一种周细胞靶向nnmt抑制剂在制备抗肿瘤转移药物中的应用
技术领域
1.本发明属于医药领域，特别涉及在制备一种肿瘤周细胞靶向nnmt小分子抑制剂中的应用。
背景技术：
2.周细胞是位于血管外周嵌入在血管基底膜中的一种壁细胞，作为肿瘤血管的“看门人”，在肿瘤转移中发挥重要作用(armulik a,et al.dev cell,2011；21:193-215)。其中，作为肿瘤转移的首要限速步骤，周细胞在原位灶肿瘤细胞渗入血管的调节功能和机制备受关注。近年来越来越多的研究表明，周细胞能通过分泌促转移因子或表型功能改变等促进肿瘤转移(viski,c.,et al.cancer res,2016；76:5313-5325)。因此，从肿瘤周细胞角度研究肿瘤转移的新颖调控机制，并以此为基础发现新的药物靶标，并研发周细胞靶向药物，具有重要意义。烟酰胺n-甲基转移酶(nicotinamide n-methyltransferase,nnmt)是一种烟酰胺代谢酶，能将细胞内甲基供体s-腺苷-l-甲硫氨酸(s-adenosylmethione,sam)的甲基基团转移到烟酰胺(nicotinamide,nam)，从而生s-腺苷-l-高半胱氨酸
3.(s-adenosylhomocysteine,sah)和n1-甲基烟酰胺(n1-methylnicotinamide,nman)(zhang,l.,et al.j histochem cytochem,2021,69:165-176)。已有研究表明，nnmt能通过诱导肿瘤细胞和肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,cafs)的dna(eckert,m.a.,et al.nature,2019；569:723-728)、组蛋白或pp2a低甲基化，上调多种促癌基因的表达并激活促转移信号轴，从而促进肿瘤转移和进展(ulanovskaya,o.a.,et al.nat chem biol,2013；9:300-306)。我们前期研究也发现，过表nnmt能上调肿瘤血管icam-1，vcam-1，col1a1和mmp2的表达水平，提高血管渗漏和降低血流灌注；并且过表达nnmt肿瘤周细胞能通过诱导肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,tams)的招募，增强肿瘤细胞侵袭、迁移以及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,emt)，从而促进肿瘤转移。鉴于nnmt在肿瘤周细胞中的促转移作用，我们制备了一种肿瘤周细胞靶向nnmt小分子抑制剂，有望应用于肿瘤转移的治疗。
技术实现要素：
4.本发明的首要目的在于解决临床上缺乏抗肿瘤转移药物的现有技术难题，通过靶向肿瘤周细胞中的nnmt，抑制肿瘤转移的一种小分子抑制剂的新应用。所述的小分子抑制剂能够靶向周细胞中的nnmt，下调肿瘤血管内皮细胞icam-1，vcam-1，col1a1和mmp2的表达水平，提高血管渗漏和降低血流灌注；并且逆转过表达nnmt肿瘤周细胞所导致的(tumor-associated macrophage,tams)招募，肿瘤细胞侵袭、迁移以及emt，从而抑制肿瘤转移。预示其在制备抑制肿瘤转移的应用前景。
5.本发明的目的通过下述技术方案实现:
6.一种肿瘤周细胞靶向nnmt小分子抑制剂或其药学可接受的盐在制备靶向肿瘤周细胞nnmt小分子抑制剂中的应用，所述的小分子抑制剂的结构如式ⅰ所示：
7.[0008][0009]
所述的小分子抑制剂的命名为s2、s4、s6、s8、s10、s11。
[0010]
所述的肿瘤为结直肠癌和/或胃癌和/或乳腺癌。
[0011]
本发明的作用机理是：小分子抑制剂能够靶向周细胞中的nnmt，下调肿瘤血管内皮细胞icam-1，vcam-1，col1a1和mmp2的表达水平，提高血管渗漏和降低血流灌注；并且逆转过表达nnmt肿瘤周细胞所导致的tams招募，肿瘤细胞侵袭、迁移以及emt，从而抑制肿瘤转移。
[0012]
本发明所述的小分子抑制剂对肿瘤周细胞nnmt所引起的肿瘤转移具有显著抑制活性，体外明显抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所导致的tams招募，肿瘤细胞侵袭、迁移以及emt。
[0013]
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0014]
(1)本发明所述的小分子抑制剂体外抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的肿瘤细胞活性。
[0015]
(2)本发明所述的小分子抑制剂可靶向抑制周细胞nnmt，下调肿瘤血管内皮细胞icam-1，vcam-1，col1a1和mmp2的表达水平，且可抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所导致的tams招募，肿瘤细胞侵袭、迁移以及emt，从而抑制肿瘤转移。
[0016]
图1为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)下调肿瘤周细胞中nnmt,以及下调过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的肿瘤血管内皮细胞icam-1，vcam-1的表达水平分析图。huvecs/tpc
nmvector
和huvecs/tpc
nmnnmt
经不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11处理48小时后，利用qpcr测定各个样品中icam-1，vcam-1表达水平的变化
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组。
[0017]
图2为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的肿瘤相关巨噬细胞thp-1向m2型极化的结果分析图。小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt所诱导的肿瘤相关巨噬细胞thp-1向m2型极化。thp-1/tpc
nmvector
和huvecs/tpc
nmnnmt
经不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11处理48小时后，利用qpcr测定各个样品中m1型和m2型标志物表达水平的变化(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
[0018]
图3为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的中性粒细胞hl-60招募的结果分析图。nnmt小分子抑制剂拮抗肿瘤周细胞所诱导的中性粒细胞hl-60的招募。hl-60/tpc
nmvector
和hl-60/tpc
nmnnmt
经不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11处理48小时后，利用transwell测定各个样品中中性粒细胞hl-60的招募水平的变化(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
[0019]
图4为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞迁移能力的结果分析
图。小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞迁移能力。肿瘤细胞种于上室，下室分别加入0.6ml tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
的培养上清，并于上室分别用不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11处理24小时，利用transwell测定并统计各个样品中迁移过去的细胞数(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
[0020]
图5为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞侵袭能力的结果分析图。小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞侵袭能力。将30μl matrigel和肿瘤细胞种于上室，下室分别加入0.6ml tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
的培养上清，并于上室分别用不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11处理24小时，利用transwell测定并统计各个样品中侵袭过去的细胞数(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
[0021]
图6为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞emt能力的结果分析图。小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞emt的能力。将肿瘤细胞用tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
培养上清处理，并用不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11处理24小时处理48h。利用western blotting测定各个样品中emt marker表达水平的变化(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
[0022]
图7为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌裸鼠原位移植瘤肝转移的结果分析图。小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt所诱导的hct116结直肠癌裸鼠原位移植瘤肝转移。将hct116/tpc
nmvector
和hct116/tpc
nmnnmt
共接种于裸鼠的盲肠浆膜层。待瘤块长至一定大小后，腹腔注射不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11,隔天给药1次，连续给药10次后结束实验。剥取肿瘤组织和肝组织，统计转移灶数目(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
[0023]
图8为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的mda-mb-231乳腺癌裸鼠原位移植瘤肝转移的结果分析图。小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt所诱导的mda-mb-231乳腺癌裸鼠原位移植瘤肝转移。将mda-mb-231/tpc
nmvector
和mda-mb-231/tpc
nmnnmt
共接种于裸鼠的第四对脂肪垫。待瘤块长至一定大小后，尾静脉给不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11,隔天给药1次，连续给药10次后结束实验。剥取肿瘤组织和肝组织，统计转移灶数目(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
[0024]
图9为小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的mgc-803胃癌裸鼠原位移植瘤肺转移的结果分析图。小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt所诱导的mgc-803胃癌裸鼠裸鼠原位移植瘤肝转移。mgc-803/tpc
nmvector
和mgc-803/tpc
nmnnmt
共接种于裸鼠的胃大弯中部浆膜层。待瘤块长至一定大小后，灌胃给不同浓度(a)s2、(b)s4、(c)s6、(d)s8、(e)s10、(f)s11,隔天给药1次，连续给药10次后结束实验。剥取肿瘤组织和肝组织，统计转移灶数目(
***
p《0.001vs tpc
nmvector
组；或者
###
p
《0.001vs tpc
nmnnmt
组)。
具体实施方式
[0025]
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0026]
实施例1.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)下调肿瘤周细胞中nnmt,以及下调过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的肿瘤血管内皮细胞icam-1，vcam-1的表达水平
[0027]
1、试验方法
[0028]
将处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞huvecs消化离心后，按每孔10
×
104个/孔接种到六孔板中，24小时细胞贴壁后，tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
培养上清处理24小时，接着用10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理48h，进行实时荧光定量pcr检测huvecs中icam-1和vcam-1的表达水平。同样的，将处于对数生长期的结直肠癌肝转移的周细胞tpc
lm
消化离心后，按每孔10
×
104个/孔接种到六孔板中，24小时细胞贴壁后，用10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理48小时，进行实时荧光定量pcr检测肿瘤周细胞中nnmt的表达水平。
[0029]
2、试验结果
[0030]
与对照组相比，小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)使肿瘤周细胞中nnmt的表达水平降低；与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使肿瘤血管内皮细胞icam-1，vcam-1的表达水平升高，s11处理后抑制其表达水平，且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图1a)、s4(图1b)、s6(图1c)、s8(图1d)、s10(图1e)相比，s11(图1f)的效果最好。
[0031]
实施例2.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt所诱导的肿瘤相关巨噬细胞thp-1向m2型极化
[0032]
1、试验方法
[0033]
将处于对数生长期的肿瘤相关巨噬细胞thp-1细胞消化离心后，按每孔10
×
104个/孔接种到六孔板中，24小时细胞贴壁后，tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
培养上清处理24小时，接着用10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理48小时，进行实时荧光定量pcr检测thp-1细胞中m1型极化的标志物(tnfα、inos、cd86)和m2型极化标志物(cd206、arg 1、il-10)的表达水平。
[0034]
2.试验结果
[0035]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使thp-1细胞中m1型极化的标志物(tnfα、inos、cd86)表达水平降低，m2型极化标志物(cd206、arg 1、il-10)的表达水平升高；小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理后促进m1型表达水平，而抑制m2型表达水平，且高浓度组的作用强于低浓度组；与s2(图2a)、s4(图2b)、s6(图2c)、s8(图2d)、s10(图2e)相比，s11(图2f)的效果最好。
[0036]
实施例3.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的中性粒细胞hl-60的招募
[0037]
1.试验方法
[0038]
细胞迁移实验使用孔径为3.0μm的24孔transwell小室。将处于对数生长期hl-60细胞消化离心后，按每孔3
×
103个/孔接种到3.0μm的transwell嵌套上室，接种体积100μl；
下室分别加入0.6ml tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
的培养上清，并于上室分别用10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理，每组细胞设3个复孔。24小时后，吸出下室的培养基，加入1ml pbs轻轻地清洗小室，然后用4％多聚甲醛室温固定30分钟，pbs清洗后，染色结束后，用pbs清洗残留染色液，接着用棉签擦去嵌套上室未迁移的细胞。
[0039]
2.试验结果
[0040]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使中性粒细胞hl-60的招募能力增强，小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理后，过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的中性粒细胞hl-60的招募能力减弱，且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图3a)、s4(图3b)、s6(图3c)、s8(图3d)、s10(图3e)相比，s11(图3f)的效果最好。
[0041]
实施例4.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞迁移能力
[0042]
1.试验方法
[0043]
细胞迁移实验使用孔径为8.0μm的24孔transwell小室。将处于对数生长期hct116、mgc-803和mda-mb-231消化离心后，按每孔3
×
103个/孔接种到8.0μm的transwell嵌套上室，接种体积100μl；下室分别加入0.6ml tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
的培养上清，并于上室分别用10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理，每组细胞设3个复孔。24小时后，吸出下室的培养基，加入1ml的pbs轻轻地清洗小室，然后用4％多聚甲醛室温固定30分钟，pbs清洗后，染色结束后，用pbs清洗残留染色液，接着用棉签擦去嵌套上室未迁移的细胞。
[0044]
2.试验结果
[0045]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使hct116(图4)、mda-mb-231(图5)和mgc-803(图6)的迁移能力增强，小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理后，肿瘤细胞的迁移能力减弱，且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图4a、5a、6a)、s4(图4b、5b、6b)、s6(图4c、5c、6c)、s8(图4d、5d、6d)、s10(图4e、5e、6e)相比，s11(图4f、5f、6f)的效果最好。
[0046]
实施例5.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞侵袭能力
[0047]
1.试验方法
[0048]
侵袭实验与迁移实验使用同样的transwell小室。transwell小室内均匀地铺30μl matrigel，于37℃培养箱内静置30分钟待matrigel完全凝固。将处于对数生长期hct116、mgc-803和mda-mb-231，tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
消化离心。pbs清洗两次后用phk67(绿色荧光)标记肿瘤细胞，计数。将标记后的肿瘤细胞(5
×
103)与tpcs(2.5
×
104)混合，重悬于100μl的dmem空白培养基内，并且接种至transwell小室。下室加入dmem完全培养基，并于上室分别用10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理，每组细胞设3个复孔。48小时后，吸出下室的培养基，加入1ml pbs轻轻地清洗小室，重复两次，然后用4％多聚甲醛室温固定30分钟，pbs清洗一次后，用荧光显微镜观察，拍照，用image pro plus软件统计侵袭的肿瘤细胞。
[0049]
2.试验结果
[0050]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使hct116(图4)、mgc-803(图5)和mda-mb-231(图6)的侵袭能力增强，小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)剂处理后，肿瘤细胞的侵袭能力减弱，
且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图4a、5a、6a)、s4(图4b、5b、6b)、s6(图4c、5c、6c)、s8(图4d、5d、6d)、s10(图4e、5e、6e)相比，s11(图4f、5f、6f)的效果最好。
[0051]
实施例6.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌细胞、mda-mb-231乳腺癌细胞和mgc-803胃癌细胞emt的能力
[0052]
1、实验方法
[0053]
将处于对数生长期的hct116、mgc-803和mda-mb-231细胞消化离心后，按每孔15
×
104个/孔接种到六孔板中，24小时细胞贴壁后，利用tpc
nmvector
和tpc
nmnnmt
培养上清处理24小时，接着用10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理48小时。进行western blotting免疫印迹实验，使用自动化学发光凝胶成像分析仪采集信号。
[0054]
2、实验结果。
[0055]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使hct116(图4)、mgc-803(图5)和mda-mb-231的emt(图6)(vimentin)增强，小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理后，肿瘤细胞的emt减弱，且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图4a、5a、6a)、s4(图4b、5b、6b)、s6(图4c、5c、6c)、s8(图4d、5d、6d)、s10(图4e、5e、6e)相比，s11(图4f、5f、6f)的效果最好。
[0056]
实施例7.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的hct116结直肠癌裸鼠原位移植瘤肝转移
[0057]
1、实验方法
[0058]
处于对数生长期的hct116细胞和tpc
nmvector
、tpc
nmnnmt
细胞消化收集后，pbs清洗两次。将肿瘤细胞(4
×
105)与tpc(1.6
×
106)混合后，按照每只小鼠0.2ml体积将细胞悬液接种到5周龄雌性balb/c nude裸鼠的盲肠浆膜层。20天后，小鼠肿瘤发生肝转移。在此期间，待瘤块长至一定大小后，将裸鼠随机分成13组，每组10只，分别为生理盐水组、10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)组,腹腔注射给药。隔天给药1次，连续给药10次后结束实验。剥取肿瘤组织和肝组织。
[0059]
2、实验结果
[0060]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使裸鼠hct116结直肠癌原位移植瘤的肝转移增强；小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理后，裸鼠hct116结直肠癌原位移植瘤的肝转移减弱，且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图7a)、s4(图7b)、s6(图7c)、s8(图7d)、s10(图7e)相比，s11(图7f)的效果最好。
[0061]
实施例8.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的mda-mb-231乳腺癌裸鼠原位移植瘤肺转移
[0062]
1、实验方法
[0063]
处于对数生长期的mda-mb-231细胞和tpc
nmvector
、tpc
nmnnmt
细胞消化收集后，pbs清洗两次。将肿瘤细胞(4
×
105)与tpc(1.6
×
106)混合后，按照每只小鼠0.2ml体积将细胞悬液接种到5周龄雌性balb/c nude裸鼠的第四对脂肪垫。20天后，小鼠肿瘤发生肝转移。在此期间，待瘤块长至一定大小后，将裸鼠随机分成13组，每组10只，分别为生理盐水组、10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)组,尾静脉注射给药。隔天给药1次，连续给药10次后结束实验。剥取肿瘤组织和肺组织。
[0064]
2、实验结果
[0065]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使裸鼠mda-mb-231乳腺癌裸鼠原位移植瘤的肺转移增
强；小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理后，mda-mb-231乳腺癌裸鼠原位移植瘤肺转移显著减少，且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图8a)、s4(图8b)、s6(图8c)、s8(图8d)、s10(图8e)相比，s11(图8f)的效果最好。
[0066]
实施例9.小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)抑制过表达nnmt肿瘤周细胞所诱导的mgc-803胃癌裸鼠原位移植瘤的肝转移
[0067]
1、实验方法
[0068]
处于对数生长期的mgc-803细胞和tpc
nmvector
、tpc
nmnnmt
细胞消化收集后，pbs清洗两次。将肿瘤细胞(4
×
105)与tpc(1.6
×
106)混合后，按照每只小鼠0.2ml体积将细胞悬液接种到5周龄雌性balb/c nude裸鼠的胃大弯中部浆膜层。20天后，小鼠肿瘤发生肝转移。在此期间，待瘤块长至一定大小后，将裸鼠随机分成13组，每组10只，分别为生理盐水组、10μg/ml和50μg/ml的小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)组,灌胃给药。隔天给药1次，连续给药10次后结束实验。剥取肿瘤组织和肝组织。
[0069]
2、实验结果
[0070]
与tpc
nmvector
相比，tpc
nmnnmt
使裸鼠mgc-803胃癌裸鼠原位移植瘤的肝转移增强；小分子抑制剂(s2、s4、s6、s8、s10、s11)处理后，mgc-803胃癌裸鼠原位移植瘤的肝转移减弱，且高浓度组的抑制作用强于低浓度组；与s2(图9a)、s4(图9b)、s6(图9c)、s8(图9d)、s10(图9e)相比，s11(图9f)的效果最好。
[0071]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。