用于肿瘤成像的试剂盒的制作方法
【专利说明】用于肿瘤成像的试剂盒
[0001] 引言
[0002] 本申请要求2013年2月15日提交的编号61/765312的美国临时申请的优先权， 其内容作为整体通过引用并入本文中。
[0003] 本发明是在国立卫生研究院（nationalinstitutesofhealth)授予的合同号ca 109231之下由政府支持做出的。政府享有本发明中一定的权利。
【背景技术】
[0004] 2011年在美国进行的约160万例乳腺活检中，诊断出约288130例乳腺癌（bc) (230480 例扩散性和 57650 例原位）（desantis等人·（2011)cacancerj.clin. 61 : 409-418;elter等人·（2011)med.phys. 2007, 34 (11) :4164-4172)，但超过 130 万例活 检是良性诊断结果。虽然诊断这些癌症是关键的，但在此过程中呈现的大量良性活检产 生了显著的患者发病率和潜在的不必要的医疗费用。检测乳腺癌的成像方法不断发展， 包括数字乳房x线照相术、核磁共振成像（mri)、计算机x线断层成像（ct)、超声（us)、 f-18-fdg和tc-99msestamibi，然而，所有这些方法都具有有限的特异性并且接着会产 生许多假阳性和假阴性诊断（uematsu等人·（2002)breastcancer9 :62-68 ;berg等 人·（2004)radiology233 :830-849;ruibal等人·（2008)med.clin. 130(9) :332-333 ; yang&tse(2004)ajram.j.roentgenol. 182 :101-110;elmore等人·（2005)jama293: 124δ-1256;ghai等人·（2〇〇5)ajram.j.roentgenol.i85 :48l-487;chagpar等人·（2〇〇6) ann.surg. 243 :257-264;xu等人·（2011)nucl.med.comm. 32 :980-988;xue等人·（2012) eur.j.surg.oncol. 38(5) :375-381)。考虑到费用，不必要的良性活检意味着严重的医疗负 担。这对将会减少不必要的良性活检数量同时还能发现恶性肿瘤的创新方法有迫切需求。
[0005] 近期的药物发现方法集中于在分子水平上了解疾病的成因和控制疾病的生物医 学途径。先前的研究已经证实vpac1受体（结合血管活性肠肽和垂体腺苷酸环化酶激活肽） 在乳腺癌细胞上以高密度过表达（reubi等人·（2000)cancerres. 60(11) :3105-3112)。 vpac1受体编码g蛋白，所述g蛋白参与乳腺癌细胞的细胞增殖、细胞分化以及存活。在 基质、正常细胞和良性肿块上，只有少数vpac1受体进行表达（reubi等人.（2000)同 上；zia等人·（1996)cancerres. 56(15) :3486-89;leyton等人.（1999)1^6&81:0&11(3· res.treat. 56(2) :177-186 ；moody&gozesi(2007)curr.pharm.des. 13(11) :1099-1104 ； valdehita等人·（2010)peptides31 (11) :2035-2045;valdehita等人·（2012)m〇1.cell endocrinol. 348(1) :241-246)。
[0006] 已经开发了对vpac1受体具有高亲和性的放射性标记的生物分子，并且在临 床前环境下进行分析（chakder&rattan(1993)j.pharm.expt.therapeut. 266 :392-399 ; thakur等人·（2000)j.nucl.med. 41 :107-110;pallela等人·（1999)j.nucl.med. 40(2): 352-360;kolan等人·（1997)j.label.comp.radiopharmaceut. 40 :455-457;thakur等 人·（2004)j.nucl.med. 45 :1381-1389;zhang等人·（2007)reg.p印tides144 :91-100 ; thakur(2009)semin.nucl.med. 39 :236-246;thakur等人·（2010)j.nucl.med. 51 : 106-111;zhang等人·（2008)j.nucl.med. 49 :112-121;us6855308)。基于它们对vpac1 受体的高亲和性，生成了通过利用tc99m(tl/2-6小时，y-140kev)放射性标记进行修饰 的肽构建物（peptideconstruct)，并且对受体亲和性（kd)、受体特异性、体内稳定性和 组织分布进行了评价（thakur等人·（2000)同上；pallela等人·（1999)同上；kolan等 人.（1997)同上；thakur等人.（2004)同上；zhang等人.（2007)同上；thakur(2009)同上； thakur等人.（2010)同上；zhang等人.（2008)同上）。另外，用发射 0 (19%，656kev)的 cu-64(tl/2-12. 8小时）对肽进行标记，以用于用n2s2作为螯合剂的正电子发射断层成像 术（positronemissiontomography) (pet)。对kd值、患有t47d人乳腺癌的无胸腺裸鼠的 组织分布研究、受体阻断研究、受体亲和性和体内稳定性进行了检测（thakur等人.（2004) 同上；zhang等人.（2007)同上；thakur(2009)同上；thakur等人.（2010)同上；zhang等 人.（2008)同上）。在所产生的化合物中，cu-64-tp3805不仅成像了无胸腺裸鼠中所有的异 种移植人乳腺癌（注射后24小时，肿瘤吸收6. 35± 1. 28%id/g)，该化合物还定位转基因 mmtvneu小鼠（η= 9)中所有（η= 8)自发生长的乳腺癌（可见的5例，不可见的1例，转 移性的2例）病灶（thakur等人.（2010)同上）。此外，对于具有可以忽略不计的vpac1受 体表达的两个病灶，cu-64-tp3805pet图像是正常的。通过组织学（histology)和由rt-pcr 确定的表达的vpac1受体确认了所述8例恶性病灶（thakur等人.（2010)同上）。
【发明内容】
[0007] 本发明提供用于肿瘤成像的试剂盒。在一个实施方案中，本发明的试剂盒由冻干 组合物组成，所述冻干组合物包含葡庚糖酸盐、甘氨酸缓冲液和具有以下结构的化合物 s-ser-asp-gly-ile-phe-thr-asp-ser-tyr-ser-arg-tyr-arg-lys-gln-met-ala-val-lys -lys-tyr-leu-ala-ala-val-leu-yaba-lys(r)(seqidno:1)，其中r是与赖氨酸残基的 γ-氨基偶联的螯合剂，所述螯合剂为：
[0008]
[0009] 在一些实施方案中，将试剂盒贮存于4°c。在其他实施方案中，将试剂盒贮存 于-20°c。在还另外的实施方案中，试剂盒包含20-250μg所述化合物、50至500μg葡庚 糖酸盐和任选地64cu、6sga、s9zr或9etatc。还提供了一种制备所述试剂盒的方法。
[0010] 在另一个实施方案中，本发明的试剂盒由具有以下结构的化合物组成：his-ser-a sp-gly-ile-phe-thr-asp-ser-tyr-ser-arg-tyr-arg-lys-gln-met-ala-val-lys-lys-ty ;r-leu-ala-ala-val-leu-γaba-lys(r)(seqidno:l)，其中r是与赖氨酸残基的γ-氨基 偶联的螯合剂，并且其中所述化合物被固定在基质（substrate)上。
【具体实施方式】
[0011] 现在已经表明cu-64-tp3805能够成像人乳腺癌患者的原发性肿瘤。在20例分析 的肿瘤中，所有病灶均为恶性的。另外，在全身正电子发射断层成像术（pet)/计算机断层 扫描（ct)成像中，4例涉及前哨淋巴结（1名患者中有2个，另外2名患者每人1个），且轮 廓清晰。在此研究中，观察到值得注意的另外两种现象。首先，cu-64-tp3805摄取是快速 的，即注射后15分钟。因此，还可以使用半衰期为68分钟、由发生器产生的ga-68。ga-68 的正电子发射为88%，超过cu-64的四倍。这就允许给予小于150mbq(~4mci)的ga-68 而不会降低图像质量，因而显著减少了受试者的福射积存量（radiationburden)。在任何 一种情况下，在注射15分钟后就可以得到图像而不需要要求患者禁食或监测血糖水平。
[0012] 第二，观察到注射后15分钟的正电子发射乳房x线造影术（positronemission mammography，pem)摄取值直到成像后5小时并没有变化。这表明，c