chenopodolin在制备治疗卵巢癌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物chenopodolin的新用途，具体涉及chenopodolin在制备治疗 卵巢癌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] alessio cimmino等人首次分离纯化出化合物chenopodolin，并将成果发表 在著名天然产物杂志 journal of natural product 上（chenopodolin:a phytotoxic unrearranged ent-pimaradiene diterpene produced by phoma chenopodicola, a fungal pathogen for chenopodium album biocontrol，j.nat.prod.，2013,76，1291-1297)。研究 表明该化合物具有植物毒性，但是没有表现出任何抗菌或抗真菌活性。
[0003] 目前尚未有该化合物关于卵巢癌的活性报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种chenopodolin的医药用途。
[0005] 上述目的是通过如下技术方案实现的：
[0006] chenopodolin在制备治疗卵巢癌药物中的应用，所述chenopodolin化学结构式 如下，
[0008] 进一步地，所述卵巢癌为sk0v3卵巢癌。
【具体实施方式】
[0009] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。
[0010] 实施例1 :chenopodolin的分离制备及结构确证
[0011] chenopodolin的制备方法同文献报道的制备方法（chenopodolin:a phytotoxic unrearranged ent-pimaradiene diterpene produced by phoma chenopodicola, a fungal pathogen for chenopodium album biocontrol，j.nat.prod. ，2013,76，1291_1297)〇
[0012] 结构确证：分子式为c24h3()0s，不饱和度为10。核磁共振氢谱数据δ h(ppm，dms0_d6， 600mhz) :h-1 (5· 00, d，j = 4· 8)，h-2 (4· 62, br，d，j = 4· 8)，h-3 (4· 28, br，s)，h-5 (2· 74， s)，h-7 (5. 85, s)，h-9 (2. 85, m)，h-ll (1. 50, m)，h-12 (4. 56, dd，j = 10. 0,4. 1)，h-14 (2. 62， d，j = 16. 2)，h-14(2. 26, d，j = 16. 2)，h-15(5. 79, dd，j = 17. 8,11. 0)，h-16(5. 17， d，j = 11. 0)，h-16(4. 97, d，j = 17. 8)，h-17(l. 06, s)，h-19(l. 48, s)，h-20(l. 08， s)，1-come (2. 24, s)，12-c0me (2. 12, s);核磁共振碳谱数据 δ c (ppm，dms0-d6,600hz): 71. 8 (ch，1-c)，79. 3 (ch，2-c)，76. 8 (ch，3-c)，47. 5 (c，4-c)，57. 3 (ch，5-c)，194. 9 (c，6-c)， 126. 2 (ch，7-c)，156. 2 (c，8-c)，46. 2 (ch，9-c)，41. 8 (c，10-c)，12. 6 (ch2,11-c)，77. 5 (ch， 12-c)，40. 5(c，13-c)，42. 9(ch2, 14-c)，140. 2(ch，15-c)，115. 6(ch2, 16-c)，21. 7(ch3， 17-c)，174. 6 (c，18-c)，17. 4 (ch3,19-c)，20. 5 (ch3, 20-c)，170. 8 (ca-come)，25. 8 (ch3， 1-come)，169. 9 (c，12-come)，26. 1 (ch3,12-come)。结构确证数据与文献报道一致，因此可 以确定本发明制备的化合物即为文献报道的chenopodo 1 in。
[0013] 实施例2 :chenopodolin的药理作用试验
[0014] -、材料和仪器
[0015] 人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株sk0v3由兰州大学的医学实验中心提供。通用 rpmi-1640培养基（10%胎牛血清）培养。chenopodolin自制，hplc归一化纯度大于98%。 rpmi-1640培养液、四甲基偶氮挫蓝（mtt)、二甲基亚砜（dms0)、l-谷氨酰胺科昊生物工程 有限公司。胰蛋白酶购于美国sigma公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公 司。十二院基磺酸钠（sds)购于西安周鼎生物技术有限责任公司。her2(fitc标记）购于 北京博奥森生物技术有限公司。酸化her2 (fitc标记）购于北京博奥森生物技术有限公司。 青霉素、链霉素购于华北制药厂。
[0016] c02培养箱（heraeus，bb5060uv)，德国倒置相差显微镜（olympus，ck-40)，日本荧 光显微镜（olympus 0ptical，ax80,日本），超净工作台（苏州净化设备有限公司），酶标分 析仪（βι0-τεκ公司，美国），低温高速离心机（beckman-coulter公司，德国），epicsxl流 式细胞仪（beckman-coulter公司，德国），r-3850型自动台式灭火器（山东新华医疗器械 股份有限公司），dhg-9245a型电热恒温鼓风干燥箱（上海-恒科技有限公司），kq-250db 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），数显恒温水浴箱（上海梅香仪器有限公 司），bs400s电子分子天平（北京赛多利斯天平有限公司），08-2恒温磁力搅拌器（上海天 平仪器厂），tdl-5普通离心机（上海安亭科学仪器厂），低温冰箱（日本三洋公司），电子 制冰箱（日本三洋公司），细胞冻存管（上海生工生物工程有限公司），96孔板（科昊生物 工程有限公司）。
[0017] 二、试验方法
[0018] 1、细胞培养
[0019] 1.1细胞复苏
[0020] 将冻存管迅速从液氮中取出后立即放入37°c温水中，轻轻晃动冻存管，使冻存物 尽快溶解，将其放入超净工作台中，将其内的细胞悬液移入离心管，再向离心管中加入10 倍rpmi-1640培养液（含10%小牛血清），离心，800rpm/min，离心5~10min，弃上清，细胞 沉淀中加入含10%小牛血清的rpmi-1640培养液，轻摇均匀，置37°c、5% c02浓度的培养 箱中培养。并注明细胞名称及日期。
[0021] 1.2细胞传代培养
[0022] 待sk0v3细胞长至80~90%培养瓶时，弃去原有的培养液，并用配好的pbs洗两 遍；用0. 25%的胰酶消化，放在倒置显微镜下观察，当见细胞回缩、细胞间隙增大、形态变 圆时弃去消化液，加入一定量的培养液中和胰酶消化液，并用吸管轻轻吹打已经消化过的 细胞.，使其脱离培养瓶，800rpm/min离心5min，弃上清；显微镜下在计数板上进行细胞计 数，按1:3比例传代，分装至培养瓶中，再次补充适量培养液后继续培养。注意严格无菌操 作，每天观察细胞生长情况。
[0023] 1. 3细胞冻存
[0024] 取对数生长期的细胞以0.25%的胰蛋白酶消化后离心，pbs洗2次，在低速离心机 上looorpm离心5min，弃上清液，加入lml于-20°c下预冷的含dms0的细胞冻存液，用吸管 吹打均匀后移入冻存管中，用封口膜封口标记后放入4°c静置30min，之后-20°c放置2h后 转入-80°c。一个月内使用的细胞可保存于_80°c中，长期保存者24h后应由-80°c移入液 氮中。细胞的复苏与冻存应遵循的原则为慢冻快融。
[0025] 2、四甲基偶氮蓝（mtt)实验
[0026] (1)选择对数生长期的细胞（生长80-90 % )时，用配好的0.25 %胰酶将细胞 消。化好以后，轻轻地吹打制成单细胞悬液，调整的最终的细胞浓度为8x104/ml; (2) 取3个96孔板，每个时间点1板，100 μ l/孔，每孔细胞数为104做好分组标志；(3)细 胞贴壁后分组，设空白组（不接种细胞）、对照组（只含等量溶剂）及实验组（加不同浓 度的chenopodolin，其终浓度分别为0· 1、1、10、20、30和60 μ mol/l)，每组设6个复孔； ⑷37°c、5%⑶廉件下分别培养24、48和72h ; (5)时间到后，吸去上清液后每孔