1.本发明涉及经皮给药制剂技术领域，尤其涉及一种多肽类物质经皮给药制剂及其制备方法。
背景技术：
2.随着现代医学的发展，越来越多的蛋白、多肽类大分子药物被用于治疗各种疾病，如降压肽、生长激素、胰岛素、干扰素等。然而，这些药物通常需要通过肌内注射或静脉输液等方式进行给药，给患者带来了不便和痛苦。口服多肽类药物的生物利用度较低，主要是由于它们的分子量较大，且易被胃肠道消化吸收和肝脏代谢。
3.经皮递送给药是一种通过皮肤将药物输送到体内的方式，具有许多优势，与注射给药相比，其具有血药浓度平稳、安全性高、使用方便的优点；口服给药相比，经皮给药不受胃肠道酸碱度的影响，避免肝脏首过效应、减少药物代谢和降低药物剂量等。由于不经胃肠道，经皮递送给药被认为是一种有效提高多肽类物质生物利用度的给药途径，研究多肽类药物如何通过经皮递送给药，成为了一个备受关注的领域。然而，皮肤的角质层是人类与外界环境接触的部位，具有高度屏障性，使得许多药物难以穿透皮肤屏障，尤其是多肽类大分子药物，很难经完整皮肤递送，而通过物理或化学方式破坏皮肤角质层可能会引起皮肤刺激和过敏反应等不良反应。因此，如何安全高效的经皮递送多肽类药物急需进一步研究。
4.乳膏是由水、油和乳化剂等组成的半固体分散系统，是一种常见的外用制剂。乳膏制剂由药物成分、基础成分和乳化剂等组成，基础成分通常包括油脂和水，乳化剂则用于将油脂和水混合均匀，形成乳膏的半固态质地。目前，非蛋白质类药物，如皮质类固醇、非甾体抗炎药、抗真菌药、抗生素等，在乳膏制剂中得到了广泛应用。由于皮肤角质层的高度屏障性，在乳膏给药系统中，多肽类药物的递送效率问题仍然有待解决，因此较多的多肽类药物尚未能成功制备成为有效的乳膏经皮给药制剂。
5.n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯(snac)由邻羟基苯甲酸与8-氨基辛酸钠脱水缩合而成，已被报道应用于口服制剂领域，其可增加细胞膜的流动性，增大细胞间隙，提高主药的溶解度，对药物的胃肠道吸收有促进作用。如，snac与核桃多肽(pw5)结合后，可以结合到pw5的内部肾盏，进而改变pw5表面粗糙度，并降低其致密结构，从而促进其有效递送至胃肠道上皮细胞。但不同于常用的吸收促进剂，snac促进药物口服吸收作用的确切机制尚未完全清楚。
技术实现要素：
[0006]
为了解决上述多肽类物质经皮给药效率低的技术问题，本发明提供了一种多肽类物质经皮给药制剂及其制备方法。本发明在活性成分为血管活性肠肽或表皮生长因子，制剂中添加特定含量的snac成分，将之制备成为微乳形式的乳膏，显著提高了血管活性肠肽、表皮生长因子的透皮吸收效率，将之成功经皮递送。
[0007]
本发明的具体技术方案为：
本发明提供了n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯在经皮递送多肽类物质中的应用。
[0008]
在本发明中，本团队研究人员给出了n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯在经皮递送多肽类物质中的应用。n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯(snac)的结构式如下：
[0009]
n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯(snac)目前应用于口服制剂领域，其对药物的胃肠道吸收有促进作用。本发明提供了一种多肽类物质经皮给药制剂，在制剂中添加了特定含量的snac成分，将之制备成为微乳形式的乳膏，并证实了该乳膏具有良好的渗透性和稳定性，能够显著提高多肽类物质的透皮吸收效率，具体地，在以血管活性肠肽或表皮生长因子为活性成分的经皮给药制剂中，snac可以使多肽活性成分有良好的透皮性能，显著提高多肽活性成分的透皮吸收效率。本发明提供的含snac成分的乳膏，可以用于治疗高血压、糖尿病等疾病，或用于美容领域。与注射给药或口服给药相比，该乳膏具有使用方便，无胃肠道刺激，血药浓度平稳，药效维持时间长，副作用小等优势。
[0010]
同时，本发明提供了一种多肽类物质经皮给药制剂，所述多肽类物质经皮给药制剂含有上述n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯。
[0011]
药物的经皮递送是透皮将药物输送到体内，是重要的给药途径。但多肽类大分子药物难以透过皮肤角质层。在本发明提供的多肽类物质经皮给药制剂中，通过在经皮给药制剂中添加特定含量的snac成分，从而实现或增强多肽类物质的经皮递送。本发明通过在多肽类活性成分血管活性肠肽、表皮生长因子中，添加一定含量的snac成分，制备得到微乳形式的乳膏，显著地提高了血管活性肠肽、表皮生长因子的透皮吸收效率。
[0012]
具体地，本发明提供了一种血管活性肠肽经皮给药制剂，该多肽类物质经皮给药制剂的剂型为乳膏；按质量份数计，所述乳膏包括多肽类活性成分0.1～3份和n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯1～8份；所述多肽类活性成分为血管活性肠肽(vip)。
[0013]
在乳膏型的血管活性肠肽经皮给药制剂中，活性成分血管活性肠肽含量为0.1～3份，通过添加1～8份snac，显著提高血管活性肠肽的皮肤渗透性和生物利用度，从而实现血管活性肠肽的经皮递送，使血管活性肠肽经毛细血管吸收进入体循环而发挥降血压功效。该效果的实现，是由于snac可与vip以共价键结合，增加vip的脂溶性和稳定性，协助其经皮渗透，提高其生物利用度。
[0014]
本发明提供的含snac的血管活性肠肽乳膏，经24h大鼠离体皮肤渗透，接受液中的vip浓度范围为0.01～30ng/ml，显著高于不含snac的vip乳膏；经大鼠在体皮肤吸收24h，血药浓度范围为1～200pg/ml，显著高于不含snac的vip乳膏。其具有以下优势：
①
给药后药物释放平缓，无明显药峰现象，无显著的低血压副作用；
②
药效持续时间久，可显著减少给药次数；
③
使用方便，患者可自行给药，无需专业医疗机构；
④
药物稳定性好，运输及携带方便。
[0015]
作为本发明上述技术方案的优选，按质量份数计，上述乳膏还包括：凡士林2～10份羊毛脂4～20份十六醇1～5份亚油酸1.2～5份甘油1.5～4.8份水38.7～85.7份乳化剂2～6份ph调节剂0.9～1.1份防腐剂0.4～0.6份进一步地，所述乳化剂选自柠檬酸丙酯、异辛醇聚氧乙烯醚、吐温80。柠檬酸丙酯、异辛醇聚氧乙烯醚、吐温80可以使含snac的多肽乳膏形成稳定的微乳体系。
[0016]
亚油酸含有不饱和双键，具有一定的抗氧化功能，可保护vip药效成分。同时亚油酸可以降低油性基质的熔点，增加乳膏的流动性和细腻度。
[0017]
进一步地，所述ph调节剂选自三乙醇胺、三乙胺、乙二胺、精氨酸、赖氨酸。
[0018]
进一步地，所述防腐剂选自丁基羟基茴香醚、特丁基对苯二酚、山梨酸。
[0019]
具体地，本发明还提供了一种表皮生长因子经皮给药制剂，所述多肽类物质经皮给药制剂的剂型为乳膏；按质量份数计，所述乳膏包括多肽类活性成分0.01～2份和n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯1～6份；所述多肽类活性成分为表皮生长因子(egf)。
[0020]
在乳膏型的表皮生长因子经皮给药制剂中，活性成分egf含量为0.1～5份，通过添加2～8份snac，显著提高egf的皮肤渗透性和生物利用度，从而实现egf的经皮递送，使egf递送至皮下组织发挥促进表皮细胞的生长和分化的作用，用于治疗伤口愈合或美容领域。该效果的实现，主要是由于snac可以可与egf以共价键结合，增加egf的脂溶性和稳定性，从而促进egf的经皮渗透。
[0021]
本发明提供的含snac的egf乳膏，经大鼠在体皮肤吸收24h，皮下组织中的egf浓度为0.01-10ng/ml，显著高于不含snac的egf乳膏。
[0022]
作为本发明上述技术方案的优选，按质量份数计，上述乳膏还包括：凡士林1.6～8.4份羊毛脂20～30份十六醇3.2～16.8份油酸2.5～6份1,2-丙二醇1.8～4.7份水42.4～85.59份乳化剂0.8～4.2份ph调节剂0.9～1.1份防腐剂0.4～0.6份进一步地，所述乳化剂选自柠檬酸丙酯、异辛醇聚氧乙烯醚、吐温80。柠檬酸丙酯、异辛醇聚氧乙烯醚、吐温80可以使含snac的生长激素乳膏形成稳定的微乳体系。
[0023]
蓖麻油具有一定的抗氧化功能，可保护egf药效成分。同时亚油酸可以降低油性基
质的熔点，增加乳膏的流动性和细腻度。以上述乳膏型的生长激素经皮给药制剂的配方制备得到的体系，共熔温度在60℃以下，具有较低的共熔温度，可保证在该温度下的egf生物活性。
[0024]
进一步地，所述ph调节剂选自三乙醇胺、三乙胺、乙二胺、精氨酸、赖氨酸。优选为精氨酸或赖氨酸。精氨酸与赖氨酸具有与egf良好的相容性。
[0025]
进一步地，所述防腐剂选自丁基羟基茴香醚、特丁基对苯二酚、山梨酸。
[0026]
另外，本发明还提供了一种如上述多肽类物质经皮给药制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将甘油或1,2-丙二醇、水、多肽类活性成分、ph调节剂和snac加热溶解，混合均匀得到水相；(2)将凡士林、羊毛脂、十六醇、亚油酸、防腐剂及乳化剂混合，加热到与水相相同的温度，得到油相；(3)将油相与水相混合中，恒温搅拌至得到均一乳白色膏状物质，然后依次进行超声、过滤，降温，得到乳膏。
[0027]
通过本发明提供的制备方法，可以制备得到一种低粘度的微乳型乳膏。微乳型的乳膏体系的形成，除了跟配方有关，在油相跟水相混合搅拌至得到均一乳白色膏状物质后，进行超声、过滤的操作，也可以促进微乳的形成。乳膏形成为微乳体系，对于乳膏的稳定性及药物活性分子的透皮递送有促进作用。
[0028]
作为本发明上述技术方案的优选，步骤(1)中，所述加热的温度为40～60℃。
[0029]
作为本发明上述技术方案的优选，步骤(3)中，所述恒温搅拌的温度为40～60℃、速度为1000～3000rmp，所述超声的频率为20-50hz、时间为20～40min。
[0030]
温度的调节对于微乳体系的形成有重要影响。加热到一定温度进行原料物质的混合，可以使体系混合得更均匀，乳化效果更好，但同时要考虑体系中各物质的耐温性，比如过高的温度是否会破坏多肽的结构，影响微乳体系的形成。在本发明微乳型乳膏中，步骤(1)中加热的温度为40～60℃、步骤(3)恒温搅拌的温度为40～60℃，可以促进微乳体系的形成。
[0031]
在油相跟水相混合搅拌至得到均一乳白色膏状物质后，在频率为20～50hz条件下超声20～40min，利用超声波使液体中的微粒受到撞击和剪切，进而破碎成更小的粒子，同时将气体分子从液体中溶解出来，减小液体中气泡的存在，有利于稳定微乳的形成。频率过高，得到的微乳稳定性欠佳，频率过低，超声波引起的剪切作用较弱，促微乳形成作用不明显。
[0032]
与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：本发明通过提供一种多肽类物质经皮给药制剂，在制剂中添加了特定含量的snac成分，将之制备成为微乳形式的乳膏，并证实了该乳膏具有良好的渗透性和稳定性，能够显著提高多肽类物质的透皮吸收效率，给出了n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯在经皮递送多肽类物质中的应用。具体而言，在以血管活性肠肽或表皮生长因子为活性成分的经皮给药制剂中，snac可以使多肽活性成分有良好的透皮性能，显著提高多肽活性成分的透皮吸收效率。
[0033]
本发明提供的含snac的血管活性肠肽乳膏，经24h大鼠离体皮肤渗透，接受液中的
vip浓度范围为0.01～30ng/ml，显著高于不含snac的vip乳膏；经大鼠在体皮肤吸收24h，血药浓度范围为1～200pg/ml，显著高于不含snac的vip乳膏。具有以下优势：给药后药物释放平缓，无明显药峰现象，无显著的低血压副作用；药效持续时间久，可显著减少给药次数；使用方便，患者可自行给药，无需专业医疗机构；药物稳定性好，运输及携带方便。
[0034]
本发明提供的乳膏型多肽类物质经皮给药制剂的制备方法，简便易操作，制备得到的微乳型乳膏稳定性优异，如以vip-snac乳膏为例，在4℃条件下密封避光放置6个月，vip含量下降均小于5％。
附图说明
[0035]
图1为本发明实施例1中制备的vip-snac乳膏一的zeta电位和粒径分布图；图2为本发明实施例1中制备的乳膏经离体渗透的药物累积渗透率-时间曲线；图3为本发明实施例1中制备的乳膏经大鼠在体吸收后血药浓度-时间曲线；图4为本发明实施例1中制备的乳膏对shr模型大鼠的血压-时间图；图5为本发明实施例2中制备的乳膏经大鼠在体吸收后皮下组织药物浓度-时间曲线。
具体实施方式
[0036]
下面结合实施例及附图对本发明作进一步的描述。
[0037]
实施例11.一种血管活性肠肽经皮给药制剂(vip-snac乳膏)，按质量份数计，其处方组成如下表1所示。
[0038]
表1一种血管活性肠肽经皮给药制剂(vip乳膏)的制备，按表1处方组成进行制备，具体为：(1)将甘油、水、三乙醇胺、vip混合，55℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、丁基羟基茴香醚混合均匀得到油相，将油相保持与水相55℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持55℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为2000rmp；(3)然后在55℃下，30hz超声30min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至25℃常温得到低粘度vip乳膏。
[0039]
一种血管活性肠肽经皮给药制剂(vip-snac乳膏)的制备，按表1处方组成进行制
备，具体为：(1)将甘油、水、三乙醇胺或乙二胺或精氨酸、vip和snac混合，55℃加热溶解，混匀得到水相；(2)vip-snac乳膏一中将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸丁基羟基茴香醚混合均匀得到油相；vip-snac乳膏二中将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、特丁基对苯二酚混合均匀得到油相；vip-snac乳膏三中将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、山梨酸混合均匀得到油相；将油相保持与水相55℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持55℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为2000rmp；(3)然后在55℃下，30hz超声30min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至25℃常温得到低粘度乳膏vip-snac乳膏一、vip-snac乳膏二、vip-snac乳膏三。
[0040]
2.稳定性评价
①
将vip乳膏、vip-snac乳膏一、vip-snac乳膏二、vip-snac乳膏三密避光封置于4℃条件下分别放置1、2、3、6个月，采用考马斯亮蓝法测定乳膏中vip含量。采用空白乳膏稀释后的续滤液分别配制浓度分别为0.1、1、2、4、6、10μg/ml的vip溶液，将考马斯亮蓝试剂加入待测样品溶液中，使之充分混合后，加入沉淀剂(三氯醋酸)，使其形成的复合物沉淀下来。然后离心使复合物沉淀到试管底部。取出离心后上清液的一定体积，置于elisa酶标仪中，吸收光波长设定为580nm，测定样品的吸光度，绘制标准曲线。同法测定样品的吸光度，再根据标准曲线计算出相应vip蛋白浓度。经6个月放置，药物的含量(标示量百分比)变化如下表2所示。
[0041]
表2乳膏放置6个月含量变化(标示量％，n＝5)放置时间vip乳膏vip-snac乳膏一vip-snac乳膏二vip-snac乳膏三0个月98.7
±
3.7101.2
±
4.4102.5
±
3.7103.1
±
2.71个月100.3
±
2.699.8
±
2.8102.1
±
3.9100.0
±
5.22个月101.8
±
4.297.9
±
4.697.5
±
4.399.5
±
3.24个月100.1
±
3.1100.4
±
4.598.9
±
4.7100.1
±
5.16个月97.5
±
1.998.3
±
5.496.8
±
4.198.7
±
4.9由表2结果可知，vip乳膏和三种vip-snac乳膏在4℃条件下密封避光放置6个月，vip含量下降均小于5％，表明所研制的四种乳膏具有较好的稳定性，体现了本实施例以vip为活性成分的乳膏处方及其制备方法的稳定性优势。
[0042]
②
乳膏粒径分布和zeta电位：采用马尔文粒径仪测定vip-snac乳膏一的粒径及zeta电位，考察所制备乳膏的稳定性。
[0043]
vip-snac乳膏一的粒径及zeta电位如图1a和图1b所示，其密度粒径为678.9
±
135.8nm，分散系数pdi为0.39
±
0.14，表明其粒径较小，且均一性较好；zeta电位为-52.73
±
1.25mv，绝对值较大，微乳体系稳定性较好。
[0044]
3.透皮性能评价
离体皮肤渗透试验：通过采用离体sd大鼠皮肤渗透实验测定vip-snac乳膏经皮渗透性能，elisa试剂盒检测接受液中的药物浓度，绘制药物的累积渗透量和时间曲线。具体方法为：将皮肤置于扩散池口，角质层朝外，加订制组件并用夹子固定。然后分别涂抹100μl vip乳膏、vip-snac乳膏一～三，接受池中加入4ml空白接受液(20％peg-ns溶液)，恒温32℃，调节搅拌子转速至600r/min，分别在第2、4、6、8、10、12、24h定时取样1ml，补充空白接受液1ml，采用vip elisa试剂盒检测接受液中vip含量。
[0045]
离体皮肤渗透结果中，不含snac的vip乳膏接受液中未检测到vip成分，而三种vip-snac乳膏均具有较好的离体皮肤渗透性，其中vip-snac乳膏一24h单位面积累积渗透量为3.78％；当处方中vip与snac用量同时降低时(vip-snac乳膏二)，其24h累积渗透量对应降低，可能与药物浓度较低，药物从乳膏中的释放速率较低有关；但当处方中vip和snac用量均较大时(vip-snac乳膏三)，24h单位面积累积渗透率未见显著升高甚至有下降趋势，可能与药物浓度过高，导致释放速率超过皮肤吸收速率，进而影响其经皮累积渗透率，表明vip和snac用量并非越低或越高越好。离体皮肤渗透结果如表3及图2所示。
[0046]
表3乳膏离体皮肤累积渗透率(％，n＝5)时间(h))vip乳膏vip-snac乳膏一vip-snac乳膏二vip-snac乳膏三00
±
00
±
00
±
00
±
020
±
00.06
±
0.080.11
±
0.120.07
±
0.0940
±
00.97
±
0.90.53
±
0.210.35
±
0.3880
±
01.34
±
0.941.02
±
0.771.25
±
0.94120
±
02.83
±
1.031.36
±
1.021.80
±
1.09240
±
03.78
±
1.231.82
±
0.921.93
±
1.264.药代动力学试验vip乳膏及vip-snac乳膏大鼠药代动力学试验：sd大鼠共18只，分为3组(空白对照乳膏、vip乳膏和vip-snac乳膏组，空白对照乳膏不含vip及snac，其他配方及制备方法与vip乳膏同)，每组6只。给sd大鼠毛发剔除后分别给予空白对照乳膏、vip乳膏和vip-snac乳膏一，给药剂量为100mg乳膏。分别在给药前(0h)和给药后第2、4、8、12、16、20、24时间点经尾静脉采血0.2ml，置于离心管中，取血清。采用vip elisa试剂盒检测接受液中vip含量，以确定血浆中药物的浓度。das 2.0软件用于数据分析，采用统计矩参数模型计算药代动力学参数。结果如图3、表4、表5所示。
[0047]
表4vip-snac乳膏血药浓度(单位pg/ml，n＝6)snac乳膏血药浓度(单位pg/ml，n＝6)表5vip-snac乳膏药代动力学参数参数auc
(0-24h)
auc
(0-∞)
t1/2tmaxcmax
单位pg/l
·
hpg/l
·
hhhpg/l空白对照乳膏326.1623.77.92017.7vip乳膏555.81321.413.32436.5vip-snac乳膏一1870.54861.814.120118.0图3、表4、表5结果显示，vip-snac乳膏一的生物利用度(auc)、最大血药浓度(c
max
)、最大血药半衰期(t
1/2
(β))显著高于不含snac的vip乳膏及空白对照乳膏，其中auc
(0-24h)
约为不含snac乳膏的3倍，由此表明snac促进vip的在体经皮吸收作用显著。
[0048]
5.药效学试验药效学试验：采用套管状血压检测器测定shr大鼠尾部血压，该方法相比手术插管主动脉法，具有无创性，可避免创伤对大鼠血压造成的应激影响。shr雌性大鼠共20只，分为4组，每组5只。给药剂量分别为vip乳膏组(100mg(vip乳膏)/cm2，5cm2)、vip灌胃组(5mg(原料药)/只)、卡托普利灌胃组(20mg(原料药)/kg)、vip-snac乳膏组(100mg(vip-snac乳膏一)/cm2，5cm2)，24h后均补充给药一次。将大鼠置于恒温套中，调节温度至37℃使大鼠保持恒定温度。然后将尾根部1/3处插入大鼠血压测定仪的套管中，待大鼠恢复平静后，开始加压并测定大鼠血压。分别在给药后的0、2、4、8、12、24、32、48h测定大鼠尾动脉血压，记录其收缩压和舒张压，绘制血压-时间曲线。血压测定结果见图4、表6和表7。其中，图4中a为收缩压-时间曲线，b为舒张压-时间曲线。
[0049]
表6不同药物制剂及给药方式对shr大鼠收缩压的影响时间vip乳膏组vip灌胃组卡托普利灌胃组vipsnac乳膏组0185.6
±
3.8191.4
±
12.5194.3
±
9.2189.2
±
10.82192.3
±
14.5197.3
±
3.1151.9
±
10.8173.0
±
13.2
##
4188.1
±
6.6203.4
±
10.6146.3
±
14.2153.7
±
5.6**
##
8196.0
±
14188.0
±
17.2175.0
±
7.2138.1
±
8.6**
##^^
12185.5
±
13.2199.3
±
10.0192.5
±
11.0153.6
±
3.7**
##^^
24195.9
±
12.7206.1
±
8.1185.6
±
3.9167.8
±
12.6**
##
32197.4
±
10.2190.9
±
10.2131.8
±
6.3142.3
±
3.1**
##^
48199.3
±
16.9187.6
±
14.9183.2
±
9.1156.0
±
8.2**
##^^
**表示vip snac乳膏组与vip乳膏组相比p《0.01；
##
表示vip snac乳膏组与vip灌胃组相比p《0.01；^表示vip-snac乳膏组与vip乳膏组相比p《0.05，^^表示vip snac乳膏组与vip乳膏组相比p《0.01。
[0050]
表7不同药物制剂及给药方式对shr大鼠舒张压的影响表7不同药物制剂及给药方式对shr大鼠舒张压的影响
**表示vip snac乳膏组与vip乳膏组相比p《0.01；
##
表示vip snac乳膏组与vip灌胃组相比p《0.01；^表示vip snac乳膏组与vip乳膏组相比p《0.05，^^表示vip snac乳膏组与vip乳膏组相比p《0.01。
[0051]
shr大鼠血压测定结果显示：(1)vip直接灌胃给药或vip乳膏经皮给药对shr大鼠基本无降血压效果；(2)与vip直接灌胃给药或vip乳膏经皮给药组相比，vip-snac乳膏组显示出显著的降低shr大鼠收缩压效果，从给药后4h到48h(24h第二次给药)，不论是收缩压还是舒张压，降血压效果均非常显著的(p《0.01)，表明乳膏中添加snac可显著促进vip的透皮吸收，降血压效果更显著；(3)与卡托普利灌胃组(阳性对照组)相比，vip-snac乳膏降血压效果更加平稳，两次给药间隙无血压反跳现象。
[0052]
实施例21.一种表皮生长因子经皮给药制剂(egf-snac乳膏)，按质量份数计，其处方组成如下8所示。
[0053]
表8一种表皮生长因子经皮给药制剂(egf乳膏)的制备，按表8处方组成进行制备，具体为：(1)将甘油、水、乙二胺或精氨酸、egf混合，60℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将相应处方中剩余的物质混合均匀得到油相，并保持与水相60℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持60℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为3000rmp；(3)然后在60℃下，50hz超声20min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至20℃常温得到低粘度egf乳膏。
[0054]
一种表皮生长因子经皮给药制剂(egf-snac乳膏)的制备，按表8处方组成进行制备，具体为：(1)将甘油、水、乙二胺或精氨酸、egf和snac混合，60℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将相应处方中剩余的物质混合均匀得到油相，并保持与水相60℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持60℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为3000rmp；(3)然后在60℃下，50hz超声20min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至20℃常温得到低粘度乳膏egf-snac
乳膏一、egf-snac乳膏二、egf-snac乳膏三。
[0055]
2.透皮吸收效果评价乳膏经大鼠皮肤吸收后组织中egf浓度测定：由于egf主要作用部位为局部皮肤组织，故采用微透析法测定egf在皮下组织的透皮吸收情况。取sd大鼠随机平均分为5组，分别为空白对照组(空白对照乳膏不含egf及snac，其他配方及制备方法与egf乳膏同)、egf乳膏组和egf-snac乳膏一、二、三组。腹腔注射乌拉坦麻醉大鼠后剔除背部皮肤上的毛发，按分组给药，仰位固定于恒温控制器上，维持体温在37℃。线性探针植入：将预先经肝素钠溶液浸润处理的大孔径线性探针(φ0.5～1mm)插入皮下组织，透析窗埋入给药部位的皮下组织中。以灌流度为1.0μl/min)灌流空白生理盐水使探针透析窗处于湿润状态，平衡1h后，每隔2h收集1份样品，共收集6份，每份120μl。按照egf elisa说明书操作流程测定透析溶液中的egf浓度，记录浓度-时间曲线。
[0056]
实验结果见下表9和图5。
[0057]
表9乳膏在体吸收皮下组织egf吸收量(ng/ml，n＝5)备注：*表示与对应取样时间egf乳膏组相比，p《0.05，**则表示p《0.05；表9显示，微透析皮下组织取样经elisa测试，由于egf为机体内源性物质，不给药的空白对照组中大鼠皮下组织中可检测到一定量的egf背景浓度，egf乳膏与不给药的空白对照组相比，各个取样时间点egf皮下组织液中浓度均无显著性差异；但egf-snac乳膏一组(中浓度egf)和egf-snac乳膏三组(高浓度egf)的egf经皮渗透量在4h～10h内均显著高于egf乳膏组，但二者无显著性差异，表明egf和snac超出一定量时对egf的经皮渗透促进效果有限；egf-snac乳膏二(低浓度egf)在组在10h渗透量显著高于egf乳膏组，三组egf-snac乳膏均具有促透效果，表明在本发明snac用量范围内可显著增加egf经皮透过量，且在egf-snac乳膏一处方组成时促透效果最佳。
[0058]
对比例1vip-snac乳膏处方摸索1.一种血管活性肠肽经皮给药制剂(vip-snac乳膏)，按质量份数计，其处方组成如下表10所示。
[0059]
vip-snac乳膏四与vip-snac乳膏一的处方主要区别在于：乳膏四的vip份数为0.05份，乳膏一的vip份数为1份。
[0060]
vip-snac乳膏五与vip-snac乳膏一的处方主要区别在于：乳膏五的vip份数为5份，乳膏一的vip份数为1份。
[0061]
vip-snac乳膏六与vip-snac乳膏一的处方主要区别在于：乳膏四的snac份数为0.5份，乳膏一的snac份数为4.5份。
[0062]
vip-snac乳膏七与vip-snac乳膏一的处方主要区别在于：乳膏四的snac份数为10份，乳膏一的snac份数为4.5份。
[0063]
表10按实施例1制备vip-snac乳膏的方法按表10处方进行vip-snac乳膏四～七的制备。然后按实施例1中的“3.透皮性能评价”部分的方法进行vip-snac乳膏四～七的透皮性能评价试验。vip-snac乳膏四～七的各时间点的接受液中药物的累积渗透率见表11。
[0064]
表11vip-snac乳膏一、四～七的药物累积渗透率(％，n＝5)由表11可知，与vip-snac乳膏一相比，vip-snac四～七的药物累积渗透率均有所下降。由此确定了乳膏型血管活性肠肽经皮给药制剂中血管活性肠肽、n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯的处方含量。处方中，血管活性肠肽0.1～3份、n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸酯1～8份，显著提高血管活性肠肽的皮肤渗透性和生物利用度。
[0065]
对比例2vip-snac微乳乳膏制备条件的摸索按vip-snac乳膏一处方进行制备：1.一种乳膏的制备(与实施例1制备方法的主要区别在于，不进行1.2μm微孔滤器挤压式过滤)：(1)将甘油、水、三乙醇胺、vip和snac混合，55℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、丁基羟基茴香醚混合均匀得到油相，将油相保持与水相55℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持55℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为2000rmp；(3)然后在55℃下，10hz超声30min，降至25℃常温得到乳膏
①
。
[0066]
该乳膏粒径为2895.7
±
187.7nm，粒径较大。同时乳膏有颗粒感，涂抹性较差。
[0067]
2.一种乳膏的制备(与实施例1制备方法的主要区别在于，超声的频率为10hz)：(1)将甘油、水、三乙醇胺、vip和snac混合，55℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、丁基羟基茴香醚混合均匀得到油相，将油相保持与水相55℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持55℃恒温并搅拌至
均一乳白膏状，搅拌速度为2000rmp；(3)然后在55℃下，10hz超声30min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至25℃常温得到乳膏
②
。
[0068]
该乳膏细腻度较差，有颗粒感，同时粒径均一性较差(854.2
±
409.1nm)。
[0069]
3.一种乳膏的制备(与实施例1制备方法的主要区别在于，超声的频率为100hz)：(1)将甘油、水、三乙醇胺、vip和snac混合，55℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、丁基羟基茴香醚混合均匀得到油相，将油相保持与水相55℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持55℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为2000rmp；(3)然后在55℃下，100hz超声30min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至25℃常温得到乳膏
③
。
[0070]
该乳膏粒径为589.2
±
97.6nm，粒径较小，但易分层，稳定性差。
[0071]
4.一种乳膏的制备(与实施例1制备方法的主要区别在于，搅拌速度为600rmp)：(1)将甘油、水、三乙醇胺、vip和snac混合，55℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、丁基羟基茴香醚混合均匀得到油相，将油相保持与水相55℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持55℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为600rmp；(3)然后在55℃下，50hz超声30min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至25℃常温得到乳膏
④
。
[0072]
该乳膏细腻度较差，有颗粒感，同时粒径均一性较差(942.7
±
221.4nm)。
[0073]
5.一种乳膏的制备(与实施例1制备方法的主要区别在于，搅拌速度为5000rmp)：(1)将甘油、水、三乙醇胺、vip和snac混合，55℃加热溶解，混匀得到水相；(2)然后将凡士林、羊毛脂、十六醇、柠檬酸丙酯、亚油酸、丁基羟基茴香醚混合均匀得到油相，将油相保持与水相55℃相同温度，缓慢加入至水相中，保持55℃恒温并搅拌至均一乳白膏状，搅拌速度为5000rmp；(3)然后在55℃下，10hz超声30min，形成微乳；(4)接着通过1.2μm微孔滤器挤压式过滤，降至25℃常温得到乳膏
⑤
。
[0074]
该乳膏粒径为674.1
±
134.6nm，但乳膏稳定性较差，易分层。
[0075]
对实施例1中制备得到的vip-snac乳膏一、对比例2中得到乳膏
①
～
⑤
的性状如表12所示。
[0076]
表12不同制备方法乳膏性状
本发明检测试剂盒均购自杭州金恒诺生物科技有限公司。
[0077]
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0078]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。