
[0900][0901]
如下合成第一中间体3-(硝基甲基)氧杂环丁烷-3-醇。在0℃下，向氧杂环丁烷-3-酮(100.0g,1.39mol)在硝基甲烷(105.2ml,1.94mol)的混合物中添加三乙胺(38.6ml,277.5mmol)，将混合物在25℃下搅拌16h。将混合物浓缩，并且将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至25％)纯化得到3-(硝基甲基)氧杂环丁烷-3-醇(130g,70％收率)，为黄色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ4.81(s,2h),4.71(d,j＝7.6hz,2h),4.65(d,j＝7.6hz,2h)。
[0902]
如下合成第二中间体3-(硝基亚甲基)氧杂环丁烷。在-60℃下，向第一中间体3-(硝基甲基)氧杂环丁烷-3-醇(30.0g,225.4mmol)在二氯甲烷(500ml)的混合物中添加甲磺酰氯(42.5ml,548.4mmol)，随后添加三乙胺(125.7ml,901.6mmol)，将混合物搅拌4h。将混合物倒入饱和nh4cl水溶液(300ml)中并用氯甲烷(3x200ml)萃取。将有机层合并并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至15％)纯化，得到3-(硝基亚甲基)氧杂环丁烷(22g,85％收率)，为黄色固体。
[0903]
如下合成第三中间体3-(3-溴苯基)-3-(硝基甲基)氧杂环丁烷。在n2气氛下，在烧瓶中将氢氧化钾水溶液(1.5m,28.7ml,43.4mmol)滴加到氯(1,5-环辛二烯)铑(i)二聚体(1.07g,2.17mmol；cas12092-47-6)中。将混合物在25℃下搅拌30min。然后在10min内，在0-10℃下添加3-溴苯基硼酸(13.09g,65.1mmol,1.5当量)在1,4-二噁烷(150ml)中的溶液，随后滴加3-(硝基亚甲基)氧杂环丁烷(5g,43.4mmol)的1,4-二噁烷(10ml)溶液。搅拌30min后，添加另一份3-溴苯基硼酸(13.09g,65.1mmol,1.5当量)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应物用水(150ml)稀释并用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至25％)纯化，得到3-(3-溴苯基)-3-(硝基甲基)氧杂环丁烷(10.6g,89.7％收率)，为黄色固体。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.44-7.38(m,1h),7.26-7.23(m,2h),7.04-7.02(m,1h),5.05(d,j＝7.2hz,2h),5.01(s,2h),4.89(d,j＝6.8hz,2h)。
[0904]
如下合成第四中间体3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛。在0℃下，将1m氢氧化钾的甲醇溶液(4.04ml,4.04mmol)在15min内滴加到3-(3-溴苯基)-3-(硝基甲基)氧杂环丁烷(1.0g,3.68mmol)的甲醇(15ml)溶液中。将所得混合物搅拌15min，然后在15min内滴加高锰酸钾(638.9mg,4.04mmol)和硫酸镁(398.1mg,3.31mmol)在水(3ml)中的溶液。将所得混合物升温至环境温度并搅拌1h。添加2-甲氧基-2-甲基丙烷(15ml)，将溶液通过硅藻土垫过滤。将滤液浓缩以除去大部分溶剂，然后添加20ml水。将溶液用乙酸乙酯(3x25ml)萃取。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至30％)纯化，得到3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(700mg,79％收率)，为
黄色固体。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ9.76(s,1h),7.49-7.47(m,1h),7.31-7.29(m,1h),7.25-7.23(m,1h),7.01-6.99(m,1h),5.13(d,j＝6.4hz,2h),4.99(d,j＝6.4hz,2h)。
[0905]
如下合成第五中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇。在氮气保护下，在-50℃下，向4-甲基-4h-1,2,4-三唑(155.1mg,1.9mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(10ml)的溶液中添加正丁基锂(0.75ml,1.9mmol,2.5m在己烷中)。将所得混合物在-50℃下搅拌1h。然后滴加3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(300.0mg,1.24mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(1ml)中的溶液。将反应混合物缓慢升温至0℃并再搅拌1h。将混合物用水(30ml)淬灭并用二氯甲烷(3x10ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(330mg,81.8％收率)，为白色固体。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.23(s,1h),7.43-7.41(m,1h),7.24-7.20(m,1h),7.14(d,j＝1.6hz,1h),6.96(d,j＝7.6hz,1h),5.31(s.1h),5.14-5.11(m,1h),5.09-5.08(m,1h),4.88(d,j＝6.4hz,1h),4.68-4.65(m,1h),3.04(s,3h)。
[0906]
如下获得一对第六中间体，对映体(r)-(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇和(s)-(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇。将(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(60g,203.6mmol)通过手性sfc(柱＝daicel chiralpak ad；柱尺寸＝250mm
×
50mm
×
10μm；检测波长＝220nm，流速＝200ml/min；运行时间＝6min；柱温＝40℃)用0.1％氢氧化铵-45％乙醇-二氧化碳)进一步纯化，得到：(r)-(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(峰1，保留时间＝3.546min)(27g,41％收率)，为白色固体和(s)-(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(峰2，保留时间＝4.351min)(27.9g,42.4％收率)，为白色固体。
[0907]
根据两种可能的方法合成第七中间体(r)-3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。在第一种方法(“a”)中，在-78℃下，向(r)-(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(27g,83.3mmol)在二氯甲烷(750ml)的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(16.51ml,124.9mmol)。将反应混合物搅拌16h。将反应物用饱和氯化铵溶液(500ml)淬灭并用二氯甲烷(1000ml)稀释。将分离的有机相用盐水(2x300ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩至干。将粗品通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至6％)纯化，得到(r)-3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(23g,84.7％收率)，为白色固体。lcms[m h]
＝325.9和327.6。
[0908]
在第二种方法(“b”)中，在-10℃下，向(s)-[3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基]-(4-甲基-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(11.0g,33.9mmol)在甲苯(300ml)和乙腈(100ml)的溶液中添加吡啶-2-磺酰氟(6.02g,37.3mmol)，随后添加1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(10.2ml,67.9mmol)。将所得混合物在15℃下搅拌16h。将反应混合物用水(500ml)稀释，并用乙酸乙酯(3x150ml)萃取。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到(r)-3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(9g,81.3％收率)，为黄色固体。lcms：[m h]
＝326.1和328.1。
[0909]1h nmr(400mhz,甲醇-d4):δ8.32(s,1h),7.47-7.45(m,1h),7.26-7.22(s,2h),
7.04(d,j＝8.0hz,1h),6.26(d,j＝45.6hz,1h),5.41(d,j＝6.8hz,1h),5.26(d,j＝6.4hz,1h),5.15-5.13(m,1h),4.95-4.92(m,1h),3.19(s,3h)。
[0910]
第八中间体(r)-3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯胺，向密封管中添加(r)-3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(15g,46.0mmol)、氧化铜(i)(3.29g,23.0mmol)、氢氧化氨(98.3ml,919.8mmol)和乙腈(78ml)。将混合物在100℃下搅拌16h。将反应混合物过滤并减压浓缩。将残余物用水(100ml)稀释，然后用二氯甲烷(5x100ml)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到直接用于下一步的(r)-3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯胺(10.0g,83％收率)，为黄色固体。lcms：[m h]
＝263.1。
[0911]
如下制备第九中间体(s)-4-(4-(溴甲基)-3-(甲氧基羰基)-5-(三氟甲基)苄基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。向(s)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(13.1g,57.5mmol)在1,2-二氯乙烷(250ml)的溶液中添加乙酸(6.0ml,104.6mmol)并搅拌10分钟。然后添加2-(溴甲基)-5-甲酰基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(17.0g,52.3mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(33.3g,156.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(100ml)稀释，并用二氯甲烷(3x100ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至20％)纯化，得到(s)-4-(4-(溴甲基)-3-(甲氧基羰基)-5-(三氟甲基)苄基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(16g,56.9％收率)，为黄色油状物。lcms：[m h]
＝537.2。
[0912]
如下制备第十中间体10，(s)-4-((2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。在0℃下，向(r)-3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯胺(7.0g,26.7mmol)和(s)-4-(4-(溴甲基)-3-(甲氧基羰基)-5-(三氟甲基)苄基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(15.8g,29.4mmol)在乙腈(300ml)的混合物中添加硝酸银(5.9g,34.7mmol)在水(100ml)中的溶液。将混合物在15℃下搅拌16h，然后过滤，并且将滤液浓缩以除去大部分溶剂。将含水残余物用二氯甲烷(3x100ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至5％)纯化，得到(s)-4-((2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(9.8g,53.5％收率)，为黄色固体。
[0913]
最后，如下获得化合物1872-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。在25℃下，向(s)-4-((2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g,1.5mmol)在二氯甲烷(30ml)的溶液中添加三氟乙酸(1.5ml,19.1mmol)。将混合物在15℃下搅拌3h，然后将混合物减压浓缩，得到2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基哌嗪-1-基)甲基)-4(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮作为直接使用的粗产物。将上述产物用甲醇(20ml)溶解，然后添加30％甲醛水溶液(1.7ml,22.4mmol)和氰基硼氢化钠(276.2mg,4.4mmol)。将反应混合物在15℃下搅拌3小时。减压浓缩混合物。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯
度0％至10％)纯化，得到2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(800mg,93.7％收率)，为白色固体。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.08(s,1h),7.90(s,1h),7.84(s,1h),7.64(d,j＝8.0hz,1h),7.49(s,1h),7.38(t,j＝8.0hz,1h),6.77(d,j＝7.6hz,1h),6.47(d,j＝46hz,1h),5.37-5.20(m,3h),5.04-4.84(m,3h),4.27(d,j＝14.0hz,1h),3.24(d,j＝13.6hz,1h),3.03(s,3h),2.78-2.65(m,2h),2.61(d,j＝11.2hz,1h),2.39-2.21(m,6h),2.17-1.93(m,1h),1.00(d,j＝6.8hz,3h),0.97(d,j＝6.8hz,3h)。
[0914]
实例45：化合物232
[0915]
化合物232((2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮))可以根据图25的方案43来合成。
[0916][0917]
向配备有搅拌棒的耐压烧瓶中装入3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(中间体p；585.5mg,1.71mmol)、(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体r；50mg,1.88mmol)、xantphos pd g3(81.2mg,0.09mmol)和碳酸铯(1.672g,5.13mmol)。将烧瓶用氮气冲洗几分钟，并通过注射器添加脱气的叔戊醇(17.1ml)。将烧瓶密封，并且将反应混合物在120℃下搅拌15h。将反应物冷却至室温，添加硅胶，并且蒸发溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法(0-8％meoh/dcm)纯化，得到第一中间体，((2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)(1-甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.118g,99％收率)。lcms(esi)m/z:660.6[m h]
[0918]
将三氟乙酸(8.5ml)添加到第一中间体(1.118g,1.69mmol)在dcm(8.5ml)的溶液中，并且将溶液在室温下搅拌30分钟。将反应混合物用甲苯稀释并浓缩至干。将粗残余物通过c18硅胶色谱法(15-40％乙腈/甲酸(0.5％水溶液)纯化。将最干净的级分合并并浓缩，然后用1n naoh溶液碱化并用chcl3:ipa(5x)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干，然后溶解在acn/水中并冻干，得到2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(634.2mg,67％收率)。lcms(esi)m/z:560.3[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.17(s,1h),8.05(s,1h),8.01(s,1h),7.92(dd,j＝8.2,1.3hz,1h),7.39(t,j＝1.7hz,1h),7.34(t,j＝8.0hz,1h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),5.09(s,2h),3.82(s,2h),3.31
–
3.20(m,4h),3.02(q,j＝14.1hz,2h),2.72(s,3h),2.03
–
1.91(m,2h),1.77
–
1.61(m,4h),1.23(s,3h)。
[0919]
实例46：化合物233和化合物234
[0920]
化合物233和234(2-(4-(1-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-((2-羟乙基)氨基)吡啶-2-基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三
氟甲基)异吲哚啉-1-酮和2-(4-(1-((s)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-((2-羟乙基)氨基)吡啶-2-基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图26的方案44来合成。
[0921][0922][0923]
第一中间体2,6-二氯-4-(1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶可以由中间体u如下获得。在室温下，向(1-(2,6-二氯吡啶-4-基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(800mg,2.55mmol)在thf(7ml)和mecn(7ml)的搅拌溶液中添加1-甲基-2,3,4,6,7,8-六氢嘧啶并[1,2-a]嘧啶(0.73ml,5.11mmol)，随后添加2-吡啶磺酰氟(0.43ml,2.81mmol)。将所得反应混合物在25℃下搅拌20h。将反应物用水(10ml)稀释，用dcm(3x50ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-5％meoh/dcm)纯化，得到2,6-二氯-4-(1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(605mg,75％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:315.1,317.0[m h]
[0924]
第二中间体2-((6-氯-4-(1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基)乙醇可以如下获得。在密封管中，以及向搅拌溶液2,6-二氯-4-(1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(64mg,0.2mmol)的1,4-二噁烷(0.41ml)溶液中添加乙醇胺(0.25ml,4.06mmol)。将所得反应混合物在80℃下搅拌72h。将反应物浓缩，并且将粗产物通过硅胶色谱法(0-5％meoh/dcm)纯化，得到2-((6-氯-4-(1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基)乙醇(60mg,87％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:340.2,342.2[m h]
[0925]
向微波小瓶中装入2-((6-氯-4-(1-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基)乙醇(60mg,0.18mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；69mg,0.19mmol)、me4tbutylxphos(8.5mg,0.02mmol)、pd2(dba)3(8.1mg,0.01mmol)和k3po4(112.4mg,0.53mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的无水叔丁醇(0.88ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌15h。将挥发物蒸发，并且将残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到外消旋混合物(50mg,43％收率)，为白色固体。
[0926]
将上述外消旋物通过手性sfc(柱＝i-amylose-1；柱尺寸＝250mm
×
10mm
×
5μm；检测波长＝310nm；流速＝10ml/min；运行时间＝15min；柱温＝40℃)用0.1％氢氧化铵-40％ipa/二氧化碳)进一步纯化，得到化合物233和化合物234)。
[0927]
2-(4-(1-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-((2-羟乙基)氨基)吡啶-2-基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1)(18.4mg,16％收率)。lcms(esi)m/z:659.2[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ
8.30(s,1h),7.95(s,1h),7.89(s,1h),7.41(s,1h),6.52(t,j＝5.5hz,1h),6.04(d,j＝44.8hz,1h),5.97(s,1h),5.10(s,2h),4.61(s,1h),4.18(d,j＝14.5hz,1h),3.51(s,2h),3.35-3.25(m,4h),3.15(s,3h),2.83
–
2.54(m,4h),2.45
–
2.37(m,1h),2.32
–
2.15(m,4h),2.12(s,3h),2.08
–
1.77(m,4h),0.91(d,j＝6.7hz,3h),0.86(d,j＝6.6hz,3h)。
[0928]
2-(4-(1-((s)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-((2-羟乙基)氨基)吡啶-2-基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2)(18.1mg,16％收率)。lcms(esi)m/z:659.2[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.27(s,1h),7.95(s,1h),7.89(s,1h),7.41(s,1h),6.52(t,j＝5.5hz,1h),6.04(d,j＝44.8hz,1h),5.97(s,1h),5.08(s,2h),4.62(s,1h),4.18(d,j＝14.4hz,1h),3.51(t,j＝6.0hz,2h),3.35
–
3.20(m,2h),3.15(s,3h),2.83
–
2.54(m,4h),2.45
–
2.37(m,1h),2.32
–
2.15(m,4h),2.12(s,3h),2.09
–
1.76(m,4h),0.91(d,j＝6.7hz,3h),0.86(d,j＝6.6hz,3h)。
[0929]
实例47：化合物235
[0930]
化合物235(2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图27的方案45来合成。
[0931][0932]
可以如下制备第一中间体1-(3-溴苯基)环丁烷甲腈。向2-(3-溴苯基)乙腈(1g,5.1mmol)和1,3-二溴丙烷(0.62ml,6.12mmol)在丙酮(11.3ml)的溶液中添加碳酸钾(1.76g,12.75mmol)和四丁基溴化铵(164.4mg,0.510mmol)。将所得悬浮液在55℃下加热5天。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土垫过滤。将垫用丙酮冲洗，并且将滤液浓缩至干。将粗产物通过硅胶色谱法(0-35％etaoc/庚烷)纯化，得到1-(3-溴苯基)环丁腈(530mg,44％收率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.55(t,j＝1.9hz,1h),7.46(ddt,j＝7.7,1.8,0.9hz,1h),7.35(ddt,j＝7.9,2.0,1.0hz,1h),7.27(t,j＝7.8hz,1h),2.87
–
2.78(m,2h),2.66
–
2.55(m,2h),2.51
–
2.38(m,1h),2.14
–
2.03(m,1h)。
[0933]
可以如下制备第二中间体1-(3-溴苯基)环丁烷甲醛。在-78℃下，将1m dibal-h的甲苯溶液(2.5ml,2.47mmol)缓慢添加到1-(3-溴苯基)环丁烷甲腈(530mg,2.24mmol)在甲苯(13.2ml)的溶液中，并且将所得混合物在该温度下搅拌1.5h。将反应物通过添加1n hcl溶液淬灭，然后升温至室温并用dcm(3x)萃取。将有机物合并，用1n hcl溶液洗涤，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过硅胶色谱法(0-50％et2o/庚烷)纯化，得到1-(3-溴苯基)环丁烷甲醛(98.4mg,18％收率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.53(s,1h),7.41(ddt,j＝7.9,1.8,0.9hz,1h),7.30(t,j＝1.5hz,1h),7.24(t,j＝7.6hz,1h),7.07(ddt,j＝7.8,1.8,0.9hz,1h),2.77
–
2.68(m,2h),2.39(ddd,j＝19.0,9.4,2.4hz,2h),2.09
–
1.88
(m,2h)。
[0934]
可以如下制备第三中间体(1-(3-溴苯基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇。将2.5m n-buli的己烷溶液(0.2ml,0.49mmol)添加到冷却至-50℃的4-甲基-1,2,4-三唑(41.03mg,0.49mmol)在dme(4.1ml)的溶液中，并在该温度下搅拌1h。然后滴加1-(3-溴苯基)环丁烷甲醛(98.4mg,0.41mmol)在dme(2ml，然后用1ml洗涤小瓶)中的溶液，并且使反应物缓慢升温至室温。1h后，将反应物用饱和nh4cl水溶液淬灭，然后蒸发大部分dme。将所得水层用4:1的chcl3:ipa混合物(3x)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗混合物通过硅胶色谱法(0-12％meoh/dcm)纯化，得到(1-(3-溴苯基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(49.7mg,37％收率)。lcms(esi)m/z:322.1,324.1[m h]
[0935]
可以如下制备第四中间体(1-(3-溴苯基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲酮。向(1-(3-溴苯基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(49.7mg,0.15mmol)在dcm(0.77ml)的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(130.9mg,0.31mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌16h。然后将反应物用10％na2s2o3水溶液和饱和nahco3水溶液淬灭，搅拌30分钟并用4:1的chcl3:ipa混合物(5x)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到原样用于下一步的粗品(1-(3-溴苯基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲酮(53.9mg,109％收率)。lcms(esi)m/z:320.1,322.0[m h]
。
[0936]
可以如下制备第五中间体3-((1-(3-溴苯基)环丁基)二氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。将粗品(1-(3-溴苯基)环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲酮(33.9mg,0.11mmol)和dast(0.35ml,2.65mmol)的纯混合物在50℃下搅拌16h。反应未完全，添加更多的dast(0.35ml,2.65mmol)并再加热17h：将混合物通过非常缓慢地添加饱和nahco3水溶液淬灭，用4:1的chcl3:ipa混合物(3x)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗混合物通过硅胶色谱法(50-100％etoac/dcm)纯化，得到3-((1-(3-溴苯基)环丁基)二氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(17.8mg,49％收率)。lcms(esi)m/z:342.0,344.0[m h]
。
[0937]
可以如下制备第六中间体((2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)(1-甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯。向配备有搅拌棒的微波小瓶中装入k3po4(22.1mg,0.1mmol)、第五中间体3-((1-(3-溴苯基)环丁基)二氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(17.8mg,0.05mmol)和(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体r；22.8mg,0.06mmol)、me4tbutylxphos(2.5mg,0.001mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(1.9mg,0.002mmol)。然后将小瓶用氮气冲洗几分钟，并且通过注射器添加脱气的叔丁醇(0.26ml)。将小瓶加盖，并且将反应混合物在110℃下搅拌16h，然后冷却至室温。将反应混合物通过c18硅胶色谱法(50-95％梯度的乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)直接纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到((2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)(1-甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(10.2mg,30％收率)。lcms(esi)m/z:660.2[m h]
。
[0938]
将三氟乙酸(80μl)添加到((2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)(1-甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(10.2mg，0.02mmol)在dcm(80μl)的溶液中，并且将溶液在室温下搅拌2h。将过量的tfa通过添加饱和nahco3水溶液淬灭，并且将水层用4:1的chcl3:ipa混合物(5x)萃取。将有机物合
并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗混合物通过c18硅胶色谱法(20-55％梯度的乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(化合物235；2.8mg,32％收率)。lcms(esi)m/z:560.1[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.37(s,1h),8.30(br s,1h),8.03(s,1h),7.99(s,1h),7.81(d,j＝8.0hz,1h),7.46(s,1h),7.41
–
7.30(m,1h),6.83(d,j＝7.2hz,1h),5.04(s,2h),3.81(s,2h),3.06
–
2.93(m,2h),2.81(s,3h),2.13
–
2.01(m,1h),2.01
–
1.91(m,2h),1.91
–
1.80(m,1h),1.77
–
1.57(m,4h),1.21(s,3h)。
[0939]
实例48：化合物236
[0940]
化合物236((s)-2-(4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(乙基氨基)吡啶-2-基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯)可以根据图28的方案46来合成。
[0941][0942]
可以如下制备第一中间体1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁烷甲腈。将3,3-二氟环丁烷甲腈(673.9mg,5.76mmol)和2,4,6-三氯吡啶(1g,5.48mmol)溶解在thf(20ml)中，并冷却至-78℃。在10分钟内滴加1m lihmds的thf溶液(6.0ml,6.03mmol)。在-78℃下搅拌10分钟后，移除冷却浴，并且使反应混合物升温至室温，并搅拌2h。将反应物通过添加饱和nh4cl水溶液淬灭，并用etoac(3x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗混合物通过硅胶色谱法(0-50％etoac/庚烷)纯化，得到1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁烷甲腈(900mg,62％收率)。lcms(esi)m/z:263.3[m h]
1
h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.40s,2h),3.61
–
3.52(m,2h),3.25
–
3.16(m,2h)。
[0943]
如下制备第二中间体1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁烷甲醛。在-78℃下，将1m dibal-h的庚烷溶液(6.8ml,6.84mmol)缓慢添加到1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁烷甲腈(1.20g，4.56mmol)在乙醚(18ml)的溶液中。将所得混合物在-78℃下搅拌2h。向反应混合物中添加5g na2so4十水合物和50ml乙醚。将混合物在室温下搅拌10分钟并且添加1m hcl溶液(20ml)。将混合物在室温下搅拌10分钟，并且将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁烷甲醛(1.10g,91％收率)。该粗品无需进一步纯化即可使用。
[0944]
如下制备第三中间体(1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇。在-50℃下，将2.5m n-buli的己烷溶液(0.87ml,2.17mmol)添加到4-甲基-1,2,4-三唑(180mg,2.17mmol)在dme(26ml)的溶液中，并且将反应物在该温度下搅拌1h。然后滴加粗品1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁烷甲醛(749.3mg,2.82mmol)在dme(10ml)中的溶液，并且使反应物缓慢升温至0℃(1h)。一旦反应温度达到0℃，将其再搅
拌30分钟，然后将其用饱和nh4cl水溶液淬灭，并用etoac(2x70ml)萃取。将粗产物通过硅胶色谱法(0-20％meoh/dcm)纯化，得到(1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(145mg,19％收率)。
[0945]
如下制备第四中间体2,6-二氯-4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶。将(1-(2,6-二氯吡啶-4-基)-3,3-二氟环丁基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(400mg,1.15mmol)溶解在亚硫酰氯(4.2ml,57.28mmol)中，并向该溶液中添加dmf(10μl)。将溶液在55℃下搅拌20分钟。将粗产物通过硅胶色谱法(0-20％meoh/dcm)纯化，得到氯代中间体，将该氯代中间体溶解在乙酸(5ml)中。向该溶液中添加锌(374.5mg,5.73mmol)并在55℃下搅拌2h。将反应物过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(5-20％meoh/dcm)纯化，得到2,6-二氯-4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(321mg,84％收率)。lcms(esi)m/z:333.0,335.0,337.0[m h]
。
[0946]
如下制备第五中间体6-氯-4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-n-乙基吡啶-2-胺。在微波小瓶中，将2,6-二氯-4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(100mg,0.3mmol)溶解在dmso(3ml)中，并且向该溶液中添加乙胺(67％水溶液)(0.6ml,0.3mmol)。将所得反应混合物在110℃下搅拌3h，然后冷却至室温。将反应物用水(10ml)和etoac(20ml)稀释，分离各相，并且将有机层用水(2x5ml)和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到无需纯化即可用于下一步的6-氯-4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-n-乙基吡啶-2-胺(53mg,52％收率)。lcms(esi)m/z:342.0,344.0[m h]
。
[0947]
如下制备第六中间体((s)-4-((2-(4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(乙基氨基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。向微波小瓶中装入6-氯-4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-n-乙基吡啶-2-胺(54mg,0.16mmol)、(s)-3-异丙基-4-((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体t；76.7mg,0.17mmol)、me4tbutylxphos(7.6mg,0.02mmol)、pd2(dba)3(7.2mg,0.01mmol)和k3po4(100.6mg,0.47mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的无水叔丁醇(0.93ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌15h。将反应物浓缩，并且将粗产物通过硅胶色谱法(0-20％meoh/dcm(含有(0.3％三乙胺))纯化，得到((s)-4-((2-(4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(乙基氨基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯作为与三甲胺的络合物。lcms(esi)m/z:747.4[m h]
。
[0948]
向粗品((s)-4-((2-(4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(乙基氨基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)-3-异丙基哌嗪-1-甲酸叔丁酯的dcm(3ml)溶液中添加三氟乙酸(1ml)。将反应物在室温下搅拌1h，然后用甲苯(2ml)稀释并浓缩。向粗品的甲醇(5ml)溶液中添加乙酸钠(1.779g)。向搅拌的混合物中添加甲醛(37％水溶液)(347.4μl)，并且将反应物在室温下搅拌10分钟，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(449.8mg)，并再搅拌20分钟。将混合物用dmso(2ml)浓缩，并且将粗混合物通过c18硅胶色谱法(0-60％梯度的乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到化合物236(s)-2-(4-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)
甲基)环丁基)-6-(乙基氨基)吡啶-2-基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯(16.5mg)。lcms(esi)m/z:661.5[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.19(d,j＝8.5hz,1h),8.17(s,1h),7.95(s,1h),7.89(s,1h),7.42(d,j＝0.9hz,1h),.6.98(d,j＝4.0hz,1h),6.58(t,j＝5.5hz,1h),5.80(s,1h),5.12(s,2h),4.18(d,j＝14.3hz,1h),3.33(dd,j＝28.6,23.8hz,7h),3.19-3.07(m,3h),3.01(s,3h),2.87(q,j＝13.8hz,2h),2.59(t,j＝10.5hz,2h),2.26
–
2.17(m,3h),2.13(s,3h),1.96
–
1.88(m,2h),1.09(t,j＝7.1hz,3h),0.91(d,j＝6.6hz,3h),0.86(d,j＝6.6hz,3h)。
[0949]
实例49：化合物237
[0950]
化合物237(2-(3-(3-(氟(4-甲基-1h-吡唑-5-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图29的方案47来合成。
[0951][0952]
可以如下制备第一中间体4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑。在0℃下，向4-甲基吡唑(200mg,2.44mmol)在thf(8.1ml)的搅拌溶液中添加氢化钠(60％在矿物油中)(102.3mg,2.56mmol)。在0℃下搅拌30分钟后，添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(0.43ml,2.44mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。将反应混合物用水(15ml)和etoac(20ml)处理。分离各相，并且将水层用etoac(25ml
×
2)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-100％etoac/庚烷)纯化，得到4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑(320mg,62％收率)，为透明无色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.35(s,1h),7.33(s,1h),5.36(s,2h),3.58
–
3.43(m,2h),2.09(s,3h),0.95
–
0.81(m,2h),-0.03(s,9h)。
[0953]
可以如下制备第二中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-5-基)甲醇。在-50℃下，将2.5m n-buli在己烷中的溶液(0.43ml,1.08mmol)滴加到4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑(229.0mg,1.08mmol)在无水dme(10.7ml)的溶液中。将所得混合物在-50℃下搅拌1h，然后滴加3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(130mg,0.54mmol)在dme(3ml)中的溶液。使反应物在1h内逐渐升温至0℃。将反应物用水淬灭，并用chcl3/ipa 3:1混合物稀释。分离各层，将水相用chcl3/ipa 3:1混合物(3x)萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-100％etoac/庚烷)纯化，得到(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-5-基)甲醇(73mg,30％收率)，为透明无色油状物。lcms(esi)m/z:452.9[m h]
。
[0954]
可以如下制备第三中间体5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑。在0℃下，向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-5-基)甲醇(73mg,
0.16mmol)在dcm(2.3ml)的溶液中滴加deoxofluor(50％w/w在甲苯中)(0.24ml,0.53mmol)(内部监测保持温度低于5℃)。2h后，将反应物冷却回0℃，并通过缓慢添加水(5ml)淬灭。将产物用含30％ipa的chcl3(3x5ml)萃取，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-100％etoac/庚烷)纯化，得到5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑(45mg,61％收率)，为透明无色油状物。lcms(esi)m/z:454.9[m h]
。
[0955]
可以如下制备第四中间体2-(3-(3-(氟(4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-5-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向小瓶中装入(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；36.9mg,0.10mmol)、5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑(45mg,0.10mmol)、me4tbutylxphos(9.5mg,0.02mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(9.1mg,0.01mmol)和碳酸铯(64.8mg,0.20mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的甲苯(0.99ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌16h并冷却至室温。添加3:1 chcl3/ipa，并且将反应物通过0.45μm ptfe过滤器过滤。将水(10ml)添加到残余物中，并且将产物用3:1 chcl3/ipa(3x10ml)萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-10％meoh/dcm)纯化，得到2-(3-(3-(氟(4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-5-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(17mg,24％收率)，为黄色固体。lcms(esi)m/z:730.3[m h]
[0956]
向2-(3-(3-(氟(4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-5-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(17mg,0.02mmol)中添加三乙基硅烷(50μl,0.31mmol)，随后添加三氟乙酸(0.10ml,1.3mmol)。将反应物在室温下搅拌3h。除去过量的tfa，并且将反应物用dcm稀释。添加1m naoh溶液以达到ph 12。将产物用含30％ipa的chcl3(3x)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过半制备型lcms(25-45％梯度的乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到化合物237，2-(3-(3-(氟(4-甲基-1h-吡唑-5-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(3.8mg,27％收率)。lcms(esi)m/z:600.4[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.58
–
10.51(m,1h),7.96(s,1h),7.89(s,1h),7.80(d,j＝8.6hz,1h),7.49(s,1h),7.35
–
7.19(m,2h),6.86(d,j＝7.4hz,1h),5.89(d,j＝46.2hz,1h),5.33(d,j＝6.4hz,1h),5.16(d,j＝5.8hz,1h),5.09
–
4.93(m,3h),4.77
–
4.69(m,1h),4.19(d,j＝14.4hz,1h),3.35(d,j＝14.3hz,2h),2.68
–
2.53(m,2h),2.34
–
2.14(m,4h),2.12(s,3h),2.00
–
1.73(m,2h),1.47(ap s,2h),0.90(d,j＝6.7hz,3h),0.86(d,j＝6.6hz,3h)。
[0957]
实例50：化合物238
[0958]
化合物238(2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图30的方案48来合成。
[0959][0960]
可以如下合成第一中间体(6-氯-n-(环丙基甲基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-环丁基)吡啶-2-胺)。在密封管中，以及向2,6-二氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(中间体u；120mg,0.40mmol)在1,4-二噁烷(0.41ml)的搅拌溶液中添加环丙烷甲胺(0.7ml,8.08mmol)。将所得反应混合物在80℃下搅拌72h。将反应物冷却至室温并浓缩。将粗残余物溶解在dcm中，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到无需进一步纯化即可用于下一步的6-氯-n-(环丙基甲基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-胺(125mg,93％收率)。lcms(esi)m/z:332.2,334.1[m h]
。
[0961]
可以如下制备第二中间体2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向微波小瓶中装入6-氯-n-(环丙基甲基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-胺(125mg,0.38mmol)、6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体q；95.8mg,0.41mmol)、me4tbutylxphos(18.1mg,0.04mmol)、pd2(dba)3(17.3mg,0.02mmol)和k3po4(239.9mg,1.13mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的无水叔丁醇(2ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌15h。将反应物冷却至室温并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-30％meoh/dcm)纯化，得到2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(139mg,70％收率)。lcms(esi)m/z:527.1[m h]
。
[0962]
可以如下制备第三中间体2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛。在0℃下，将戴斯-马丁高碘烷(“dmp”；167.9mg,0.40mmol)添加到2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-(羟甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(139mg,0.26mmol)在dcm(1.5ml)的悬浮液中。使所得混合物升温至室温并搅拌3h。将反应物用饱和na2s2o3水溶液和饱和nahco3水溶液淬灭，并且将所得混合物剧烈搅拌30分钟。分离各层，并且将水相用4:1 chcl3/ipa(3x)萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(1-10％meoh/dcm)纯化，得到2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(70mg,51％收率)。lcms(esi)m/z:525.0[m h]
[0963]
为了形成化合物238，在微波小瓶中，将2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(52.5mg,0.10mmol)、三乙胺(83.6μl,0.60mmol)和1-甲基环丁胺盐酸盐(73mg,0.60mmol)溶解在甲醇(1ml)中。将所得反应混合物在微波烘箱中在100℃下加热5分钟。在
室温下，添加氰基硼氢化钠(18.9mg,0.30mmol)。将反应物再次在微波烘箱中在100℃下加热1h。将反应物浓缩，并且将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到化合物238，2-(6-((环丙基甲基)氨基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(14mg,24％收率)。lcms(esi)m/z:594.1[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.17(s,1h),8.00(d,j＝9.8hz,2h),7.37(s,1h),6.60(t,j＝5.6hz,1h),5.78(s,1h),5.12(s,2h),3.82(s,2h),3.14(s,2h),3.05(t,j＝6.2hz,2h),3.02(s,3h),2.43(m,2h),2.25(m,2h),2.13
–
1.90(m,3h),1.85
–
1.61(m,5h),1.23(s,3h),1.08
–
0.92(m,1h),0.47
–
0.32(m,2h),0.24
–
0.12(m,2h)。
[0964]
实例51：化合物239
[0965]
化合物239((s)-n-(6-(6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1-氧代-4-(三氟甲基)异吲哚啉-2-基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)丙烯酰胺)可以根据图31的方案49来合成。
[0966][0967]
可以如下形成第一中间体(6-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯。向微波小瓶中装入2,6-二氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(中间体u；300mg,1.01mmol)、pd2(dba)3.chcl3(52.3mg,0.05mmol)、碳酸铯(661.9mg,2.02mmol)、xantphos(58.4mg,0.10mmol)和氨基甲酸叔丁酯(130.1mg,1.11mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的1,4-二噁烷(10.1ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在90℃下搅拌15h。将小瓶冷却至室温并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-10％meoh/dcm)纯化，得到(6-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(348mg,91％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:378.0,379.5[m h]
[0968]
可以如下制备第二中间体(s)-(6-(6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1-氧代-4-(三氟甲基)异吲哚啉-2-基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯。向微波小瓶中装入(6-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(38mg,0.10mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；46.3mg,0.11mmol)、me
4t
butylxphos(4.8mg,0.01mmol)、pd2(dba)3(4.6mg,0.01mmol)和k3po4(64.0mg,0.30mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的无水叔丁醇(1.0ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌20h。将小瓶冷却至室温并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(0-30％meoh/dcm)纯化，得到(s)-(6-(6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1-氧代-4-(三氟甲基)异吲哚啉-2-基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)
氨基甲酸叔丁酯(50mg,71％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:697.3[m h]
。
[0969]
可以如下制备第三中间体(s)-2-(6-氨基-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向(s)-(6-(6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1-氧代-4-(三氟甲基)异吲哚啉-2-基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50.mg,0.07mmol)在dcm(0.72ml)的搅拌溶液中添加三氟乙酸(0.27ml,3.59mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌1h。将反应物浓缩，并且将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到(s)-2-(6-氨基-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(30mg,70％收率)，为白色固体。lcms(esi)m/z:597.1[m h]
[0970]
为了制备化合物239，在氮气下，在-78℃下，向(s)-2-(6-氨基-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(30mg,0.05mmol)、三乙胺(140μl,0.10mmol)在dcm(1ml)的溶液中添加丙烯酰氯(4.5μl,0.06mmol)。将反应混合物在3h内缓慢升温至0℃。将反应物浓缩，并且将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到(s)-n-(6-(6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1-氧代-4-(三氟甲基)异吲哚啉-2-基)-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)丙烯酰胺(3.5mg,11％收率)。lcms(esi)m/z:651.1[m h]
1
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.53(s,1h),8.15(s,1h),7.98(s,1h),7.91(d,j＝7.9hz,2h),7.72(d,j＝8.6hz,1h),6.65(dd,j＝17.0,10.2hz,1h),6.28(dd,j＝17.0,1.8hz,1h),5.77(dd,j＝10.2,1.8hz,1h),5.18(s,2h),4.19(d,j＝14.4hz,1h),3.36(d,j＝14.4hz,2h),3.22(s,2h),3.03(s,3h),2.58(dd,j＝24.8,14.7hz,2h),2.37
–
2.16(m,6h),2.15
–
2.03(m,5h),1.88(ddd,j＝19.9,14.8,7.6hz,3h),0.91(d,j＝6.6hz,3h),0.87(d,j＝6.6hz,3h.
[0971]
实例52：化合物240
[0972]
化合物240((s)-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图32的方案50来合成。
[0973][0974]
向微波小瓶中装入3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(中间体p；52.1mg,0.15mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；50mg,0.15mmol)、me4tbutylxphos(7.3mg,0.02mmol)、pd2(dba)3(7.0mg,0.01mmol)和k3po4(96.9mg,0.46mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的无水叔丁醇(0.76ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌15h。将反应物浓缩，
并且将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/0.5％甲酸缓冲液)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到(s)-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(22mg,25％收率)。lcms(esi)m/z:590.2[m h]
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.16(s,1h),7.93(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),7.45(s,1h),7.41(m,1h),7.34(t,j＝8.0hz,1h),6.79(d,j＝7.7hz,1h),5.14(s,2h),4.00(d,j＝14.8hz,1h),3.51(d,j＝14.7hz,1h),3.31
–
3.19(m,4h),3.08
–
2.89(m,2h),2.71(s,3h),2.67(m,1h),2.61
–
2.50(m,2h),2.36(m,1h),2.30
–
2.20(m,2h),2.20
–
2.14(m,1h),2.12(s,3h),1.94(m,1h),1.82(t,j＝10.3hz,1h),1.13
–
1.00(m,4h),0.89(d,j＝6.8hz,3h),0.84(d,j＝6.8hz,3h)。
[0975]
实例53：化合物241
[0976]
化合物241(2-(6-苄基-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶-2-基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图33的方案51来合成。
[0977][0978]
可以如下制备第一中间体2-苄基-6-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶。向小瓶中添加2,6-二氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(中间体u；100mg,0.34mmol)和fe(acac)3(5.9mg,0.02mmol)。将小瓶用血清帽密封，抽空，用氮气吹扫，并将混合物溶解在thf(5.0ml)中。将反应混合物在0℃下用2m苄基氯化镁的thf溶液(202μl,0.40mmol)逐滴处理。搅拌2h后，将反应物通过添加水(5ml)淬灭并用etoac(3x15ml)萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到2-苄基-6-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(105mg,88％收率)。无需进一步纯化即可用于下一步。lcms(esi)m/z:353.2[m h]
。
[0979]
为了制备化合物241，向配备有搅拌棒的微波小瓶中装入k3po4(96.9mg,0.46mmol)，并在氮气下火焰干燥。然后添加2-苄基-6-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(53.7mg,0.11mmol)、(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体r；50mg,0.13mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(5.2mg,0.01mmol)和me4tbutylxphos(5.5mg,0.01mmol)，并且将小瓶用氮气冲洗几分钟。通过注射器添加脱气的叔丁醇(1ml)，将小瓶加盖，并且将反应混合物在110℃下搅拌16h，然后冷却至室温。将反应物用水和etoac稀释，并且使混合物通过硅藻土垫。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗品溶解在dcm(2ml)中，添加三氟乙酸(0.5ml)并搅拌1h。蒸发溶剂，并且将粗混合物溶解在dcm(2ml)中，添加三甲胺(300μl)并搅拌15分钟。蒸发溶剂，并且将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/0.5％甲酸缓冲液)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到2-(6-苄基-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)
环丁基)吡啶-2-基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(29mg,38％收率)。lcms(esi)m/z:615.2[m h]
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.14-8.10(m,2h),8.05(s,1h),8.02(s,1h),7.35
–
7.17(m,5h),6.66(s,1h),5.19(s,2h),4.00(s,4h),3.20(s,2h),2.80(s,3h),2.54-2.52(m,1h),2.34-2.10(m,5h),1.84-1.73(m,5h),1.38-1.34(m,3h)。
[0980]
实例54：化合物242
[0981]
化合物242(2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-1,1-二氧代硫杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图34的方案52来合成。
[0982][0983]
可以如下制备第一中间体2-(3-溴苯基)丙二酸1-乙酯3-甲酯。在氮气气氛下，在0℃下，向2-(3-溴苯基)乙酸甲酯(3g,13.1mmol)在无水thf(20ml)的溶液中缓慢添加1m双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂的thf溶液(32.7ml,32.74mmol)。将反应物在室温下搅拌1h。然后，在0℃下滴加氰基甲酸乙酯(3.9ml,39.29mmol)。将混合物升温至室温并搅拌2h。将反应物用1n hcl溶液酸化至ph 5。添加etoac，将有机相分离，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-100％etoac/庚烷)纯化，得到2-(3-溴苯基)丙二酸1-乙酯3-甲酯(3.65g,93％收率)。lcms(esi)m/z:303.0[m h]
[0984]
可以如下制备第二中间体3-(氯甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。将(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(350mg,3.09mmol)溶解在亚硫酰氯(1.8ml,24.75mmol)中，并在50℃下搅拌2h。蒸发亚硫酰氯，得到无需进一步纯化即可用于下一步的3-(氯甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(410mg,100％收率)。lcms(esi)m/z:132.3[m h]
[0985]
可以如下制备第三中间体2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙二酸1-乙酯3-甲酯。向2-(3-溴苯基)丙二酸1-乙酯3-甲酯(801.1mg,2.66mmol)的dmf(20ml)溶液中添加k2co3(1.838g,13.3mmol)，并且将混合物搅拌20min。将溶解在dmf(2ml)中的3-(氯甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(350mg,2.66mmol)添加到反应混合物中，并在40℃下搅拌16h。将反应物用水淬灭，并用etoac稀释。将有机层分离，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品溶解在dcm中，并用乙醚和庚烷结晶，得到2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙二酸1-乙酯3-甲酯(855mg,81％收率)lcms(esi)m/z:397.9[m h]
[0986]
可以如下制备第四中间体2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙烷-1,3-二醇。在0℃下，向2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙二酸1-乙酯3-甲酯(850mg,2.15mmol)的thf(10ml)溶液中添加氢化铝锂(211.8mg,6.44mmol)。将反应物在0℃下搅拌1h，升温至室温并再搅拌2h。将反应物倒入冷的饱和nh4cl水溶液中并用etoac稀释。期望的产物是水溶性的，但用etoac/meoh(10％)萃取。将合
并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗残余物通过c18硅胶色谱法(乙腈/碳酸氢铵缓冲液，ph＝10)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙烷-1,3-二醇(170mg,24％收率)。lcms(esi)m/z:328.1[m h]
[0987]
可以如下制备第五中间体2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙烷-1,3-二基双(4-甲基苯磺酸酯)。在0℃下，在30分钟内向2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙烷-1,3-二醇(170mg,0.52mmol)在吡啶(5ml)的溶液中添加4-甲苯磺酰氯(298.1mg,1.56mmol)在吡啶(2ml)中的溶液，然后将其搅拌8h。将反应物用etoac(50ml)稀释并用饱和nh4cl水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(etoac/庚烷)纯化，得到2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙烷-1,3-二基双(4-甲基苯磺酸酯)(305mg,92％收率)。lcms(esi)m/z:636.0[m h]
[0988]
可以如下形成第六中间体3-((3-(3-溴苯基)硫杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑。向2-(3-溴苯基)-2-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)丙烷-1,3-二基双(4-甲基苯磺酸酯)(250mg,0.39mmol)在dmf(1ml)的溶液中添加硫代乙酸钾(230mg,2.01mmol)和碳酸铯(256.7mg,0.79mmol)，并且将反应混合物在110℃下加热8h。将反应物用10％meoh的etoac溶液(50ml)稀释并用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-15％meoh/dcm)纯化，得到3-((3-(3-溴苯基)硫杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(15mg,12％收率)。lcms(esi)m/z:326.0[m h]
[0989]
可以如下制备第七中间体3-(3-溴苯基)-3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)硫杂环丁烷1,1-二氧化物。在0℃下，向3-((3-(3-溴苯基)硫杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(15mg,0.02mmol)在dcm(1ml)的溶液中添加3-氯过苯甲酸(m-cpba)(31.9mg,0.19mmol)，并且将反应物在室温下搅拌2h。将反应物用etoac(5ml)稀释并用饱和na2s2o3水溶液淬灭。将有机层分离并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗残余物通过c18硅胶色谱法(乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到3-(3-溴苯基)-3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)硫杂环丁烷1,1-二氧化物(5mg,33％收率)。lcms(esi)m/z:356.0,357.9[m h]
[0990]
为了制备化合物242，向配备有搅拌棒的微波小瓶中装入k3po4(10.8mg,0.05mmol)，并在氮气下火焰干燥。然后添加(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体r；7.2mg,0.02mmol)、3-(3-溴苯基)-3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)硫杂环丁烷1,1-二氧化物(5mg,0.01mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.9mg,0.001mmol)、me4tbutylxphos(0.9mg,0.002mmol)，并且将小瓶用氮气冲洗几分钟。通过注射器添加脱气的叔丁醇(1ml)，将小瓶加盖，并且将反应混合物在110℃下搅拌16h，然后冷却至室温。将反应物用水和etoac稀释并且使混合物通过硅藻土垫。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将获得的粗品溶解在dcm(2ml)中，添加三氟乙酸(0.5ml)并搅拌1h。蒸发溶剂，并且将粗混合物溶解在dcm(2ml)中，添加三乙胺(300μl)并且将混合物搅拌15分钟。蒸发溶剂，并且将粗残余物通过c18硅胶色谱法(乙腈/0.5％甲酸缓冲液)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到粗品2-(3-(3-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-1,1-二氧代硫杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(1mg,12％收率)。lcms(esi)m/z:574.2[m h]
1
h nmr(400mhz,cd3cn)δ8.02
(s,1h),7.99
–
7.95(m,2h),7.89(s,1h),7.40
–
7.34(m,2h),6.78(d,j＝7.8hz,1h),4.95(s,2h),4.82
–
4.76(m,2h),4.58
–
4.52(m,2h),3.87(s,2h),3.51(s,2h),2.72(s,3h),2.09
–
1.99(m,2h),1.86
–
1.71(m,4h),1.29(s,3h)。
[0991]
实例55：化合物243
[0992]
化合物243(2-(3-(3-((5-甲基-1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图35的方案53来合成。
[0993][0994]
可以如下制备第一中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇。在0℃下，向3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(1g,4.15mmol)在thf(20.7ml)的溶液中添加2m硼烷硫酸二甲酯络合物的thf溶液(3.1ml,6.22mmol)。将反应物逐渐升温至室温并搅拌30分钟。将反应物通过添加饱和nahco3水溶液(20ml)淬灭，并且将产物用etoac(2x20ml)萃取，然后用含30％ipa的chcl3(2x10ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法纯化，得到(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇(865mg，86％收率)，为白色固体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51
–
7.37(m,1h),7.34
–
7.18(m,2h),7.09
–
6.93(m,1h),4.93(d,j＝6.0hz,2h),4.75(d,j＝6.1hz,2h),4.05(s,2h)。
[0995]
可以如下制备第二中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基甲磺酸酯。在0℃下，向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇(0.87g,3.56mmol)在thf(17.8ml)的溶液中添加甲磺酰氯(0.36ml,4.63mmol)，然后添加三乙胺(0.55ml,3.91mmol)。将反应物升温至室温，并再搅拌2h。添加水(20ml)，并且将产物用etoac(3x20ml)萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基甲磺酸酯。假设收率为定量的，并且粗品无需进一步纯化即可用于下一步。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.54
–
7.38(m,1h),7.35
–
7.23(m,2h),7.09
–
6.95(m,1h),4.97(d,j＝6.4hz,2h),4.78(d,j＝6.5hz,2h),4.59(s,2h),2.93
–
2.81(m,3h)。
[0996]
可以如下制备第三中间体3-(叠氮基甲基)-3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷。向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基甲磺酸酯(1.143g,3.56mmol)在dmf(17.8ml)的溶液中添加叠氮化钠(439.7mg,6.76mmol)，并且将反应物加热至80℃持续16h。添加水(20ml)，并且将产物用dcm(3x50ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-50％etoac/庚烷)纯化，得到3-(叠氮基甲基)-3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷(746mg,78％收率)，为淡黄色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.53
–
7.43(m,1h),7.33
–
7.22(m,1h),7.22
–
7.14(m,1h),7.06
–
6.97(m,1h),4.93(d,j＝6.0hz,2h),4.69(d,j＝5.8hz,2h),3.87(s,2h)。
[0997]
可以如下制备第四中间体1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-5-甲基-1h-1,2,3-三唑。向3-(叠氮基甲基)-3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷(746mg,2.78mmol)在1,4-二
溴-4-氟-3-(三氟甲基)苯胺(5.3g,20.54mmol)、碳酸铯(20.08g,61.63mmol)、甲基三氟硼酸钾(5.01g,41.08mmol)和pd(dppf)2cl2(1.5g,2.05mmol)。将反应物置于真空下，然后用氮气吹扫三次。然后添加脱气的thf(49.2ml)和水(4.9ml)。将小瓶密封并在100℃下加热16h。将反应物冷却，添加水(150ml)，并且将产物用etoac(1x150ml)萃取。将有机层用水(1x150ml)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-100％etoac/庚烷)纯化，分离得到4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯胺(3.4g,86％收率)，为暗红色针状物。lcms(esi)m/z:193.2[m h]
(br模式)。
[1004]
可以如下制备第二中间体1-溴-4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯。在0℃下，向4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯胺(3.45g,17.86mmol)和溴化铜(ii)(3.99g,17.86mmol)在mecn(59.5ml)的悬浮液中添加亚硝酸叔丁酯(2.34ml,19.65mmol)。将反应物逐渐升温至室温并搅拌16h。将水(100ml)添加到反应物中并且将产物用etoac(3x100ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-10％etoac/戊烷)纯化，得到1-溴-4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯(3.77g,82％收率)，为暗红色油状物。在这种情况下，需要小心，因为产物是挥发性的。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.70(dd,j＝8.9,4.9hz,1h),7.00
–
6.84(m,1h),2.57(q,j＝2.1hz,3h)。
[1005]
可以如下制备第三中间体4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸。向压力容器中装入1-溴-4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯(3.77g,14.67mmol)、乙酸钯(0.33g,1.47mmol)、xantphos(0.85g,1.47mmol)和草酸(2.0ml,22mmol)。用氮气吹扫后，添加含有dipea(3.8ml,22mmol)的脱气dmf(48.9ml)和乙酸酐(2.08ml,22mmol)，并且将反应物加热至100℃持续16h。将反应物冷却至室温，添加1m naoh溶液，并且将水层用et2o(2x100ml)洗涤。将有机洗涤液用naoh[1m,150ml]反萃取。水层为酸化的6m hcl溶液，并且将产物用dcm(2x400ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸(2.2g,68％收率)，为橙色固体。lcms(esi)m/z:221.4[m h] 。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(dd,j＝8.9,5.4hz,1h),7.12
–
7.06(m,1h),2.74(q,j＝2.3hz,3h)。
[1006]
可以如下制备第四中间体4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。在0℃下，向4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸(2.2g,9.9mmol)在甲醇(24.8ml)的溶液中滴加亚硫酰氯(1.81ml,24.76mmol)。将反应混合物升温至室温，然后加热至50℃并搅拌16h。将反应混合物减压浓缩。将粗反应混合物重新溶解在水(60ml)中，并且使用饱和nahco3水溶液将ph调节至8.5。将溶液用dcm(3
×
100ml)萃取，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.770g,77％收率)，为黄色油状物。
[1007]
可以如下制备第五中间体5-溴-4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。向4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.77g,7.49mmol)在乙酸(20ml)的溶液中添加70％hno3水溶液(3.35ml,74.95mmol)和溴(0.42ml,8.24mmol)，随后缓慢滴加2,5m agno3水溶液(3.9ml,9.74mmol)。然后将混合物在室温下搅拌16h。lcms分析显示没有完全转化。添加溴(0.42ml,8.24mmol)、2.5m agno3水溶液(3.9ml,9.74mmol)、70％hno3水溶液(3.35ml,74.95mmol)，并且将反应物再搅拌1.5h。然后将反应混合物倒在冰上，用饱和nahco3水溶液稀释，并且使用1m naoh将ph调节至12。将产物用dcm(3x400ml)萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-50％etoac/庚烷)纯化，得到5-溴-4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.700g,72％收率)，为米色固体。1h nmr(400mhz,cdcl3)
δ8.15(d,j＝6.7hz,1h),3.92(s,3h),2.62(q,j＝2.3hz,3h)。
[1008]
可以如下制备第六中间体5-溴-2-(溴甲基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。向5-溴-4-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(500mg,1.59mmol)在四氯化碳(10.9ml)的溶液中添加n-溴琥珀酰亚胺(423.7mg,2.38mmol)和过氧化苯甲酰(38.4mg,0.16mmol)。将反应物在80℃下搅拌16h，然后通过添加饱和nahco3水溶液(30ml)淬灭，并且将产物用dcm(3x)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-50％etoac/庚烷)纯化，得到5-溴-2-(溴甲基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(610mg,98％收率)，为淡黄色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(d,j＝6.6hz,1h),5.09(s,2h),3.98(s,j＝0.4hz,3h)。
[1009]
可以如下制备第七中间体6-溴-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-5-氟-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。将3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺(中间体w；0.35g,1.24mmol)、5-溴-2-(溴甲基)-4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(0.49g,1.24mmol)在mecn(12.3ml)和水(5.4ml)中的溶液冷却至0℃。滴加溶解在水(5ml)中的硝酸银(273.8mg,1.61mmol)。将反应物在室温下搅拌16h。将反应物用饱和nahco3水溶液(70ml)稀释，并且将产物用含30％ipa的chcl3(3x70ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-5％meoh/dcm)纯化，得到6-溴-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-5-氟-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(0.344g,50％收率)，为黄色固体。lcms(esi)m/z:559.4[m h]
(br模式)。
[1010]
可以如下制备第八中间体2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-5-氟-4-(三氟甲基)-6-乙烯基异吲哚啉-1-酮。向螺旋帽小瓶中装入6-溴-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-5-氟-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(100mg,0.18mmol)、碳酸钾(123.6mg,0.8900mmol)、1,1-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(13.3mg,0.02mmol)和乙烯基三氟硼酸钾(47.9mg,0.36mmol)，添加脱气的thf(0.89ml)，并且将管密封。将反应混合物在95℃的油浴中加热16h。添加水(5ml)，并且将产物用含30％ipa的chcl3(3x5ml)萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-5％meoh/dcm)纯化，得到2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-5-氟-4-(三氟甲基)-6-乙烯基异吲哚啉-1-酮(71mg,78％收率)，为棕橙色固体。lcms(esi)m/z:507.4[m h]
。
[1011]
可以如下制备第九中间体2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-氟-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛。在0℃下，向2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-5-氟-4-(三氟甲基)-6-乙烯基异吲哚啉-1-酮(40mg,0.08mmol)在mecn(2.5ml)的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(14.62ul,0.13mmol)、naio4(54.0mg,0.25mmol)、水(0.28ml)和4％oso4水溶液(158.6ul,0.02mmol)。将反应物逐渐升温至室温。16h后的lcms分析显示完全转化为二醇中间体(m/z:541)和约30％的醛。将反应物通过添加水(5ml)淬灭，并且使用含30％ipa的chcl3(3x5ml)萃取产物。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。将粗品溶解在mecn:h2o(4ml:1ml)中并且添加naio4(200mg)。将反应物在室温下搅拌16h。重复上述处理(每相10ml)，得到无需进一步纯化即可用于下一步的2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)
环丁基)苯基)-6-氟-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(30mg,75％收率)，为米色固体。lcms(esi)m/z:509.3[m h]
。
[1012]
为了制备化合物244，向2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-氟-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-甲醛(30mg,0.06mmol)和1-甲基环丁胺盐酸盐(21.5mg,0.18mmol)在dce(1ml)的搅拌溶液中添加三乙胺(24.7μl,0.18mmol)，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(125.1mg,0.59mmol)，并且将悬浮液在室温下搅拌16h。将反应物通过添加水(3滴)淬灭并浓缩。将粗残余物通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩，得到仅62％纯的产物。通过c18硅胶色谱法(0-100％乙腈/碳酸氢铵缓冲液，ph＝10)进行第二次纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-5-氟-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(5.9mg,17％收率)。lcms(esi)m/z:578.4[m h]
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.24(d,j＝6.2hz,1h),8.18(s,1h),7.87(d,j＝8.3hz,1h),7.41
–
7.22(m,2h),6.80(d,j＝8.0hz,1h),5.13(s,2h),3.79(d,j＝7.9hz,2h),3.28
–
3.17(m,4h),3.11
–
2.91(m,2h),2.72(s,3h),2.05
–
1.87(m,2h),1.77
–
1.59(m,4h),1.24(s,3h)。
[1013]
实例57：化合物245和化合物246
[1014]
化合物245((r)-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)和246((s)-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图37的方案55来合成。
[1015][1016]
可以如下合成第一中间体6-溴-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。
[1017]
将3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯胺(中间体w；230mg,0.83mmol)和5-溴-2-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(310.7mg,0.83mmol)在mecn(10ml)和水(5ml)中的溶液冷却至0℃，然后滴加硝酸银(182.5mg,1.07mmol)在水(5ml)中的溶液。将反应物在室温下搅拌17h。添加饱和nahco3水溶液，直到溶液达到ph 8。将混合物用acn稀释，通过硅藻土过滤，并且将滤饼用9:1的dcm:meoh混合物洗涤。将滤过物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-8％meoh/dcm)纯化，得到6-溴-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(170mg,38％收率)。lcms(esi)m/z:542.9[m h]
。
[1018]
可以如下合成第二中间体6-乙酰基-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向烧瓶中装入6-溴-2-(3-(3,
3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(85mg,0.16mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(ii)(11.0mg,0.00mmol)。添加脱气的甲苯(517.3ul)，随后添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(79.6ul,0.24mmol)。将反应物加热至100℃持续16h。将反应物冷却至室温，添加1n hcl溶液(1ml)并且将反应物在室温下搅拌20分钟。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗品通过硅胶色谱法(0-15％meoh/dcm)纯化，得到6-乙酰基-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(53.6mg,68％收率)。lcms(esi)m/z:505.2[m h]
。
[1019]
为了获得化合物245和246，将6-乙酰基-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(53mg,0.11mmol)和1-甲基环丁胺盐酸盐(25.6mg,0.21mmol)在dce(0.52ml)中的溶液用三乙胺(29.3ul,0.21mmol)和异丙醇钛(159.3ul,0.53mmol)处理。将反应物在80℃下搅拌16h。将反应物冷却至室温，并且添加甲醇(531.5μl)，并且将反应物冷却至0℃，然后缓慢添加硼氢化钠(19.9mg,0.53mmol)。在室温下30分钟后，将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过半制备型lcms 40-60％梯度的乙腈/碳酸氢铵缓冲液，ph＝10)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到对映体的混合物。
[1020]
将上述外消旋物通过手性sfc(柱＝ic；柱尺寸＝250mm
×
10mm
×
5μm；检测波长＝310nm；流速＝10ml/min；运行时间＝30min；柱温＝40℃)用35％ipa 10mm amf/二氧化碳)进一步纯化，得到两种产物，其特征如下。
[1021]
(r)-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1)(9.8mg,16％收率)，lcms(esi)m/z:574.5[m h] 。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.17(s,1h),8.10(d,j＝11.3hz,2h),7.90(d,j＝8.0hz,1h),7.39
–
7.30(m,2h),6.78(d,j＝7.9hz,1h),5.07(s,2h),4.13
–
4.04(m,1h),4.01(s,1h),3.24(s,3h),3.05
–
2.96(m,2h),2.71(s,3h),2.33
–
2.26(m,1h),1.91
–
1.83(m,1h),1.83
–
1.66(m,3h),1.59
–
1.46(m,3h),1.44
–
1.36(m,1h),1.06(s,3h),0.91(d,j＝6.7hz,1h)。
[1022]
(s)-2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2)(5.8mg,10％收率)，lcms(esi)m/z:574.4[m h]
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.17(s,1h),8.10(d,j＝11.3hz,2h),7.90(dd,j＝8.2,1.3hz,1h),7.38
–
7.31(m,2h),6.78(d,j＝8.1hz,1h),5.06(s,2h),4.13
–
4.05(m,1h),4.01(s,1h),3.24(s,3h),3.06
–
2.96(m,2h),2.71(s,3h),2.31
–
2.26(m,2h),1.91
–
1.83(m,1h),1.83
–
1.66(m,3h),1.57
–
1.48(m,3h),1.44
–
1.37(m,1h),1.06(s,3h),0.91(d,j＝6.7hz,1h)。
[1023]
实例58：化合物247和化合物248
[1024][1025][1026]
化合物247(2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-((r)-1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)和248(2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-((s)-1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图38的方案56来合成。
[1027]
可以如下合成第一中间体(r)-6-乙酰基-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向烧瓶中装入(r)-6-乙酰基-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(170mg,0.32mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(ii)(22.7mg,0.03mmol)。添加脱气的甲苯(1.6ml)，随后添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(164ul,0.49mmol)。将反应物加热至100℃持续16h。添加水(3ml)，并且将产物用含30％ipa的chcl3(3x3ml)萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。将粗反应混合物用dcm(1ml)稀释，并且添加三氟乙酸(0.5ml)。将反应物在室温下搅拌30min。添加甲苯并且在减压下除去tfa。将粗品溶解在dcm(5ml)中，并使用饱和nahco3水溶液碱化，将产物用含30％ipa的chcl3(3x3ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗品通过硅胶色谱法(0-5％meoh/dcm)纯化，得到(r)-6-乙酰基-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(35mg,22％收率)，为灰白色固体。lcms(esi)m/z:489.1[m h]
。
[1028]
将(r)-6-乙酰基-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(50mg,0.10mmol)和1-甲基环丁胺盐酸盐(49.8mg,0.41mmol)在dce(0.5ml)中的溶液用三乙胺(57.1μl,0.41mmol)处理，然后添加异丙醇钛(155μl,0.51mmol)，并且将混合物在80℃下搅拌16h。将反应物冷却至室温，然后添加甲醇(1ml)。将反应物冷却至0℃，并且分3批添加硼氢化钠(38.7mg,1.02mmol)。将反应物再搅拌1h。添加水，并且将产物用含30％ipa的chcl3(3x5ml)萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗产物通过半制备型lcms(30-70％梯度的乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到外消旋物(31mg,54％收率)，为白色固体。
[1029]
将上述外消旋物通过手性sfc(柱＝ic；柱尺寸＝250mm
×
10mm
×
5μm；检测波长＝310nm；流速＝10ml/min；运行时间＝23min；柱温＝40℃)用40％meoh 10mm amf/二氧化碳)进一步纯化，得到两种异构体，其特征如下：
[1030]
2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-((r)-1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1)(4.6mg,8％收率)lcms(esi)m/z:558.3[m h]
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32(s,1h),8.09(s,1h),8.06
(s,1h),7.90(dd,j＝8.2,1.4hz,1h),7.50(t,j＝1.6hz,1h),7.35(t,j＝8.0hz,1h),6.94(d,j＝7.5hz,1h),6.25(d,j＝45.8hz,1h),5.34(d,j＝6.5hz,1h),5.19(d,j＝5.9hz,1h),5.13
–
4.98(m,3h),4.80(dd,j＝6.1,4.0hz,1h),4.07(q,j＝6.7hz,1h),3.98(br s,1h),3.14(s,3h),2.29
–
2.21(m,1h),1.89
–
1.64(m,2h),1.60
–
1.43(m,2h),1.43
–
1.34(m,1h),1.25(d,j＝6.7hz,3h),1.03(s,3h)。
[1031]
2-(3-(3-((r)-氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-((s)-1-((1-甲基环丁基)氨基)乙基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2)(5.8mg,10％收率)lcms(esi)m/z:558.3[m h]
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.35(s,1h),8.11(s,1h),8.08(s,1h),7.93(d,j＝8.2hz,1h),7.53(s,1h),7.37(t,j＝8.0hz,1h),6.96(d,j＝7.8hz,1h),6.27(d,j＝45.8hz,1h),5.37(d,j＝6.6hz,1h),5.21(d,j＝6.1hz,1h),5.17
–
5.04(m,2h),4.83(dd,j＝6.0,4.0hz,1h),4.15
–
4.03(m,1h),4.01(s,1h),3.17(s,3h),2.34
–
2.22(m,1h),1.90
–
1.67(m,2h),1.60
–
1.37(m,2h),1.30
–
1.20(m,2h),1.06(s,3h),0.88
–
0.81(m,3h)。
[1032]
实例59：化合物249
[1033]
化合物249((r)-4-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯)可以根据图39的方案57来合成。
[1034][1035]
可以如下合成第一中间体(r)-4-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮。向小瓶中装入4-(二氟甲基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体q；46.7mg,0.22mmol)、(r)-3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(65mg,0.20mmol)、me4tbutylxphos(19.2mg,0.04mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(14.6mg,0.02mmol)、k3po4(84.6mg,0.40mmol)和分子筛(注意碱和ms在添加前已火焰干燥)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的t-amoh(1.3ml,0.20mmol)并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌15h。将反应物通过硅胶色谱法(2-15％meoh/dcm)纯化，得到(r)-4-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮(57.2mg,63％收率)。lcms(esi)m/z:459.1[m h]
。
[1036]
可以如下合成第二中间体(r)-7-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代异吲哚啉-5-甲醛。在0℃下，将戴斯-马丁高碘烷(“dmp”；101.8mg,0.24mmol)添加到(r)-4-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮(55mg,0.12mmol)在dcm(0.8ml)的悬浮液中。将所得混合物升温至室温并搅拌一个周末。将反应物用饱和na2s2o3水溶液和饱和nahco3水溶液淬灭，并且将所得混合物剧烈搅拌30分钟。分离各层，将水相用4:1 chcl3/ipa(3x)萃取，将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，
得到(r)-7-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代异吲哚啉-5-甲醛(52.5mg,96％收率)作为原样用于下一步的粗品。lcms(esi)m/z:457.1[m h]
。
[1037]
为了制备化合物249，向微波小瓶中装入(r)-7-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-氧代异吲哚啉-5-甲醛(52mg,0.11mmol)、三乙胺(95.3μl,0.68mmol)和1-甲基环丁胺盐酸盐(69.3mg,0.57mmol)的甲醇(0.95ml)溶液。将反应物在微波烘箱中在100℃下加热3分钟。将反应物冷却至室温并且添加氰基硼氢化钠(21.5mg,0.34mmol)。将反应物在微波烘箱中在100℃下加热60分钟。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将有机层合并，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗产物通过半制备型lcms(10-30％梯度的乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到(r)-4-(二氟甲基)-2-(3-(3-(氟(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)异吲哚啉-1-酮(18.9mg,32％收率)。lcms(esi)m/z:526.1[m h]
。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.36(s,1h),8.29(s,1h),7.95(dd,j＝8.2,1.5hz,1h),7.89(d,j＝25.2hz,2h),7.56(s,1h),7.37(t,j＝8.0hz,1h),7.27(t,j＝55.0hz,1h),6.95(d,j＝7.8hz,1h),6.28(d,j＝45.9hz,1h),5.37(d,j＝6.6hz,1h),5.21(d,j＝5.9hz,1h),5.13(dd,j＝6.9,1.7hz,1h),5.08
–
5.00(m,2h),4.83(dd,j＝6.1,4.0hz,1h),3.79(s,2h),3.19(s,3h),2.05
–
1.94(m,2h),1.77
–
1.62(m,4h),1.24(s,3h)。
[1038]
实例60：化合物250
[1039]
化合物250(2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(二氟甲基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图40的方案58来合成。
[1040][1041]
可以如下合成第一中间体2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(二氟甲基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮。向小瓶中装入4-(二氟甲基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体q；44.5mg,0.21mmol)、3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(中间体p；65mg,0.19mmol)、me4tbutylxphos(9.1mg,0.02mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(7.0mg,0.01mmol)、k3po4(80.6mg,0.38mmol)和分子筛(注意碱和ms在添加前已火焰干燥)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的叔丁醇(2.5ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌15h。将反应物通过硅胶色谱法(2-15％meoh/dcm)纯化，得到2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(二氟甲基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮(61.7mg,68％收率)。lcms(esi)m/z:475.1[m h]
。
[1042]
可以如下合成第二中间体2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲
基)环丁基)苯基)-7-(二氟甲基)-3-氧代异吲哚啉-5-甲醛。在0℃下，将戴斯-马丁高碘烷(107.3mg,0.25mmol)添加到2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(二氟甲基)-6-(羟甲基)异吲哚啉-1-酮(60mg,0.13mmol)在dcm(0.84ml)的悬浮液中。将所得混合物升温至室温并搅拌一个周末。将反应物用饱和na2s2o3水溶液和饱和nahco3水溶液淬灭，并且将所得混合物剧烈搅拌30分钟。分离各层，并且将水相用4∶1 chcl3/ipa(3x)萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到2-(3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-7-(二氟甲基)-3-氧代异吲哚啉-5-甲醛。(57.6mg，96％收率)作为原样用于下一步的粗品。lcms(esi)m/z：473.1[m h]
。
[1043]
为了形成化合物250，向微波小瓶中装入2-(3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-7-(二氟甲基)-3-氧代异吲哚啉-5-甲醛(50mg，0.11mmol)、三乙胺(88.5μl，0.64mmol)和1-甲基环丁胺盐酸盐(64.4mg，0.53mmol)的甲醇(0.88ml)溶液。将反应物在微波烘箱中在100℃下加热3分钟。将反应物冷却至室温并且添加氰基硼氢化钠(20.0mg，0.32mmol)。将反应物在微波烘箱中在100℃下加热60分钟。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将有机层合并，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗残余物通过c18硅胶色谱法(20-60％乙腈/0.5％甲酸缓冲液)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到2-(3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-4-(二氟甲基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)异吲哚啉-1-酮(26.8mg，47％收率)。lcms(esi)m/z：542.2[m h]
。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.22(s，1h)，8.17(s，1h)，7.96-7.83(m，3h)，7.41(s，1h)，7.34(t，j＝8.0hz，1h)，7.41-7.12(m，1h)，6.76(d，j＝7.8hz，1h)，5.05(s，2h)，3.80(s，2h)，3.33-3.28(m，2h)，3.26-3.23(m，2h)，3.02(q，j＝13.8hz，2h)，2.73(s，3h)，2.04-1.94(m，2h)，1.77-1.63(m，4h)，1.24(s，3h)。
[1044]
实例61：化合物251
[1045]
化合物251(2-(4-(1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶-2-基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图41的方案59来合成。
[1046][1047]
可以如下合成第一中间体2-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶。向2,6-二氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)吡啶(中间体u；30mg,0.10mmol)在1,4-二噁烷(0.5ml)的溶液中添加甲硫醇钠(53mg,0.75mmol)，并且将反应物在60℃下加热16h。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到2-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶(29.8mg,96％收率)。粗残余物同样用于下一步。lcms(esi)m/z:309.2,311.0[m h]
。
[1048]
可以如下合成第二中间体((2-(4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)(1-甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯。向小瓶中装入k3po4(38.5mg,0.18mmol)和分子筛，然后火焰干燥。添加(1-甲基环丁基)((3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体r；54.2mg,0.14mmol)、2-氯-4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶(28mg,0.09mmol)、me4tbutylxphos(8.7mg,0.02mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(6.6mg,0.01mmol)。将小瓶用氮气吹扫，然后添加脱气的叔丁醇(0.45ml)，并且将小瓶密封。将反应混合物在110℃下搅拌15h。将粗产物通过硅胶色谱法(2-15％meoh/dcm)纯化，得到((2-(4-(1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)(1-甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(24mg,39％收率)lcms(esi)m/z:671.3[m h]
。
[1049]
为了制备化合物251，向((2-(4-(1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶-2-基)-3-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)甲基)(1-甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(24mg，0.04mmol)在dcm(0.18ml)的溶液中添加三氟乙酸(150μl)。将反应物在室温下搅拌2h。将反应物用饱和nahco3水溶液稀释，用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗产物通过半制备型lcms(50-70％梯度的乙腈/碳酸氢铵缓冲液，ph＝10)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到2-(4-(1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)-6-(甲硫基)吡啶-2-基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(19.5mg，96％收率)。lcms(esi)m/z：571.1[m h]
。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.20(s，1h)，8.04(d，j＝11.2hz，2h)，7.95(d，j＝1.1hz，1h)，6.63(d，j＝1.1hz，1h)，5.22(s，2h)，3.82(d，j＝7.4hz，2h)，3.24(s，2h)，3.07(s，3h)，2.50(s，3h)，2.39-2.28(m，2h)，2.18-2.07(m，1h)，2.04-1.93(m，2h)，1.90-1.78(m，1h)，1.76-1.62(m，4h)，1.23(s，3h)。
[1050]
实例62：化合物252
[1051]
可以如下合成化合物252(4-氯-2-(3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯)。
[1052][1053]
向7-氯-2-(3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-3-氧代异吲哚啉-5-甲醛(按照与化合物250，方案58，图40所示的相同程序制备；45mg，0.10mmol)和1-甲基环丁胺盐酸盐(35.9mg，0.30mmol)在dce(1.1ml)的搅拌溶液中添加nabh(oac)3(208.8mg，0.98mmol)。将悬浮液在室温下搅拌20h。蒸发挥发物并且将残余物通过半制备型lcms(15-35％梯度的乙腈/甲酸铵缓冲液，ph＝3.8)纯化。将适当的级分浓缩、冷冻和冻干，得到4-氯-2-(3-(3，3-二氟-1-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(((1-甲基环丁基)氨基)甲基)异吲哚啉-1-酮甲酸酯(11mg，21％收率)。lcms(esi)m/z：526.31[m h]
。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.39(s，1h)，8.18(s，1h)，7.95(d，j＝
7.7hz，1h)，7.75(s，2h)，7.40-7.29(m，2h)，6.77(d，j＝7.2hz，1h)，4.92(s，2h)，3.75(s，3h)，3.33-3.20(m，4h)，3.02(dd，j＝27.7，13.9hz，2h)，2.73(s，3h)，2.03-1.92(m，2h)，1.75-1.62(m，4h)，1.23(s，3h)。
[1054]
实例63：化合物253
[1055]
化合物253(2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)-3，3-二氟环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图42的方案60来合成。
[1056][1057]
向3-((1-(3-溴苯基)-3，3-二氟环丁基)二氟甲基)-4-甲基-4h-1，2，4-三唑(按照中间体e所示的程序制备；90.0mg，0.24mmol)、4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(52.7mg，0.26mmol)、碳酸铯(232.6mg，2.71mmol)在1，4-二噁烷(4ml)的溶液中添加(2-二环己基膦基-2
′
，6
′‑
二异丙氧基-1，1
′‑
联苯)[2-(2
′‑
氨基-1，1
′
联苯)]甲磺酸钯(ii)(39.8mg，0.05mmol，cas号：1445085-77-7)。将反应混合物在氮气保护下在100℃下搅拌16h并减压浓缩。将残余物通过rp-hplc(42％至72％acn/0.2％甲酸/水))纯化，得到2-(3-(1-(二氟(4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)-3，3-二氟环丁基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(18mg，15％收率)。lcms[m h]
＝499.0。
[1058]1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.33(s，1h)，8.10(d，j＝7.6hz，1h)，7.98(d，j＝7.6hz，1h)，7.85-7.74(m，2h)，7.67(s，1h)，7.47(t，j＝8.0hz，1h)，7.06(d，j＝8.0hz，1h)，5.12(s，2h)，3.79-3.66(m，2h)，3.28-3.18(m，2h)，2.97(s，3h)。
[1059]
实例64：化合物254和化合物255
[1060]
化合物254((s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((5-甲基-1h-1，2，4-三唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)和255((s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((3-甲基-1h-1，2，4-三唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图43的方案61夹合成。
[1061]
4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((5-甲基-1h-1，2，3-三唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图44的方案62来合成。
[1068][1069]
可以如下合成一组第一(异构)中间体，2-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-2h-1，2，3-三唑、1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-1h-1,2,3-三唑和1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-5-甲基-1h-1,2,3-三唑。在25℃下，向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基甲磺酸酯(1.5g,4.67mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(15ml)的溶液中添加4-甲基-2h-1,2,3-三唑(427mg,5.14mmol)和碳酸钾(1.3g,9.34mmol)。将混合物在100℃下搅拌2h并过滤。将滤液减压浓缩，并且将残余物通过rp-hplc(40％至70％acn/0.2％甲酸/水))纯化，得到1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-1h-1,2,3-三唑和1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-5-甲基-1h-1,2,3-三唑的混合物(240mg,17％收率)，为黄色油状物，和2-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-2h-1,2,3-三唑(600mg,42％收率)，为黄色油状物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.44
–
7.36(m,2h),7.23
–
7.14(m,2h),6.93(d,j＝7.6hz,1h),4.97(d,j＝6.4hz,2h),4.92(s,2h),4.82(d,j＝6.4hz,2h),2.14(s,3h)。
[1070]
这些中间体中的每一种可以分别反应形成产物化合物中的每一种。
[1071]
在手套箱中，将2-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-2h-1,2,3-三唑(70.0mg,0.23mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；88.8mg,0.25mmol)、碳酸铯(222.0mg,0.68mmol)和(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'联苯)]甲磺酸钯(ii)(19.0mg,0.02mmol,cas号：1445085-77-7)在1,4-二噁烷(4ml)中的溶液在100℃下搅拌2h。冷却后，将混合物过滤并且将滤液在减压条件下浓缩。将残余物通过rp-hplc(55至85％acn/(0.05％nh3·
h2o 10mm nh4hco3/水))纯化，得到化合物256(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((4-甲基-2h-1,2,3-三唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(100mg,42％收率)，为白色固体。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ
8.08(s,1h),7.94(s,1h),7.77(d,j＝8.4hz,1h),7.42
–
7.28(m,3h),6.80(d,j＝8.0hz,1h),5.16(d,j＝6.4hz,2h),5.08
–
5.04(m,4h),4.96(s,2h),4.34(d,j＝14.0hz,1h),3.34(s,1h),2.82
–
2.65(m,3h),2.38
–
2.27(m,6h),2.20(s,3h),2.19
–
2.03(m,2h),1.02
–
0.97(m,6h)。lcms[m h]
＝583.4。
[1072]
在手套箱中，将1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4-甲基-1h-1,2,3-三唑和1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-5-甲基-1h-1,2,3-三唑(240mg,0.78mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；305mg,0.86mmol)、碳酸铯(761mg,2.34mmol)、(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'联苯)]甲磺酸钯(ii)(65mg,0.08mmol,cas号：1445085-77-7)在1,4-二噁烷(10ml)中的溶液在100℃下搅拌16h，并减压浓缩。将残余物首先通过rp-hplc(50％至80％acn/(0.05％nh3·
h2o 10mm nh4hco3/水))纯化，然后通过手性sfc(柱＝daicel chiralpak ig；柱尺寸＝250mm
×
30mm
×
10μm；检测波长＝220nm；流速＝80ml/min；运行时间＝4.0min；柱温＝25℃)用0.1％氢氧化铵-60％乙醇-二氧化碳)纯化，得到两种化合物，其特征如下。
[1073]
化合物257：(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((4-甲基-1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1，保留时间＝0.858min)(23mg,44％收率)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.09(s,1h),7.95(s,1h),7.80
–
7.79(m,1h),7.44
–
7.33(m,2h),7.22(s,1h),6.77(d,j＝7.2hz,1h),5.08(s,2h),5.06(s,4h),5.01(s,2h),4.34(d,j＝14.4hz,1h),3.35(s,1h),2.83
–
2.66(m,3h),2.40
–
2.33(m,2h),2.30(s,4h),2.18(s,4h),2.14
–
2.05(m,1h),1.03
–
0.98(m,6h)。
[1074]
化合物258：(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((5-甲基-1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2，保留时间＝1.766min)(5.5mg,11％收率)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.08(s,1h),7.94(s,1h),7.82
–
7.80(m,1h),7.36(t,j＝7.6hz,1h),7.27
–
7.23(m,2h),6.63(d,j＝7.6hz,1h),5.20(d,j＝6.4hz,2h),5.08(d,j＝6.4hz,2h),5.02(s,2h)，4.97(s，2h)，4.34(d，j＝14.0hz，1h)，3.34(s，1h)，2.84-2.63(m，3h)，2.41-2.25(m，6h)，2.21-2.04(m，2h)，1.55(s，3h)，1.02-0.97(m，6h)。
[1075]
实例66：化合物259和化合物260
[1076]
化合物259(2-(3-(3-((r)-氟(4-苯基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)和260(2-(3-(3-((s)-氟(4-苯基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图45的方案63来合成。
[1077][1078]
可以如下合成第一中间体4-苯基-4h-1，2，4-三唑。向甲酰肼(10.0g，166.5mmol)在甲醇(100ml)的溶液中添加三乙氧基甲烷(33.2ml，199.8mmol)。将混合物在80℃下搅拌2h，然后添加苯胺(18.2ml，199.8mmol)。将所得混合物在80℃下再搅拌16h并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到4-苯基-4h-1，2，4-三唑(22g，91％收率)，为白色固体。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.17-9.11(m，2h)，7.73-7.69(m，2h)，7.59-7.54(m，2h)，7.48-7.42(m，1h)。
[1079]
可以如下合成第二中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-苯基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇。在-50℃下，在5分钟内，向4-苯基-4h-1，2，4-三唑(3.61g，24.89mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(150ml)的溶液中添加正丁基锂(2.5m在己烷中，9.9ml，24.8mmol)。将所得混合物在-50℃下搅拌1h，然后滴加3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(4.00g,16.6mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(10ml)中的溶液。使反应混合物在1h内升温至0℃，然后用水(30ml)淬灭。将所得溶液用二氯甲烷(3x100ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-苯基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(2.50g,39％收率)，为黄色固体。lcms[m h]
＝386.0和388.0。
[1080]
可以如下合成第三中间体3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-苯基-4h-1,2,4-三唑。在0℃下，向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-苯基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇(2.5g,6.5mmol)在二氯甲烷(120ml)的溶液中添加n,n-二乙基氨基三氟化硫(dast)(5.1ml,38.9mmol)。将混合物在0℃下搅拌16h，并通过添加饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)淬灭。将所得混合物用二氯甲烷(3x100ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％-4％)纯化，得到3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-苯基-4h-1,2,4-三唑(1.7g,68％收率)，为黄色油状物。lcms[m h]
＝388.0和390.0。
[1081]
在手套箱中，将3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-苯基-4h-1,2,4-三唑(50.0mg,0.13mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；50.4mg,0.14mmol)、碳酸铯(126mg,0.39mmol)和(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'联苯)]甲磺酸钯(ii)(10.8mg,0.01mmol,cas号1445085-77-7)在1,4-二噁烷(2ml)中的混合物在100℃下搅拌16h，并在减压条件下浓缩。将残余物通过制备型tlc(溶剂梯度：10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到2-(3-(3-(氟(4-苯基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮的外消旋物(50mg,59％收率)，为黄
色油状物。
[1082]
将上述混合物通过手性sfc(柱＝daicel chiralpak ig；柱尺寸＝250mm
×
30mm
×
10μm；检测波长＝220nm；流速＝80ml/min；流动相：a：co2b：乙醇(0.05％dea)；等度：40％b)用0.1％氢氧化铵)进一步纯化，得到两种异构体，其特征如下。
[1083]
2-(3-(3-((r)-氟(4-苯基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1，保留时间＝1.085min)(23mg，46％收率)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.52(s，1h)，8.09(s，1h)，7.95(s，1h)，7.87(d，j＝7.6hz，1h)，7.40-7.33(m，5h)，6.90-6.86(m，2h)，6.82(d，j＝8.0hz，1h)，5.73(d，j＝46.0hz，1h)，5.72(d，j＝6.4hz，1h)，5.32-5.27(m，1h)，5.26-5.21(m，1h)，5.04-4.92(m，2h)，4.92-4.90(m，1h)，4.34(d，j＝14.4hz，1h)，3.34(d，j＝14.0hz，1h)，2.85(d，j＝10.8hz，1h)，2.79-2.68(m，2h)，2.42-2.09(m，8h)，1.01(d，j＝6.4hz，3h)，0.98(d，j＝6.4hz，3h)。lcms：[m h]
＝663.2。
[1084]
2-(3-(3-((s)-氟(4-苯基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2，保留时间＝1.425min)(12mg，24％收率)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.51(s，1h)，8.08(s，1h)，7.94(s，1h)，7.87-7.85(m，1h)，7.39-7.32(m，5h)，6.90-6.85(m，2h)，6.82(d，j＝8.0hz，1h)，5.73(d，j＝46.0hz，1h)，5.72(d，j＝6.4hz，1h)，5.30-5.27(m，1h)，5.24-5.21(m，1h)，5.04-4.93(m，2h)，4.93-4.91(m，1h)，4.33(d，j＝14.4hz，1h)，3.36-3.31(m，1h)，2.79(d，j＝11.6hz，1h)，2.76-2.64(m，2h)，2.38-2.32(m，2h)，2.31-2.29(m，1h)，2.28(s，3h)，2.18-2.05(m，2h)，1.01(d，j＝6.4hz，3h)，0.98(d，j＝6.4hz，3h)。lcms：[m h]
＝663.2。
[1085]
实例67：化合物261和化合物262
[1086]
化合物261和262可以根据图46的方案64来合成。每个异构体都已被解析，而相应立体化学的绝对归属尚未解析。
[1087][1088]
可以如下合成第一中间体2-(3-溴苯基)-2-重氮乙酸甲酯。向2-(3-溴苯基)乙酸甲酯(30g,130.9mmol)和4-乙酰氨基苯磺酰基叠氮化物(47.2g,196.4mmol)在乙腈(300ml)的溶液中添加1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(29.4ml,196.55mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h，并通过添加饱和氯化铵水溶液(100ml)淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至5％)纯化，得到2-(3-溴苯基)-2-重氮乙酸甲酯
(30g,90％收率)，为黄色固体。
[1089]
可以如下合成第二中间体2-(2-溴乙氧基)-2-(3-溴苯基)乙酸甲酯。向2-溴乙醇(10ml,141.1mmol)和2-(3-溴苯基)-2-重氮乙酸甲酯(30g,117.6mmol)在甲苯(250ml)的溶液中添加乙酸铑(ii)二聚体(129.3mg,0.29mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌1h并用水(200ml)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x200ml)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至5％)纯化，得到2-(2-溴乙氧基)-2-(3-溴苯基)乙酸甲酯(35g,85％收率)，为无色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.66(s,1h),7.52(d,j＝8.0hz,1h),7.43(d,j＝7.6hz,1h),7.31
–
7.29(m,1h),4.97(s,1h),3.96
–
3.93(m,1h),3.81
–
3.79(m,1h),3.78(s,3h)，3.57
–
3.54(m,2h)。
[1090]
可以如下合成第三中间体2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-甲酸甲酯。在0℃下，向氢化钠(60％,4.4g,110.8mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(100ml)和四氢呋喃(600ml)的混合物中滴加2-(2-溴乙氧基)-2-(3-溴苯基)乙酸甲酯(30.0g,85.2mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(100ml)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌1h，然后在25℃下再搅拌1h。将反应物通过添加饱和氯化铵水溶液(30ml)和水(500ml)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x150ml)萃取。将合并的有机相用盐水(100ml)洗涤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至10％)纯化，得到2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-甲酸甲酯(20g,87％收率)，为黄色油状物。
[1091]
可以如下合成第四中间体(2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-基)甲醇。向2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-甲酸甲酯(20g,73.8mmol)在四氢呋喃(500ml)的溶液中添加硼氢化钠(5.58g,147.5mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2h，然后通过添加饱和氯化铵水溶液(100ml)淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。减压浓缩合并的有机层。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至25％)纯化，得到(2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-基)甲醇(17g,95％收率)，为淡黄色油状物。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.51
–
7.50(m,1h),7.43
–
7.40(m,1h),7.25
–
7.19(m,2h),4.58
–
4.54(m,2h),3.64
–
3.57(m,2h),3.26
–
3.23(m,1h),2.90
–
2.89(m,1h),2.58
–
2.55(m,1h)。
[1092]
可以如下合成第五中间体2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-甲醛。在0℃下，向(2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-基)甲醇(11.0g,45.3mmol)在二氯甲烷(200ml)的溶液中分批添加戴斯-马丁高碘烷(21.1g,49.8mmol)。将混合物在25℃下搅拌6h并通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，并且将残余物通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚，梯度0％至20％)纯化，得到2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-甲醛(5g,46％收率)，为无色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.61(s,1h),7.54
–
7.53(m,1h),7.45
–
7.42(m,1h),7.25
–
7.23(m,2h),4.68
–
4.61(m,2h),3.27
–
3.20(m,1h),2.76
–
2.70(m,1h)。
[1093]
可以如下合成第六中间体(2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇。在-50℃下，在5分钟内，向4-甲基-4h-1,2,4-三唑(2.6g,31.1mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(200ml)的溶液中添加正丁基锂(2.5m在己烷中，12.4ml,31.1mmol)。将所得混合物在-50℃下搅拌1h，然后滴加2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-甲醛(5.0g,20.7mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(10ml)中的溶液。使反应混合物在1h内升温至0℃，然后用水(3ml)淬灭。将所得溶液减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到(2-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-2-基)(4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲醇
((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((3-甲基-1h-吡唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)可以根据图47的方案65来合成。
[1101][1102]
可以如下合成第一对中间体1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-5-甲基-1h-吡唑和1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-3-甲基-1h-吡唑。将(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基甲磺酸酯(1.0g，3.11mmol)、碳酸钾(861mg，6.23mmol)和5-甲基-1h-吡唑(281mg，3.42mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液在100℃下搅拌2h并过滤。将滤液减压浓缩，并且将残余物首先通过rp-hplc(33％至63％acn/0.225％甲酸/水))纯化，然后通过手性sfc(柱＝cas-sh-ana-sfc-g；柱尺寸＝250mm
×
30mm
×
10μm；检测波长＝220nm；流速＝2.5ml/min；运行时间＝6min；柱温＝40℃)用0.05％dea-40％乙醇-二氧化碳)纯化，得到异构体，其特征如下：
[1103]
1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-3-甲基-1h-吡唑(峰1，保留时间＝2.528min)(160mg，16.6％收率)，为无色油状物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.37(d，j＝2.0hz，1h)，7.21-7.17(m，1h)，6.97(d，j＝2.0hz，1h)，6.91(d，j＝2.0hz,1h),6.85(d,j＝8.0hz,1h),5.90(s,2h),5.01
–
4.91(m,4h),4.59(s,2h),2.20(s,3h)。
[1104]
1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-5-甲基-1h-吡唑(峰2，保留时间＝3.044min)(55mg,8.0％收率)，为无色油状物。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.41
–
7.37(m,2h),7.17
–
7.14(m,1h),6.81(d,j＝2.0hz 1h),6.72(d,j＝8.0hz,1h),5.85(s,2h),5.15
–
4.93(m,4h),4.63(s,2h),1.47(s,3h)。
[1105]
在手套箱中，将1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-5-甲基-1h-吡唑(50mg,0.16mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；58mg,0.16mmol)、碳酸铯(159mg,0.49mmol)和(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'联苯)]甲磺酸钯(ii)(13.6mg,0.02mmol,cas号：1445085-77-7)在1,4-二噁烷(5ml)中的混合物在100℃下搅拌6h，并减压浓缩。将残余物通过rp-hplc(53至83％acn/(0.05％nh3·
h2o 10mm nh4hco3/水))纯化，得到化合物263：(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((5-甲基-1h-吡唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(34mg,35％收率)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.07(s,1h),7.94
–
7.90(m,2h),7.40
–
7.30(m,2h),6.93(s,1h),6.72(d,j＝8.0hz,1h),5.84(s,1h),5.21(d,j＝6.4hz,2h),5.04(d,j＝6.0hz,2h),4.94(s,2h),4.69(s,2h),4.33(d,j＝14.4hz,1h),3.34
–
3.33(m,1h),2.81
–
2.71(m,3h),2.37
–
2.28(m,6h),2.15
–
2.08(m,2h),1.47(s,3h),1.03
–
0.97(m,6h)。lcms：[m h]
＝582.3。
[1106]
在手套箱中，将1-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-3-甲基-1h-吡唑
(160mg,0.52mmol)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(185mg,0.52mmol)、碳酸铯(509mg,1.56mmol)和(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'联苯)]甲磺酸钯(ii)(43.6mg,0.05mmol，cas号：1445085-77-7)在1，4-二噁烷(5ml)中的混合物在100℃下搅拌2h，并减压浓缩。将残余物通过rp-hplc(53至83％acn/(0.05％nh3·
h2o 10mm nh4hco3/水))纯化，得到化合物264：(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-(3-(3-((3-甲基-1h-吡唑-1-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(151mg，49％收率)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.08(s，1h)，7.94(s，1h)，7.86-7.83(m，1h)，7.38(t，j＝8.0hz，1h)，7.17(d，j＝2.0hz，1h)，6.92(d，j＝2.4hz，1h)，6.79(d，j＝7.6hz，1h)，5.87(d，j＝2.4hz，1h)，5.09-5.02(m，6h)，4.66(s，2h)，4.33(d，j＝14.4hz，1h)，3.35-3.31(m，1h)，2.78-2.69(m，3h)，2.37-2.34(m，3h)，2.31(s，3h)，2.30(s，3h)，2.29-2.14(m，2h)，1.03-0.95(m，6h)。lcms：[m h]
＝582.3。lcms：[m h]
＝582.3。
[1107]
实例69：化合物265
[1108]
可以如下合成化合物265(2-(6-环丁基-4-(3-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)。
[1109][1110]
向2-(6-氯-4-(3-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(类似于方案46，图28中的中间体制备)(20mg，0.043mmol，1当量)和四(三苯基膦)钯(0)(5.0mg，0.0043mmol，0.1当量)在四氢呋喃(0.22ml)的溶液中添加环丙基溴化锌(0.17ml 0.5m的thf溶液，0.086mmol，2当量)，并且将反应物在室温下搅拌1.5h，此时将其加热至60℃并搅拌22h。
[1111]
将溶液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过制备型hplc纯化，得到2-(6-环丁基-4-(3-((4-甲基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(7.5mg，36％)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.23(s，1h)，8.14(d，j＝1.4hz，1h)，8.12-8.04(m，2h)，7.85-7.76(m，1h)，6.80(d，j＝1.4hz，1h)，5.28(d，j＝1.8hz，2h)，4.96(d，j＝6.2hz，2h)，4.85(d，j＝6.2hz，2h)，3.57(d，j＝5.6hz，3h)，3.18(s，3h)，2.32-2.16(m，4h)，2.08-1.81(m，2h)。lcms：484.1[m h]
。
[1112]
实例70：化合物266
[1113]
可以如下合成化合物266((s)-2-(3-(3-((4-(二氟甲基)-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)。
[1114][1115]
可以如下合成第一中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1，2，4-三唑-5-基)甲醇。向1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1，2，4-三唑(413mg，1.97mmol，1当量)在thf(7.8ml，0.25m)的-78℃溶液中添加正丁基锂(1.2ml 1.6m的己烷溶液，3.08mmol，1当量)。将溶液在-78℃下短暂搅拌，然后升温至-40℃。1h后，在thf(1ml)中添加3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(500mg，1.97mmol，1当量)，并且将溶液在-40℃下搅拌1h。1h后，将反应物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)甲醇(703mg,81％)。
[1116]
可以如下合成第二中间体5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑。向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)甲醇(250mg,0.57mmol,1当量)在二氯甲烷(3.8ml)中的0℃溶液中添加吡啶(0.46ml,5.6mmol,10当量)，随后添加亚硫酰氯(0.21ml,2.8mmol,5当量)。将反应物在0℃下搅拌30min，并随后升温至室温，并再搅拌1.5h。将溶液用饱和碳酸氢钠水溶液小心地淬灭，倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过二氧化硅柱色谱法使用庚烷/乙酸异丙酯梯度纯化，得到5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑(237mg,91％)。
[1117]
可以如下合成第三中间体5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑。向5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑(237mg,0.52mmol,1当量)在乙酸(3.4ml)的溶液中添加锌(169mg,2.6mmol,5当量)。将悬浮液在室温下搅拌5h，此时将其过滤，并且将滤液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中。将溶液用二氯甲烷萃取三次，并且将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过二氧化硅柱色谱法使用庚烷/乙酸异丙酯梯度纯化，得到5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑(199mg,91％)。
[1118]
可以如下合成第四中间体3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-4h-1,2,4-三唑。向5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑(199mg,0.47mmol,1当量)在二氯甲烷(2.3ml)的溶液中添加三氟乙酸(0.71ml,9.4mmol,20当量)。将溶液在室温下搅拌3h，此时添加另一份三氟乙酸(0.3ml,4.0mmol,8.6当量)。将溶液在室温下搅拌22h，并倒入饱和碳酸氢钠水溶液中。将溶液用二氯甲烷萃取三次，并且将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过二氧化硅柱色谱法使用
(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1，2，4-三唑。向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1，2，4-三唑-5-基)甲醇(703mg，1.6mmol，1当量)在二氯甲烷(16.0ml)中的-78℃溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(1.76ml 1m的二氯甲烷溶液，1.76mmol，1.1当量)。20min后将反应物升温至0℃并搅拌1h。1h后，将反应物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑(666mg,94％)。
[1125]
可以如下合成第二中间体3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4h-1,2,4-三唑。向5-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-1,2,4-三唑(666mg,1.51mmol,1当量)在二氯甲烷(7.6ml)的溶液中添加三氟乙酸(1.7ml)。将反应物在室温下搅拌4h，此时将溶液小心地倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4h-1,2,4-三唑(322mg,69％)。
[1126]
可以如下合成第三中间体3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑。向3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4h-1,2,4-三唑(333mg,1.07mmol,1当量)在乙腈(7.1ml)的溶液中添加氯二氟乙酸钠(211mg,1.4mmol,1.3当量)和碳酸钾(170mg,1.7mmol,1.6当量)。将反应物加热至100℃持续7.5h。将溶液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过制备型hplc纯化，得到3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑(24.5mg,6.3％)。
[1127]
可以如下合成第四中间体2-(3-(3-((4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向含有3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑(24.5mg,0.069mmol,1当量)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；37mg,0.10mmol,1.5当量)、me4tbuxphos pd g3(3.1mg,0.0035mmol,0.05当量)、me4tbuxphos(3.5mg,0.0069mmol,0.10当量)、碳酸铯(49.5mg,0.15mmol,2.2当量)的小瓶中添加叔丁醇(0.69ml)。将反应物在100℃下加热20h，此时将其倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过制备型hplc纯化，得到2-(3-(3-((4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(14mg,32％)。
[1128]
分离前一步骤的产物得到2-(3-(3-((r)-(4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮和2-(3-(3-((s)-(4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。
[1129]
在最后一步中，对2-(3-(3-((4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚
啉-1-酮(14mg)进行手性sfc，得到异构体混合物(化合物267、268)2-(3-(3-((r)-(4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮和2-(3-(3-((s)-(4-(二氟甲基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。获得5mg的每种对映体。
[1130]
第一异构体：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.98(s,1h),7.99(s,1h),7.94
–
7.84(m,2h),7.72(t,j＝2.0hz,1h),7.63(t,j＝58.1hz,1h),7.38(t,j＝8.0hz,1h),7.10
–
7.03(m,1h),6.42(d,j＝46.0hz,1h),5.36(d,j＝6.9hz,1h),5.24(dd,j＝6.4,1.5hz,1h),5.20(dd,j＝6.9,2.1hz,1h),5.11(s,2h),4.83(dd,j＝6.4,4.0hz,1h),4.22(d,j＝14.4hz,1h),3.38(d,j＝14.3hz,1h),2.63(dt,j＝13.6,9.6hz,2h),2.52-2.48(m,1h),2.35
–
2.17(m,3h),2.14(s,3h),2.02
–
1.86(m，2h)，0.93(d，j＝6.6hz，3h)，0.88(d，j＝6.6hz，3h)。lcms：637.2[m h]
。
[1131]
第二异构体：1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.98(s，1h)，7.99(s，1h)，7.95-7.86(m，2h)，7.71(t，j＝2.0hz，1h)，7.63(t，j＝58.1hz，1h)，7.38(t，j＝8.0hz，1h)，7.07(d，j＝7.7hz，1h)，6.42(d，j＝46.1hz，1h)，5.36(d，j＝6.9hz，1h)，5.24(dd，j＝6.5，1.5hz，1h)，5.20(dd，j＝6.9，2.1hz，1h)，5.11(s，2h)，4.83(dd，j＝6.4，4.0hz，1h)，4.22(d，j＝14.4hz，1h)，3.38(d，j＝14.3hz，1h)，2.68-2.54(m，2h)，2.52-2.48(m，1h)，2.34-2.17(m，3h)，2.14(s，3h)2.02-1.82(m，2h)，0.93(d，j＝6.6hz，3h)，0.88(d，j＝6.6hz，3h)。lcms：637.3[m h]
。
[1132]
实例72：化合物269和270
[1133]
可以如下合成化合物269(2-(3-(3-((r)-氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)和2702-(3-(3-((s)-氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。
[1134][1135]
可以如下合成第一中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲醇。在-78℃下，向4-氟-1-甲基-1h-咪唑(71mg，0.71mmol，1.2当量)在thf(2.9ml)的溶液中添加正丁基锂(0.4ml 1.6m的己烷溶液，0.64mmol，1.1当量)。5min后将反应物升温至-40℃并在该温度下搅拌30min，此时将反应物再次冷却至-78℃并且在少量thf中添加3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(140mg,0.59mmol,1当量)。将溶液在-78℃下搅拌1h。1h后，将反应物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到(3-(3-溴
苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲醇(123mg,62％)。
[1136]
可以如下合成第二中间体2-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-氟-1-甲基-1h-咪唑。向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲醇(123mg,0.36mmol,1当量)在二氯甲烷(3.6ml)中的-78℃溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(0.40ml 1m的二氯甲烷溶液，0.40mmol,1.1当量)。将反应物在-78℃下短暂搅拌，然后升温至0℃并在该温度下搅拌2h。2h后，将反应物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到2-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-氟-1-甲基-1h-咪唑(65mg,62％)。
[1137]
可以如下合成第三中间体2-(3-(3-(氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向含有2-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-氟-1-甲基-1h-咪唑(34mg,0.098mmol,1当量)、(s)-6-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(中间体s；35mg,0.098mmol,1当量)、me4tbuxphos pd g3(3.5mg,0.0039mmol,0.04当量)、me4tbuxphos(4.9mg,0.0098mmol,0.10当量)、k3po4(43mg,0.20mmol,2.0当量)的小瓶中添加叔丁醇(0.49ml)。将反应物在80℃下加热24h，此时将其倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，并通过硅胶柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到2-(3-(3-(氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(16mg,26％)。
[1138]
可以如下分离异构体混合物，化合物269 2-(3-(3-((r)-氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮和化合物270 2-(3-(3-((s)-氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。
[1139]
对2-(3-(3-(氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(16mg)进行手性sfc，得到分离的化合物：2-(3-(3-((r)-氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮和2-(3-(3-((s)-氟(4-氟-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-6-(((s)-2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。分离出4.6mg第一异构体和4.7mg第二异构体。
[1140]
第一异构体：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.03
–
7.88(m,3h),7.49(t,j＝2.0hz,1h),7.39(t,j＝8.0hz,1h),7.00(dt,j＝7.9,1.3hz,1h),6.73(dd,j＝8.2,1.6hz,1h),6.02(dd,j＝46.3,1.3hz,1h),5.40(d,j＝6.7hz,1h),5.22
–
5.14(m,2h),5.08(dd,j＝6.7,2.2hz,1h),5.00(d,j＝17.5hz,1h),4.80(dd,j＝6.1,3.4hz,1h),4.21(d,j＝14.3hz,1h),3.38(d,j＝14.3hz,1h),3.15(s,3h),2.62(t,j＝11.9hz,2h),2.33
–
2.17(m,4h),2.15(s,3h),1.94(q,j＝9.6hz,2h),0.93(d,j＝6.6hz,3h),0.88(d,j＝6.6hz,3h)。lcms：618.3[m h]
。
[1141]
第二异构体：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.04
–
7.90(m,3h),7.49(t,j＝2.0hz,1h),7.39(t,j＝8.0hz,1h),7.03
–
6.96(m,1h),6.73(dd,j＝8.2,1.6hz,1h),6.12
–
5.92(m,1h),5.40(d,j＝6.6hz,1h),5.24
–
5.13(m,2h),5.08(dd,j＝6.8,2.2hz,1h),5.00(d,j＝17.6hz,1h),4.80(dd,j＝6.1,3.5hz,1h),4.22(d,j＝14.4hz，1h)，3.38(d，j＝14.3hz，1h)，2.62(t，j＝11.3hz，2h)，2.33-2.17(m，4h)，2.15(s，3h)，1.95(q，j＝10.4hz，2h)，0.93(d，j＝6.6hz，3h)，0.88(d，j＝6.6hz，3h)。lcms：618.3[m h]
。
[1142]
实例73：化合物271和272
[1143]
可以如下合成化合物271((s)-2-(3-(3-((4-乙基-4h-1，2，4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)和化合物272((r)-2-(3-(3-((4-乙基-4h-1，2，4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮)。
[1144][1145]
可以如下合成第一中间体(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-乙基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇。在-40℃下，向4-乙基-4h-1，2，4-三唑(121mg，1.24mmol，1.2当量)在二甲氧基乙烷(5.2ml)的溶液中添加正丁基锂(0.71ml 1.6m的己烷溶液，1.14mmol，1.1当量)。将溶液在-40℃下搅拌30min，此时在少量二甲氧基乙烷中添加3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-甲醛(250mg，1.04mmol，1当量)。将溶液在-40℃下搅拌40min。40min后，将反应物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-乙基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇(88mg，26％)。
[1146]
可以如下合成第二中间体3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-乙基-4h-1，2，4-三唑。在-78℃下，向(3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)(4-乙基-4h-1，2，4-三唑-3-基)甲醇(146mg,0.43mmol,1当量)在二氯甲烷(2.2ml)的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(0.52ml 1m的二氯甲烷溶液，0.52mmol,1.2当量)，并且将反应物升温至0℃。1.5h后，将反应物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠干燥，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法使用二氯甲烷/甲醇梯度纯化，得到3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-乙基-4h-1,2,4-三唑(92mg,63％)。
[1147]
可以如下合成第三中间体2-(3-(3-((4-乙基-4h-1,2,4-三唑-3-基)氟甲基)氧杂环丁烷-3-基)苯基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向含有3-((3-(3-溴苯基)氧杂环丁烷-3-基)氟甲基)-4-乙基-4h-1,2,4-三唑(45mg,0.13mmol,1当量)、4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(27mg,0.13mmol,1当量)、me4tbuxphos pd g3(4.7mg,0.0053mmol,0.04当量)、me4tbuxphos(6.6mg,0.013mmol,0.10当量)、k3po4(56mg,0.26mmol,2.0当量)的小瓶中添加
(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。在氮气保护下，将6-溴-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(2.0g,7.14mmol)、双(频哪醇)二硼(2.2g,8.57mmol)、乙酸钾(2.1g,21.43mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(0.5g,0.71mmol)在1,4-二噁烷(70ml)中的混合物在80℃下搅拌3h。将反应物减压浓缩，并且将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至10％)纯化，得到6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(2.3g,98％收率)，为棕色固体。lcms[m h]
＝328.2。
[1157]
可以如下合成第二中间体6-(6-乙基吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。在氮气保护下，将6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(2.5g,7.74mmol)、2-溴-6-乙基-吡啶(1.2g,6.45mmol)、碳酸铯(6.3g,19.35mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(471.9mg,0.64mmol)在1,4-二噁烷(65ml)中的混合物在90℃下搅拌16h。将反应溶液减压浓缩，并且将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲醇/二氯甲烷，梯度0％至6％)纯化，得到6-(6-乙基吡啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(1.7g,86％收率)，为白色固体。lcms[m h]
＝307.0。
[1158]
可以如下合成第三中间体6-(6-乙基哌啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮。向6-(6-乙基-2-吡啶基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(700mg,2.29mmol)在甲醇(20ml)和乙酸(4ml)的溶液中添加氧化铂(iv)(52mg,0.23mmol)。然后将混合物在h2气氛(15psi)下，在25℃下搅拌16h。将反应溶液过滤，然后将滤液浓缩，得到粗品6-(6-乙基-2-哌啶基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(700mg,98％收率)，为白色固体。lcms[m h]
＝313.1。
[1159]
在氮气保护下，将3-((1-(3-溴苯基)-3,3-二氟环丁基)甲基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑(376mg,1.15mmol)、6-(6-乙基哌啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(300mg,0.96mmol)、碳酸铯(939mg,2.88mmol)和xantphos pd g3(199mg,0.19mmol)在2-甲基-2-丙醇(10ml)中的混合物在100℃下搅拌16h。将混合物减压浓缩，然后将残余物通过制备型tlc(溶剂梯度：10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到异构体混合物，化合物273和274：2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-(6-乙基哌啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(130mg,24％收率)，为白色固体。
[1160]
将上述混合物通过手性sfc(柱＝daicel chiralcel od-h；柱尺寸＝250mm
×
30mm
×
5μm；检测波长＝220nm；流速＝80ml/min；流动相：a：co2b：乙醇(0.05％dea)；梯度5％至40％；柱温度：40℃)用0.1％氢氧化铵)进一步纯化，得到暂时指定的：
[1161]
2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((2s,6s)-6-乙基哌啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰1，保留时间＝4.641min)(44mg,32％收率)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.16(s,1h),8.10(s,1h),8.03(s,1h),7.73(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.49
–
7.47(m,1h),7.38(t,j＝8.0hz,1h),6.81(d,j＝8.0hz,1h),5.06(s,2h),3.92
–
3.87(m,1h),3.35(s,2h),3.28
–
3.22(m,2h),3.10
–
2.97(m,2h),2.76(s,3h),2.67
–
2.58(m,1h),1.98
–
1.91(m,1h),1.88
–
1.79(m,2h),1.63
–
1.44(m,4h),1.21
–
1.09(m,1h),0.96(t,j＝7.6hz,3h)lcms:[m h]
＝574.3。
[1162]
2-(3-(3,3-二氟-1-((4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)甲基)环丁基)苯基)-6-((2r,6r)-6-乙基哌啶-2-基)-4-(三氟甲基)异吲哚啉-1-酮(峰2，保留时间＝4.845min)(51mg,37％收率)。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.16(s,1h),8.10(s,1h),8.03(s,1h),7.73(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.49
–
7.47(m,1h),7.38(t,j＝8.0hz,1h),6.81(d,j＝8.0hz,1h),
5.06(s,2h),3.92
–
3.87(m,1h),3.35(s,2h),3.28
–
3.22(m，2h)，3.08-2.97(m，2h)，2.76(s，3h)，2.68-2.59(m，1h)，1.99-1.91(m，1h)，1.88-1.79(m，2h)，1.63-1.45(m，4h)，1.21-1.10(m，1h)，0.96(t，j＝7.6hz，3h)。lcms：[m h]
＝574.3。
[1163]
实例75：其他异吲哚啉-1-酮化合物的定量数据
[1164]
可以根据本文的方法合成另外的异吲哚啉-1-酮化合物。此类化合物的实例的定量数据如下。
[1165]
表2关于另外的异吲哚啉-1-酮化合物的定量分析数据
[1166]
[1167]
[1168]
[1169]
[1170]
[1171]
[1172]
[1173]
[1174]
[1175]
[1176]
[1177]
[1178]
[1179]
[1180]
[1181]
[1182]
[1183]
[1184]
[1185]
[1186]
[1187]
[1188]
[1189]
[1190]
[1191]
[1192]
[1193]
[1194]
[1195]
[1196]
[1197]
[1198]
[1199]
[1200]
[1201]
[1202]
[1203]
[1204]
[1205]
[1206]
[1207]
[1208]
[1209]
[1210]
[1211]
[1212]
[1213]
[1214]
[1215]
[1216]
[1217]
[1218]
[1219]
[1220]
[1221]
[1222]
[1223]
[1224][1225]
实例76：cbl-b和c-cbl lck ub tr-fret测定
[1226]
在384孔聚丙烯板(#p-05525-bc；labcyte)中将化合物在dmso中连续稀释3倍，以产生含有10种浓度的每种化合物的源板，最高浓度＝2mm。使用labcyte echo将80nl的dmso或化合物转移到黑色384孔proxiplate(#6008260；perkinelmer)的每个孔中。制备1x测定缓冲液(50mm hepes ph7.0，100mm nacl，0.01％bsa，0.01％triton-x100，1mm dtt)、2x酶溶液(含16nm生物素-cbl-b或12nm生物素-c-cbl的1x测定缓冲液)、2x激酶混合物(含120nm his-lck、1mm atp、10mm mgcl2的测定缓冲液)和2.33x检测混合物(4.66x溶液1：163nm抗ha-d2抗体(#610hadab；perkinelmer)、27.96nm链霉抗生物素蛋白-eu(#ad0062；perkinelmer)、含1.398mm edta的1x测定缓冲液 4.66x溶液2：含2.796μm ube2d2/甲基化-ha-泛素硫酯加合物(bostonbiochem)的1x测定缓冲液)。将4μl的2x酶溶液添加到每个含有化合物的孔中，短暂离心混合，并在室温下温育60min。添加4μl的2x激酶混合物，短暂离心混合，并在室温下温育90min。将6μl的检测混合物添加到所有孔中并短暂离心，然后在室温下温育20min。使用envision，利用340nm的激发波长，收集发射时615nm和665nm的波长，每孔进行4次激发收集，从而读取板的tr-fret。使用无lck作为低对照并且使用dmso作为高对照来产生ic
50
。
[1227]
表3
[1228]
示例性异吲哚啉-1-酮化合物的选择性数据
[1229][1230]
实例77：pbmc il-2测定
[1231]
对本文所述化合物的免疫应答可以通过根据以下方案进行的pbmc il-2测定来评估。将pbmc(#a19k379053、a19k261022；tpcs)解冻成完全培养基：1640培养基(#2085568；gibco)、10％fbs(#sh30084.03；hyclone)和1x青霉素/链霉素(pen/strep)。使用tecan evo在384孔聚丙烯板(#p-05525-bc；labcyte)中将化合物在dmso中连续稀释3倍，以产生含有10种浓度的每种化合物的源板，最高浓度＝4mm。使用labcyte echo将化合物分配到96孔板(#6005680；perkinelmer)中；每个对照和化合物的最终分配体积为1000nl(最终dmso＝0.5％)。回收过夜后，将细胞以2x105个细胞/孔接种到含有化合物的96孔板中，并在37℃、5％co2下温育30min。通过添加在完全培养基中稀释的20μl/孔1/10 transact(#130-111-160；miltenyi)刺激细胞，以600rpm在振荡器上放置2min，并在37℃、5％co2下温育24h。将板以1200rpm离心5min，并收集120μl细胞上清液。将上清液稀释10倍，并且每个样品的il-2浓度根据制造商的说明书使用il-2msd试剂盒(#k151ahb-4；msd)测定。
[1232]
实例78：肝微粒体代谢稳定性测定
[1233]
在汇集后的大鼠、小鼠、狗和食蟹猴肝微粒体(bd biosciences，san jose，ca)中评估测试化合物的代谢稳定性。温育条件如下：含1μm测试化合物、1mm nadph、0.5mg/ml微粒体蛋白的0.1m磷酸钾缓冲液(ph 7.4)。在5分钟的预温育期后，通过向在磷酸盐缓冲盐水中稀释的微粒体中添加nadph和测试化合物来引发酶促反应。将混合物在37℃下温育0min、20min、40min和60min。
[1234]
通过lc-ms/ms评估化合物浓度。基于微粒体稳定性数据的固有清除率使用底物耗竭法测定，并使用充分搅拌模型换算成肝清除率(obach，r.s.；baxter，j.g.；liston，t.e.；silber，b.m.；jones，b.c.；macintyre，f.；rance，d.j.；wastall，p.，“the prediction of human pharmacokinetic parameters from preclinical and in vitro metabolism data”，j.pharmacol.exp.ther.，(1997)，283(1)，46-58)。
[1235]
实例79：肝细胞代谢稳定性测定
[1236]
在冷冻保存的汇集后的大鼠、小鼠、狗和食蟹猴肝细胞(cellzdirect；durham，nc，usa)中评估测试化合物的代谢稳定性测定。通过台盼蓝排除法评估细胞的膜完整性。将测试化合物(1.0μm，含0.1％二甲亚砜)与细胞(50万个细胞/毫升)在37℃下在95％空气/5％co2气氛中温育0、20、40或60分钟。肝细胞培养物中测试化合物的浓度通过lc/ms/ms测定。使用底物耗竭法测定固有清除率，并使用如上文针对肝微粒体代谢稳定性测定所述的充分搅拌模型换算成肝清除率。
[1237]
出于说明目的，本技术中所选化合物的肝微粒体和肝细胞稳定性数据如下所示。
[1238]
表4
data analysis”，drug.metab.lett.2011，5(3)，220-230所述的方案来测量，该文献以引用方式并入本文。
[1252]
实例83：cyp3a时间依赖性抑制(tdi)
[1253]
本文所述化合物的时间依赖性抑制可以通过各种方法来测量。用于cyp3a自动auc转换稀释tdi测定和确定性ki/k
inact tdi测定的此类示例性方案由kenny，j.r.；mukadam，s.；zhang，c.；tay，s.；collins，c.；galetin，a.；khojasteh，s.c.，“drug-drug interaction potential of marketed oncology drugs：in vitro assessment of time-dependent cytochrome p450 inhibition，reactive metabolite formation and drug-drug interaction prediction，”pharm.res.2012，29(7)，1960-1976所述。
[1254]
实例84：体内药代动力学(pk)
[1255]
在雄性食蟹猴、比格犬、史泊格-多利大鼠或cd-1小鼠中，以0.2mg/kg-1mg/kg的剂量单次静脉内推注(iv)溶液以及以1mg/kg-5mg/kg的剂量口服施用(po)溶液/混悬液后，使用平行研究设计来评估测试化合物的药代动力学。iv剂量组的血液样品在施用前(给药前)和给药后0.033、0.083、0.25、0.5、1、3、6、9和24小时收集。po剂量组的血液样品在施用前(给药前)和给药后0.083、0.25、0.5、1、3、6、9和24小时收集。对于iv组，在给药前以及给药后0-6小时和6-24小时收集每只动物的尿液。用于iv剂量组的媒介物为peg400与柠檬酸盐缓冲液(ph 5.0)或peg400/cremphor与dmso/h2o的组合，并且用于po组的媒介物为mct。结果在表6中示出。
[1256]
使用未经验证的lc/ms/ms方法在genentech inc.对血浆和尿液浓度进行定量。血浆和尿液测定的定量下限(lloq)为0.005μm。使用winnonlin(5.2版，pharsight corporation，mountain view，ca)通过非隔室方法测定pk参数。
[1257]
表6
[1258]
代表性异吲哚啉-1-酮化合物的小鼠pk数据
[1259][1260]
实例85：药效学(pd)研究；在存在cbl-b抑制剂的情况下，增强cd4和cd8 t细胞活化对全身性抗cd3施用的反应
[1261]
对雌性c57bl/6或balb/c小鼠施用抗cd3抗体(2ug/小鼠，克隆2c11)或通过尾静脉注射施用同种型对照(2μg/小鼠，仓鼠igg)。从时间0开始(紧接在抗cd3施用之前)po施用cbl-b抑制剂，并在8小时后再次施用。抗cd3施用后四小时，给小鼠放血，并且通过luminex在血清中定量细胞因子。抗cd3施用后二十四小时，对小鼠实施安乐死并对脾脏和血液中cd4和cd8 t细胞的活化进行定量。4-1bb、cd25、cd40l和cd69的表达以及细胞表面tcr水平将通过流式细胞术进行定量。通过luminex收集血清用于细胞因子分析。
[1262]
实例86：肿瘤pd/功效研究；用cbl-b抑制剂以预防性或治疗性方式治疗患有同系肿瘤的小鼠中肿瘤生长和免疫细胞浸润的评估
[1263]
在手动约束下，将6-12周龄的雌性c57b1/6小鼠用100微升hbss 基质凝胶中的10
万个eo771细胞皮下接种在第5个乳房脂肪垫中。对于预防性研究，在肿瘤接种前1小时开始po施用cbl-b抑制剂bidx3周。肿瘤接种后三周，对小鼠实施安乐死，并且采集肿瘤、脾脏、血液和引流淋巴结，并且通过流式细胞术评估免疫细胞浸润和表型。通过luminex在不同时间点获得血清用于细胞因子分析。为了治疗功效评估，如上所述接种肿瘤并使其生长，直到肿瘤达到120-250mm3的中值体积。然后如上开始用cbl-b抑制剂给药，并持续到研究结束。根据需要，每周记录两次或更多次肿瘤体积和小鼠体重和状况，直到研究结束。cb1-b抑制剂的功效也可以在另外的同系肿瘤模型(包括ct26和tc-1)中进行评估。
[1264]
表7
[1265]
异吲哚啉-1-酮化合物的cbl-b和c-cbl选择性
[1266]
[1267]
[1268]
[1269]
[1270]
[1271]
[1272]
[1273]
[1274]
[1275]
[1276]
[1277][1278]
根据本文的实例76测量表7中的cbl-b lck htrf数据；根据本文的实例76测量c-cbl lck htrf数据。
[1279]
实例87：cbl-b和c-cbl spr测定
[1280]
本文所述化合物与cbl-b和c-cbl结合的亲和力可以根据以下方案通过表面等离子体共振(spr)来评估。所有实验均在biacore
tm 8k或biacore
tm 8k (cytiva)上记录，在20℃下，在由50mm hepes，ph 7.5、0.15m nacl、0.001％(v/v)20、0.2mm三(2-羧乙基)膦、0.025％(w/v)羧甲基化葡聚糖(平均mw 10kda)、0.2％(w/v)peg 3350和2％dmso组成的测定缓冲液中进行表面制备和实验测量。
[1281]
人cbl-b(残基40-426)或c-cbl(残基47-435)通过n-末端avi标签不可逆地捕获到s系列传感器芯片sa(cytiva 29104992)上，该标签通过在大肠杆菌中与bira共表达而生物素化。两种同种型均使用1300-1500ru的表面捕获范围的蛋白质。
[1282]
对于spr测量，测量具有2倍系列稀释度的6种浓度，每个系列两侧的空白用于双重参考。根据测试化合物的预期亲和力，使用20至0.5μm之间的初始浓度。spr传感图以多循环动力学格式记录，接触时间为60秒，以及流速为40μl/min，解离时间在120-1200秒之间变化，目的是测量的相互作用的4-5个半衰期。
[1283]
使用biacore
tm incyte评估软件(cytiva)从拟合到1∶1结合模型的多循环动力学数据中提取动力学和亲和力参数。
[1284]
多点追踪剂spr测定变化
[1285]
为了这类实验的目的，术语“追踪剂化合物”是指所研究化合物的低亲和力类似物，其在所用浓度下接近饱和结合，并在120秒内完全解离。对于本文提出的研究，追踪剂化合物为化合物254。
[1286]
本文所述的有效化合物(kd《10nm)与cbl-b和c-cbl结合的亲和力通过表面等离子体共振(spr)使用“追踪剂”测定形式来评估。
[1287]
追踪剂测定利用单循环动力学spr实验，接触时间为120秒，流速为50μl/min，以及解离时间为450秒。单循环动力学滴定利用初始空白注射和5种浓度(2倍连续稀释，最大浓度为500nm)，对前面的6点空白单循环动力学注射进行空白处理以进行双重参考。
[1288]
在强效化合物的情况下，无法使用单循环滴定数据的常规拟合来准确测量蛋白质-化合物半衰期。kd是通过测量由spr测量的追踪剂化合物的结合来确定未占据的化合物结合位点随时间变化的百分比来独立测量的。
[1289]
使用20秒的接触时间、30μl/min的流速和120秒的解离时间，通过多循环动力学spr实验来测量追踪剂结合。在最后一次单循环动力学滴定注射后间隔674至30,263秒记录7次15μm的单一追踪剂浓度的注射以及前面的空白注射。通过与下文定义的单循环动力学滴定之前的单次追踪剂注射相比较来确定在给定时间的化合物结合％。
[1290]
化合物结合％＝(1-(rut/rut0))*100
[1291]
其中，rut是在时间t观察到的追踪剂注射的spr信号，并且rut0是在对所研究的化
合物进行滴定之前观察到的追踪剂注射的spr信号。
[1292]
化合物结合％以秒为单位对时间进行作图，并拟合为单一指数，其中指数代表化合物-蛋白质复合物的kd。然后将化合物的单循环动力学实验与使用追踪剂确定的固定kd进行拟合。
[1293]
spr和lck生化测定为正交测定：spr为蛋白质结合测定，而lck测定为酶活性测定。spr测量化合物与cbl-b/c-cbl的结合亲和力，而lck测定测量化合物对cbl-b/c-cbl泛素转移活性的抑制。
[1294]
实例88：lcms方法
[1295]
以下lcms方法用于获得本文其他地方描述的化合物的质谱数据。
[1296]
lc-ms方法a：5-95ab_1.5min_220和254_shimadzu
[1297][1298]
说明：
[1299]
流动相：1.5ml/4l tfa/水(溶剂a)和0.75ml/4l tfa/乙腈(溶剂b)，使用洗脱梯度5％-95％(溶剂b)历经0.7分钟，并以1.5ml/min的流速在95％下保持0.4分钟；
[1300]
柱：merck，rp-18e 25-3mm；
[1301]
波长：uv 220nm，254nm；
[1302]
柱温：50℃；ms电离：esi
[1303]
lc-ms方法b：10-80 cd_3min_220和254_shimadzu
[1304]
[1305][1306]
说明：
[1307]
流动相：0.8ml/4l nh3·
h2o/水(溶剂a)和乙腈(溶剂b)，使用洗脱梯度10％-80％(溶剂b)历经2分钟，并以1ml/min的流速在80％下保持0.48分钟；
[1308]
柱：xbridge c18 5um，2.1*50mm；
[1309]
波长：uv 220nm和254nm；
[1310]
柱温：50℃；ms电离：esi
[1311]
lc-ms方法c5-95ab_1min_220和254_agilent
[1312][1313]
说明：
[1314]
流动相：1.5ml/4ltfa/水(溶剂a)和0.75ml/4ltfa/乙腈(溶剂b)，使用洗脱梯度5％-95％(溶剂b)历经0.4分钟，并以2.0ml/min的流速在95％下保持0.3分钟；
[1315]
柱：agilent poroshell 120ec-c18 2.7um 3.0*30mm；
[1316]
波长：uv 220nm和254nm；
[1317]
柱温：50℃；
[1318]
ms电离：esi
[1319]
lc-ms方法d5-95ab_220和254_agilent
[1320][1321]
说明：
[1322]
流动相：1.5ml/4ltfa/水(溶剂a)和0.75ml/4ltfa/乙腈(溶剂b)，使用洗脱梯度5％-95％(溶剂b)历经0.7分钟，并以1.5ml/min的流速在95％下保持0.4分钟；
[1323]
柱：merck，rp-18e 25-2mm；
[1324]
波长：uv 220nm和254nm；
[1325]
柱温：50℃；
[1326]
ms电离：esi.
[1327]
lc-ms方法e：10-80ab_7min_220和254_shimadzu
[1328][1329]
说明：
[1330]
流动相：1.5ml/4l，tfa/水(溶剂a)和0.75ml/4l tfa/乙腈(溶剂b)，使用洗脱梯度10％-80％(溶剂b)历经6分钟，并以0.8ml/min的流速在80％下保持0.5分钟；
[1331]
柱：xtimate c18 2.1*30mm，3μm；
[1332]
波长：uv 220nm，254nm；
[1333]
柱温：50℃；
[1334]
ms电离：esi
[1335]
实例89：比较活性和理化数据
[1336]
图49示出了与本领域已知的化合物相比，本文的各种化合物的比较效力和选择性数据的表。在一个方面，本公开的化合物比本领域的化合物具有更大的人肝微粒体稳定性(lm(h))。
[1337]
在图49的表中，epbpk(人)数据为以5g剂量在12小时处超过pbmc细胞ec
50
的预测的人未结合浓度。
[1338]
在cyp3a4测量结果中，效力不太理想。本实例的化合物不如本领域中的参考化合物有效。
[1339]
本文引用的所有参考文献通过引用整体并入本文。
[1340]
前面的描述和相关附图旨在说明本技术的多个方面。本文提供的实例无意限制所附权利要求书的范围。现在对本发明进行全面描述，对于本领域的普通技术人员来说显而易见的是，在不脱离所附权利要求书的实质或范围的情况下，可以对其进行许多改变和修改。