levonorgestrel在制备抗卵巢癌产品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种levonorgestrel在制备抗卵巢癌产品 中的应用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是威胁人类健康的最常见也是最严重的一种疾病，研发高效抗肿瘤药物对延 长患者的生存周期至关重要。近年来，随着肿瘤基因组学学和分子药理学的飞速发展，新型 抗肿瘤药物的研发取得了不错的成果，但由于新药研发投入大，周期长等瓶颈无法克服，以 及肿瘤个体遗传变异大等特征，导致许多传统抗肿瘤药物效果不加，新药价格昂贵，副作用 未明。
[0003] barabasi al等研宄者在2011年发表于《nature reviews genetics》的论文中指 出，基于gwas研宄结果和互作组学（interactome)策略开展的分子网络分析有望揭示复杂 疾病新的药物靶点和分子标志物，并最终形成对疾病发病机制和治疗方案全新的认识。更 值得注意的是，药物重定位（drug repositioning)研宄发现，gwas研宄锁定的易感基因及 与其有蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction, ppi)的基因更容易成为药物 间接的靶点，这一发现有助于解释现有药物的作用机制并指导新药的研发。2014年，okada y等研宄者在《nature》上发表的论文中显示gwas研宄结果整合分析得到的类风湿性关节 炎的101个易感基因中有98个目前正用于治疗类风湿性关节炎药物的直接或间接靶标，而 且还通过药物重定位研宄，他们还发现了数十个已获批准用于其他适应症的药物也可用于 治疗类风湿性关节炎。
【发明内容】
[0004] 本研宄正是通过整合癌症组学cosmic version72数据库的癌症基因谱cancer gene census 以及蛋白质相互作用 string version 10 数据库和 drugbankversion4. 2 中 fda批准的药物数据库，获得的候选重定位药物，对肿瘤细胞系进行筛查实验，筛选出新的 抗肿瘤药物。做肿瘤细胞系筛选的候选肿瘤抑制药物见如下：
[0005] nicardipine, promethazine, estrone, levonorgestrelj sunlidacj levonorgestr el,etonogestrelj levonorgestrelj mesalazinejindomethacinj sulfasalazine, balsalaz ide，irbesartan，ibuprofen，isoprenaline，pentosan polysulfate0
[0006] 本发明的一个目的是提供levonorgestrel的新用途。
[0007] 本发明提供的levonorgestrel在制备治疗卵巢癌产品中的应用。
[0008] 本发明的第二个目的是提供levonorgestrel的新用途。
[0009] 本发明提供了 levonorgestrel在制备抑制卵巢癌细胞增殖产品中的应用。
[0010] 本发明的第三个目的是提供levonorgestrel的新用途。
[0011] 本发明提供了 levonorgestrel在制备降低卵巢癌细胞ic50值产品中的应用。
[0012] 上述应用中，所述卵巢癌细胞为sk0v-3。
[0013] 上述应用中，所述产品为药物或试剂盒。
[0014] 本发明的第四个目的是提供一种产品。
[0015] 本发明提供的产品，其活性成分为levonorgestrel ;所述产品具有如下至少一种 功能：
[0016] 1)治疗卵巢癌；
[0017] 2)抑制卵巢癌细胞增殖；
[0018] 3)降低卵巢癌细胞ic50值。
[0019] 上述产品中，所述卵巢癌细胞为sk0v-3。
[0020] 上述产品中，所述产品为药物或试剂盒。
[0021] 本发明的实验证明，本发明对fda, cfda已获批准的药物levonorgestrel进行肿 瘤药物重定位，根据肿瘤不同的细胞系（组织类型）以及突变位点对适应症不是抗肿瘤的 药物进行筛选，发现levonorgestrel抗卵巢癌这种新用途，实现旧药新用。
【附图说明】
[0022] 图1为96孔培养板药筛药物板型分布。
[0023] 图 2 为 levonorgestrel 对卵巢癌敏感；ec50 = 3. 0820 ;ic50 = 3. 3366 ;r2 = 0.9311〇
【具体实施方式】
[0024] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0025] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0026] 下述实施例中待测药物为levonorgestrel，其化学结构式如下：
[0027] 其为drug bank产品，产品目录号为 db00367。
[0028] 下面实施例中的卵巢癌细胞sk0v-3、人肺癌非小细胞nci-h1993和人肺腺癌细胞 nci-h441的出处如下：
[0029] sk0v-3 atcc htb-77
[0030] nci-h1993 atcc crl-5909
[0031] nci-h441 atcc htb-174
[0032] 下面实施例中的主要的仪器及耗材
[0033] dmso (from sigma, cat. no. d4540)
[0034] 96-well 白色底透细胞培养板（from corning, cat. no. 3610)
[0035] celltiter glo 试剂盒（from promega，cat. no. g7573)
[0036] doxorubicin 阳性药（from mce, cat. no. hy-15142)
[0037] fetal bovine serum(from gibco,cat#10099141)
[0038] 100mm 培养皿（from corning, cat#430167)
[0039] rpmi-1640 medium(from gibco,cat#a1049101)
[0040] dmem medium(from gibco,cat#l1995081)
[0041] dmem/f12 medium(from gibco, cat#l1330057)
[0042] emem medium(from gibco, cat#10370021)
[0043] mutidrop 384 细胞分液器（thermo, cat#5840150)
[0044] enspire 多功能读板机（perkin elmer, cat#2300_001m)
[0045] 实施例 i、celltiter-glo 检测 levonorgestrel 抗卵巢癌
[0046] 一、待测孔板的制备
[0047] 1、细胞铺板
[0048] a)配制各个细胞所需完全培养基。
[0049] b)实验开始前，确认标记在ioomrn培养皿上的药筛细胞名字，培养基以及传代时 间，代次等信息，确保实验无误。
[0050] c)贴壁细胞操作参考步骤d)到i)，悬浮细胞操作参考步骤j)到1)。
[0051] d)无菌操作时利用真空泵吸取细胞培养基。
[0052] e)用2ml的无菌pbs溶液润洗细胞表层，再用真空泵吸出pbs废液。
[0053] f)向培养皿轻轻加入 iml 0· 25% (w/v) trypsin-0. 038% (w/v) edta 溶液消化细 胞，轻轻混匀几下，溶液覆盖住细胞表层，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，在细胞将要 脱落时终止胰酶消化作用。
[0054] g)向培养皿中加入5ml 37°c预热好的完全培养基，用移液管轻轻吹打细胞，使其 从培养皿底